Что такое система протеина С: определение активности. Важный показатель для диагностики — протеин в крови

Ген, ответственный за синтез протеина С, локализован на хромосоме 2 (ql3-ql4). Основная функция этого физиологического антикоагулянта заключается в инактивации основных неферментных факторов свертывания (FVa, FVIlla).

У пациентов, имеющих врожденную недостаточность протеина С, наблюдается склонность к рецидивирующим тромбозам и тромбоэмболиям. Дефицит протеина С наследуется аутосомно, гомозиготы и двойные гетерозиготы погибают в раннем детском возрасте от тромбозов.

Принцип метода

Метод основан на оценке АПТВ смеси (разведенный образец БТП, дефицитная по протеину С плазма, активатор протеина С, АПТВ-реагент). Протеин С исследуемого образца БТП активируют реагентом, полученным из яда щитомордника Agkistrodon contortrix. Активированный протеин С разрушает коагуляционные факторы Va и Villa, содержащиеся в смеси исследуемого образца и добавляемой протеин-С-дефицитной плазмы, за счет чего после добавления кальция хлорида регистрируется удлинение АПТВ. При низкой активности протеина С удлинение АПТВ выражено незначительно. Разведения калибровочного образца БТП позволяют построить кривую и определить активность протеина С.

Реактивы и оборудование

• Активатор протеина С (Protac).
• АПТВ-реагент.
• Дефицитная по протеину С плазма.
• Буферный раствор.
• Образец БТП с известной активностью протеина С.
• Коагулометр.

Образцы крови для исследования

Для определения активности протеина С используют БТП.

Для построения калибровочной кривой необходим образец БТП с известной активностью протеина С. Для построения калибровочного графика используют время свертывания в секундах, полученное при исследовании разведенных калибровочных образцов с известной активностью протеина С.

В клинической картине при врожденном дефиците протеина С доминируют рецидивы венозных тромбозов и тромбоэмболий. У ряда пациентов возникают кожные некрозы, невынашивание беременности и др. У новорожденных, имеющих дефицит протеина С, нередко наблюдается злокачественная пурпура (purpura fulminans).

Приобретенный дефицит протеина С может быть обусловлен недостаточным синтезом гепатоцитами, повышенным расходом вследствие ДВС, лечением непрямыми антикоагулянтами и др. У некоторых пациентов с ВА наблюдается завышение его активности.

Причины ошибок

• Ошибки преаналитического этапа исследования.
• Попадание в исследуемую кровь гепарина из венозного катетера.

Другие аналитические технологии

Функциональную активность протеина С определяют амидолитическими или коагуляционными методиками.

Для определения концентрации протеина С используют ИФА, однако при сравнении результатов иммунологических и функциональных методик наблюдается несовпадение результатов у пациентов с молекулярными аномалиями протеина С.

Активность протеина S

Протеин S - витамин К-зависимый гликопротеид, участвующий в качестве неферментного кофактора активированного протеина С в протеолитической деградации коагуляционных факторов Va и Villa. Ген, ответственный за синтез протеина S, расположен на хромосоме 3 человека в положении pll.l-qll.2. В крови протеин S представлен в двух вариантах: в виде свободного протеина (около 40 %) и в виде связанного с С4Ь-компонентом комплемента (около 60 %). Снижение активности протеина S увеличивает риск развития тромбозов и тромбоэмболий.

Принцип метода

Функциональные методики основаны на учете выраженности удлинения времени свертывания смеси дефицитной по протеину S плазмы и исследуемой плазмы при введении в тест-систему активированного протеина С. Для оценки времени свертывания в подобной тест-системе производители используют разные стимуляторы коагуляции (яд гадюки Рассела, АПТВ-реагент, активированный коагуляционный фактор IX или др.). При нормальном содержании протеина S под влиянием активированного протеина С происходит существенное удлинение времени свертывания (за счет разрушения неферментных факторов коагуляции), тогда как при недостаточности протеина S оно выражено значительно слабее (за счет неэффективного разрушения неферментных факторов активированным протеином С).

Реактивы и оборудование

• Дефицитная по протеину S плазма.
• Активирующий реагент (фосфолипиды, яд гадюки Рассела или иные активаторы, нейтрализатор гепарина и др.)
• Активированный протеин С.
• Раствор кальция хлорида (0,025 М).
• Буферный раствор.
• Образец БТП с известным содержанием протеина S.
• Коагулометр.

Образцы крови для исследования Для определения активности протеина S используют БТП.

Методика определения

Ход определения активности протеина S существенно различается при использовании реагентов и оборудования разных производителей, поэтому последовательность действий врача-лаборанта должна строго соответствовать инструкции к набору реагентов и его адаптации к имеющемуся в лаборатории коагулометру.

Оценка результатов исследования

Исследование времени коагуляции разведенных образцов БТП с известной концентрацией протеина S позволяет построить калибровочную кривую и определить активность этого физиологического антикоагулянта в процентах от нормы.

У здоровых людей активность протеина S находится в диапазоне 60-130 %.

Интерпретация результатов исследования

Врожденный дефицит протеина S - редкий дефект антикоагулянтного звена гемостаза. Первое описание дефицита протеина S было представлено в 1984 г. Н.Р. Schwarz at al. В клинической картине этого заболевания доминируют рецидивирующие флеботромбозы и тромбоэмболии. Как и многие другие дефекты антикоагулянтного звена гемостаза, эта патология передается аутосомно. Принято различать три типа врожденного дефицита протеина S.

Варианты врожденного дефицита протеина S

• Тип: I Коалиционный метод: Снижен; Свободный протеин S: Снижен; Общий протеин S: Снижен.
• Тип: II Коалиционный метод: Снижен; Свободный протеин S: Норма; Общий протеин S: Норма.
• Тип: III Коалиционный метод: Снижен; Свободный протеин S: Снижен; Общий протеин S: Норма.

I тип характеризуется низким содержанием протеина S при использовании разных вариантов его иммунологического определения, а также снижением его функциональной активности. При II типе дефицита наблюдается снижение функциональной активности, однако общая и свободная фракции протеина S не нарушены. III тип проявляется сочетанным снижением функциональной активности протеина S и свободной его фракции. Таким образом, для идентификации типа дефицита протеина S необходимо использовать коагуляционный и иммунологический методы его определения.

В клинической практике гораздо чаще встречается приобретенный дефицит протеина S. Снижение активности протеина S можно обнаружить при нефротическом синдроме, беременности, лечении эстрогенами, L-аспарагиназой и др. У новорожденных с дефицитом протеина S наблюдается злокачественная пурпура (purpura fulminans).

Причины ошибок

• Гепарин из венозного катетера.
• Гемолиз в исследуемом образце крови.
• Неправильная дозировка цитрата при заборе крови.

Другие аналитические технологии Довольно широко распространен метод, основанный на применении ИФА для определения свободного протеина S и связанного с С4Ь-компонентом комплемента. Кроме того, описаны (но не представлены на рынке) функциональные методики определения этого антикоагулянта, основанные на использовании хромогенных субстратов.

Информация об исследовании

Один из важнейших естественных ингибиторов свёртывания (активируемый фактор свертывания XIV). Протеин C проявляет антикоагулянтную (противосвертывающую) активность, ограничивает размеры тромба. Протеин С синтезируется в печени. Активность протеина С зависит от дефицита витамина K и терапии оральными антикоагулянтами. Определение протеина C – дополнительный тест для оценки состояния антикоагулянтной системы крови. Дефицит протеина С связан с высоким риском развития тромбоза (особенно венозного тромбоза и тромбоэмболии легочной артерии). Уровень протеина С у новорождённых и детей младшего возраста физиологически ниже, чем у взрослых. Врождённый дефицит протеина С связан со склонностью к тяжёлым тромботическим нарушениям. Дефицит протеина C связан с повышенным риском осложнений беременности (тромбоз глубоких вен, преэклампсия, внутриутробная задержка развития плода и повторные выкидыши). Отмечается увеличенный риск развития некроза кожи.

Врождённые дефицитные состояния могут быть диагностированы, когда причины приобретённого дефицита протеина C исключены. Рекомендованы повторные тестирования протеина C после прекращения терапии оральными коагулянтами (через месяц после окончания терапии) с обследованием членов семьи. Нарушение активации протеина С возникает при патологических состояниях, связанных с наличием таких факторов как гипоксия, эндотоксин, интерлейкин-1, фактор некроза опухоли альфа, высокий уровень гомоцистеина (все они ускоряют свёртывание, индуцируя экспрессию тканевого фактора и подавляя транскрипцию тромбомодулина эндотелиальными клетками). Особенностью антикоагулянтного действия протеина С является то, что он не оказывает влияния без протеина S, поэтому рекомендуется одновременное определение протеина С и протеина S.

Показания к назначению анализа:

• Подозрение на тромбофилию, в особенности у молодых людей (в комплексе с ислледованиями гемостаза).
• Тромбозы глубоких вен в молодом возрасте.
• Артериальные тромбозы в молодом возрасте.
• Невынашивание беременности.
• В прогностических целях при истощающих коагулопатиях (в т.ч. септических состояниях).
• Перед началом терапии антикоагулянтами непрямого действия.
• Подготовка к беременности.

Особые указания: Не проводить исследование во время острых периодов заболеваний и во время приема антикоагулянтных препаратов(после отмены должно пройти не менее 30 дней). Биоматериал на исследование необходимо сдавать натощак. Между последним приемом пищи и взяытием крови должно пройти не менее 8 часов.

ОБЩИЕ ПРАВИЛА ПОДГОТОВКИ К ИССЛЕДОВАНИЯМ:

1. Для большинства исследований кровь рекомендуется сдавать утром, в период с 8 до 11 часов, натощак (между последним приемом пищи и взятием крови должно пройти не менее 8-ми часов, воду можно пить в обычном режиме), накануне исследования легкий ужин с ограничением приема жирной пищи. Для тестов на инфекции и экстренных исследований допустимо сдавать кровь через 4-6 часов после последнего приема пищи.

2. ВНИМАНИЕ! Специальные правила подготовки для ряда тестов: строго натощак, после 12-14 часового голодания, следует сдавать кровь на гастрин-17, липидный профиль (холестерин общий, холестерин-ЛПВП, холестерин-ЛПНП, холестерин-ЛПОНП, триглицериды, липопротеин (а), аполипо-протен А1, аполипопротеин В); глюкозотолерантный тест выполняется утром натощак после 12-16 часов голодания.

3. Накануне исследования (в течение 24 часов) исключить алкоголь, интенсивные физические нагрузки, прием лекарственных препаратов (по согласованию с врачом).

4. За 1-2 часа до сдачи крови воздержаться от курения, не употреблять сок, чай, кофе, можно пить негазированную воду. Исключить физическое напряжение (бег, быстрый подъем по лестнице), эмоциональное возбуждение. За 15 минут до сдачи крови рекомендуется отдохнуть, успокоиться.

5. Не следует сдавать кровь для лабораторного исследования сразу после физиотерапевтических процедур, инструментального обследования, рентгенологического и ультразвукового исследований, массажа и других медицинских процедур.

6. При контроле лабораторных показателей в динамике рекомендуется проводить повторные исследования в одинаковых условиях – в одной лаборатории, сдавать кровь в одинаковое время суток и пр.

7. Кровь для исследований нужно сдавать до начала приема лекарственных препаратов или не ранее, чем через 10–14 дней после их отмены. Для оценки контроля эффективности лечения любыми препаратами нужно проводить исследование спустя 7–14 дней после последнего приема препарата.

Если Вы принимаете лекарства, обязательно предупредите об этом лечащего врача.

> Анализ крови на протеин С и протеин S

Данная информация не может использоваться при самолечении!
Обязательно необходима консультация со специалистом!

Кровь в кровеносном русле находится в жидком состоянии благодаря наличию так называемой противосвертывающей системы. В эту систему входит большое количество белковых соединений, которые препятствуют образованию внутрисосудистых и ограничивают размеры уже образовавшихся тромбов. Такими белками и являются протеины C и S.

Эти вещества синтезируются в печени и являются зависимыми от витамина К соединениями, то есть их количество и активность зависят от поступления в организм этого витамина.

Главным антикоагулянтом является протеин C. Он нейтрализует активированные Vа и VIIIа факторы свертывания. Протеин S представляет собой кофермент (вспомогательный белок), который усиливает эффект протеина C.

Кто назначает анализ крови на протеины S и C

Направление на данный анализ выписывает врач-гемостазиолог, который занимается проблемами свертывания крови. Анализ назначают, как правило, в составе развернутой программы диагностики тромбофилии. В этом случае обязательно в крови определяют антитромбин III, волчаночный антикоагулянт и проводят генетические исследования.

Показания для исследования уровня протеинов C и S

Этот анализ показан при высоком риске развития тромботических осложнений. Назначают его при артериальных и венозных тромбозах. Женщинам при подготовке к беременности рекомендуется сдать кровь на указанные протеины. Особенно актуально это для тех, у кого имеется склонность к невынашиванию беременности.

Уровень протеина C определяют в прогностических целях больным с тяжелым сепсисом. При разработке схем лечения пациентов непрямыми антикоагулянтами (после операций на сердце или крупных сосудах, после протезирования суставов) врачи непременно проверяют уровень протеинов C и S.

Анализ может быть назначен при жалобах на повышенную кровоточивость из мест инъекций или ссадин, склонность к образованию синяков, при имеющихся в анамнезе случаях закупорки сосудов, при рецидивирующем тромбофлебите вен нижних конечностей.

Как правильно сдать кровь

Специфической подготовки не требуется. Кровь берут из локтевой вены. Не рекомендуется сдавать анализ в острый период заболеваний (при обострении тромбофлебита). Если пациент получал лечение антикоагулянтами, после их отмены следует подождать не менее 30 дней. Женщины не должны сдавать этот анализ во время менструации.

Нормальные уровни протеинов C и S

В норме концентрация протеина C в плазме крови – 70–130 %, свободного протеина S – 65–144 %. У детей до года показатели могут быть ниже в 2–3 раза – 40–90 %. У мужчин содержание протеина S несколько выше, нежели у женщин.

Причины повышения уровня протеинов

Протеин С может повышаться у беременных женщин, а протеин S – во время приема пероральных средств контрацепции. Повышенный уровень показателей не имеет большого клинического значения.

Когда отмечается снижение концентрации протеинов S и C, и к чему это приводит

Снижение уровня этих белков отмечается при врожденном дефиците, связанном с нарушением их синтеза. Из приобретенных заболеваний, приводящих к снижению показателей, следует отметить патологию печени (цирроз или гепатит), ДВС-синдром, нефротический синдром, сепсис, ранний послеродовый или послеоперационный период.

Важное клиническое значение имеет снижение концентрации этих белков у молодых людей с подозрением на тромбоз вен. В этих случаях очень высок риск развития жизнеугрожающих состояний – тромбоэмболии легочной артерии, тромбоза крупных артерий, который может закончиться гангреной.

У пациентов с сепсисом, а у них эти показатели определяют в динамике, снижение концентрации протеинов более чем на 10 % свидетельствует о высоком риске неблагоприятного исхода.

Залог нормального гемостаза состоит в правильном соотношении и противодействии свертывающей и противосвертывающей систем крови. Важнейшим представителем антикоагуляционной системы крови является протеин С, который является важным показателем фибринолитической активности. Его функция состоит в предотвращении избыточного тромбообразования, которое является причиной множества опасных заболеваний, в частности сердечно-сосудистой системы. Для физиологического противодействия свертывающих факторов крови необходимо содержание протеина С в количестве 60-140% , при том, что отклонения от нормы могут привести к серьезным нарушениям в системе гемостаза.

Протеин С представляет собой вещество белковой природы, которое синтезируется в печени при помощи витамина К. В последствии белок поступает в плазму крови, где и обретает свою фибринолитическую активность. Суть противосвертывающего действия указанного белка заключается в воздействии на нерастворимый фибрин, который является так называемым каркасом образующего тромба. При этом протеин С ограничивает размеры самого тромба и препятствует прилипанию клеточных элементом крови к каркасу тромба. Кроме основного фибринолитического действия, протеин С также инактивирует действие некоторых факторов свертываемости, что позволяет предотвратить процесс образования фибринового сгустка в микроциркуляторном русле при патологии мелких капилляров, тем самым предотвращая внутрисосудистое свертывание.

Важно помнить, что антикоагулянт С активируется только при взаимодействии с витамином К, поэтому весьма важно вовремя определить дефицит указанного витамина и предотвратить развитие нежелательных осложнений.

Почему меняется уровень протеина С?

Физиологическое снижение уровня протеина С характерно для новорожденных и детей младшего возраста, так как их печень еще не достаточно сформирована и полноценна для выработки данного белка. Также встречаются случаи врожденной недостаточности описанного фибринолитика, при которой наблюдается патологическое тромбообразование, требующее постоянной диагностики , а также заместительной терапии противосвертывающими лекарственными препаратами. Недостаточная продукция протеина С является весьма опасным симптомом для беременных женщин, так как повышается риск развития таких заболеваний, как тромбоз маточных артерий или сосудов плаценты, который приводит к задержке внутриутробного развития плода. Также дефицит данного антикоагулянта может спровоцировать самопроизвольные прерывания беременности на сроке до 22 недель.

Избыточное количество протеина С или недостаточность свертывающей системы крови, в свою очередь вызывает патологическую кровоточивость, а в тяжелых случаях может привести к массивным кровотечениям даже при незначительных травмах, и, как следствие, состояния, угрожающие жизни.

Потребность человека в пищевых волокнах 20 г/сутки. Таким образом, если в продукте заявлено 3 г/100 г, то это 10 % от суточной потребности. Это не слишком много, но все-таки значимое количество.

Эксперты выяснили, что все проверенные образцы содержат меньше пищевых волокон, чем заявлено на этикетке. Хотя некоторые обещают содержание до 3%, на деле везде — меньше процента. Непонятно, почему производители написали о таком содержании пищевых волокон. Для протеинов это не самый важный показатель. Тем не менее, самые большие расхождения — у двух продуктов из восьми. В маркировке VP laboratory и Dymatize nutrition указано содержание соответственно, в 9 раз и в 6 раз больше фактического.

По расчетному содержанию усвояемых углеводов больше всех проштрафились Elite 100% whey protein (вместо заявленных 2,87% обнаружено 17%) и Beowulf (вместо заявленных 9,33% обнаружено 46%).

Недостоверна информация и по жирам. Фактическое их содержание во всех образцах в несколько раз меньше указанного на этикетках. При заявленных 3-6% образцы содержат максимум 1,48% массовой доли жира. Конечно, прекрасно, что спортсмен получит практически обезжиренный продукт, но этикетка все-таки должна говорить правду. Однако, эти расхождения не критичны, в пределах погрешности.

Более серьезные претензии у экспертов возникли к отсутствию маркировки на русском языке у половины протеинов. Проштрафились Gold standard, Weider Gold whey, Power system, ISOBURN.

И конечно, самые серьезные нарушения, подпадающие под определение фальсификации, выявлены по образцам Dymatize nutrition, RUSSPORT и Pureprotein и связаны с недостоверной информацией о составе и содержании белка.