اقترح كومبس لأول مرة في عام 1942. ويستند RIF على اكتشاف المستضدات في المواد السريرية ، ومستحضرات خلايا الدم ، وما إلى ذلك باستخدام الأجسام المضادة وحيدة النسيلة أو الأمصال التي تحمل علامة الفلوروكروم (RIF المباشر). يمكن اكتشاف الأجسام المضادة (التشخيصية) الأولى باستخدام مصل مضاد للجلوبيولين المناعي المسمى بالفلوروكروم (RIF غير المباشر). هناك تعديلات على RIF للكشف عن الأجسام المضادة للعوامل المعدية في مصل الدم أو الأجسام المضادة في مصل الدم.

ترجع شعبية RIF إلى فعاليته من حيث التكلفة ، وتوافر مجموعة واسعة من مجموعات التشخيص ، وسرعة الحصول على استجابة. اليوم ، يتم استخدام كل من الأمصال متعددة النسيلة والأجسام المضادة أحادية النسيلة الموصوفة بـ fluorescein isothiocyanate (FITC) في هذا التفاعل. لتقليل تلألؤ الخلفية غير المحدد ، تتم معالجة المستحضرات بألبومين مصل الأبقار المسمى بالرودامين أو إيفانز الأزرق.

في أغلب الأحيان ، يتم استخدام RIF للكشف السريع عن العامل الممرض في المواد المرضية. في هذه الحالة ، يتم تحضير مسحة من مادة الاختبار على شريحة زجاجية ، كما هو الحال بالنسبة للفحص المجهري التقليدي. يتم تثبيت المستحضر باستخدام كحول الميثيل أو الأسيتون أو أي مادة كيميائية أخرى مثبتة. يتم تطبيق الأمصال أو الأجسام المضادة أحادية النسيلة التي تحمل علامة FITC على سطح اللطاخة الثابتة (في حالة RIF غير المباشر ، يتم معالجة الدواء أولاً بمصل ضد المستضد المطلوب ، ثم باستخدام الأجسام المضادة المسمى للجلوبيولينات المناعية المستخدمة في المرحلة الأولى). نظرًا لأن RIF هو نوع من التحليل غير المتجانس ، يتم فصل إحدى المراحل عن الأخرى عن طريق الغسيل.

تؤخذ نتائج التفاعل في الاعتبار باستخدام مجهر مضيء ، في النظام البصري الذي يتم فيه تثبيت مجموعة من مرشحات الضوء ، مما يوفر إضاءة المستحضر باستخدام ضوء فوق بنفسجي أو أزرق بنفسجي بطول موجي معين. يقوم الباحث بتقييم طبيعة التوهج وشكل الأشياء وحجمها وموضعها النسبي.

عند ضبط RIF للكشف عن الأجسام المضادة ، يتم تحضير اللطاخات من السلالة المرجعية لمسببات الأمراض. يوضع مصل الاختبار على اللطاخة. إذا كانت تحتوي على الأجسام المضادة المرغوبة ، فإنها ترتبط بمستضدات الخلايا الميكروبية. غسل المستحضر بمحلول منظم يزيل الأجسام المضادة غير المقيدة. ثم يتم علاج الدواء بمصل مضاد للجلوبيولين المناعي البشري. في حالة وجود نتيجة إيجابية للتفاعل ، لوحظ توهج محدد للثقافة المرجعية أثناء الفحص المجهري للطاخة في مجهر الفلورسنت.

العيب الرئيسي لـ RIF هو ذاتيتها.

المعايير الكلاسيكية لخصوصية هذا التفاعل هي:

التشكل المميز وحجم وموقع العامل الممرض في اللطاخة ؛

الطبيعة المحيطية لتوهج الكائن ؛

لون مضان

شدة الاضاءة.

في دراسة الأجسام الكبيرة (المشعرات ، الخلايا البشرية ، الخلايا المصابة بالبكتيريا أو الفيروسات) ، تتيح لك هذه المعايير الحصول على نتيجة موثوقة. في نفس الوقت ، الأجسام الأولية من الكلاميديا ​​والميكوبلازما لها أحجام تقع في حدود دقة المجهر الضوئي. في الوقت نفسه ، من الصعب تقييم مورفولوجيا الكائنات الحية الدقيقة ، ويفقد اللمعان طابعه المحيطي. من الواضح أن المعايير المتبقية ليست كافية لتحديد الكائن الدقيق المرصود بثقة. فيما يتعلق بما سبق ، فإن الطبيعة الذاتية لأخذ رد الفعل في الاعتبار تفرض متطلبات خاصة على مؤهلات الموظفين الذين يجرون الدراسة.

2.2. المقايسة المناعية الفلورية التي تم حلها بالزمن (FIA BP ، Etkins R. et Wallac O. ، 1984)

يعتمد هذا النوع من FIA على مبادئ امتصاص أحد الكواشف على المرحلة الصلبة واستخدام تقنية "السندويتش" ، أي التعرف المزدوج ، على غرار ELISA. ومع ذلك ، فإن الاختلاف المهم في الطريقة هو استخدام مخلّبات اللانثانيد (العناصر الأرضية النادرة اليوروبيوم ، والسماريوم ، والتيربيوم ، والديسبروسيوم) كتسمية. تتمثل مزايا FIA VR في حساسيته العالية ، وتقنية الإعداد المشابهة لـ ELISA ، وإمكانية تحسين كبير للإشارة المفيدة بسبب نسبة الإشارة إلى الضوضاء العالية جدًا. تتألق بطاقة الفلورسنت المحددة بشكل أقوى وأطول من تألق الخلفية. بالإضافة إلى ذلك ، فإن الملصق لديه القدرة على استعادة القدرة على التوهج (للمحاسبة ، يتم استخدام إشعاع الإثارة النبضي لمدة ثانية واحدة - أكثر من 1000 نبضة) ، مما يؤدي إلى تراكم (تضخيم) الإشارة المفيدة. تم تنفيذ النظام الموصوف بواسطة PerkinElmer ، الولايات المتحدة الأمريكية ، تحت اسم Delfia ولديه حساسية تزيد عن 10-17 م في تحديد المستضدات.

2.3 التدفق الخلوي

اقترحه وطوره كونز (1942). بمساعدة الغلوبولين المناعي المحدد المسمى بالفلوروكروم والبكتيرية والفيروسية والمواد المستضدية الأخرى الموجودة في مادة الاختبار (المسحات ، وسائط الأنسجة). عندما يتم دمج الجسم المضاد المسمى مع مستضد جرثومي أو مستضد آخر ، يتم تكوين مركب مضيء ، والذي يتم عرضه تحت مجهر الفلورسنت.

هناك طرق مباشرة وغير مباشرة من التألق المناعي.

طريقة مباشرة. يتم تحضير مسحة من مادة الاختبار ، حيث يتم تطبيق مصل فلورسنت محدد ، وبعد ربط الجسم المضاد بالمستضد ، يتم غسل المصل الزائد ، ويتم فحص المستحضر تحت مجهر الفلورسنت.

الطريقة غير المباشرة (ذات المرحلتين).يتم معالجة اللطاخة المحضرة أولاً بمصل مناعي غير ملوث للمستضد المفترض. بعد ارتباط المستضد بالجسم المضاد ، يتم تطبيق مصل مضاد للأنواع الفلورية (مضاد الجلوبيولين) لحيوان النوع الذي تم الحصول عليه من المصل المناعي غير الملوث على اللطاخة. نتيجة لذلك ، يتم امتصاص المصل الفلوري المضاد للأنواع على معقد الأجسام المضادة للمستضد ، ويتوهج المركب في مجهر مضيء مع ضوء أخضر للسلطة (FIT) أو أحمر (PCX) - fluoresceinioisocyanate و rhodamine sulfochloride.

هناك طريقة غير مباشرة باستخدام مصل مضاد للتكميم.

حاليًا ، يتم استخدام طريقة تمييز الأجسام المضادة باستخدام إنزيمات تشتت الضوء (على سبيل المثال ، بيروكسيداز الفجل) - ELISA بشكل متزايد. يمكن الكشف عن المجمعات المناعية تحت مجهر المجال الضوئي التقليدي.

3. تسمى تفاعلات المستضد مع الخلايا الليمفاوية الحساسة. الخلوية. من أهم طرق التشخيص المناعي باستخدام مظاهر المناعة الخلوية هو تشخيص الحساسية. هذا هو تشخيص الأمراض المعدية باستخدام ردود الفعل التي تكشف عن الحساسية المتزايدة لخلايا وأنسجة الجسم لمسببات الحساسية المعدية المحددة. لإدخال مسببات الحساسية (في الجلد ، تحت الجلد ، على الأغشية المخاطية) ، يستجيب الكائن المصاب برد فعل تحسسي ، والذي يحدث بشكل موضعي (احتقان ، تورم ، وجع) أو عام (اضطهاد ، حمى ، زيادة التنفس وضعف نشاط القلب) الظاهرة. في كائن حي غير مصاب ، لا يتم ملاحظة مثل هذه الظواهر مع إدخال مسببات الحساسية.

تكمن القيمة العملية لتشخيص الحساسية في خصوصيتها العالية ، وإمكانية التشخيص داخل الجسم ، وسهولة التنفيذ ، والقدرة على تحديد المرضى في حالة عدم وجود علامات سريرية.

تستخدم اختبارات الحساسية على نطاق واسع في حالات الرعام ، والسل ، وداء الحمى المالطية (نظير السل) ، والتولاريميا ، والتهاب الأوعية اللمفاوية الوبائية ، والجمرة الخبيثة ، وما إلى ذلك. يتم إطلاق المواد المسببة للحساسية في الجسم (تتكون من البكتيريا في المعلق) والمحلول (مقتطفات من الثقافات البكتيرية). أمثلة:

Mallein هو عبارة عن ترشيح معقم لثقافة مرق تقتل الحرارة من العامل المسبب للرعام ، يتم تطبيقها عن طريق التطبيق على الغشاء المخاطي للعين أو عن طريق حقن s.c.

PPD tuberculin للثدييات و PPD tuberculin للطيور ، ويتكون من بروتينات مترسبة مجففة بالتجميد من ترشيح الثقافة للعامل المسبب لمرض السل البقري والإنسان في الحالة الأولى. PPD tuberculin للطيور هو نظير لـ PPD tuberculin للثدييات ، ولكن يتم تحضيره من سلالات العامل المسبب لمرض سل الطيور. يتم استخدامها بشكل رئيسي في

Brucellin VIEV - سائل براق يحتوي على مواد معينة مستخرجة من البروسيلا ، يتم حقنه في s / c و / c.

التولارين - يمثل معلقًا لميكروبات التولاريميا في محلول ملحي مع إضافة 3٪ من الجلسرين ، ينمو على وسط مغذٍ صلب ، يُقتل بالتسخين. يتم إجراء اختبار معها داخل الجلد والجلد (في البشر).

Anthraxin (يمثل منتج التحلل المائي لسلالة لقاح الجمرة الخبيثة STI-1.

كما تستخدم ظواهر أخرى من المناعة الخلوية. فمثلا، تفاعل تحول انفجار الكريات البيض (RBTL)- تحول الخلايا الليمفاوية الصغيرة إلى أشكال انفجارية قادرة على الانتشار وزيادة تمايز الأنف. تحول الانفجار ويرافقه تغيرات شكلية في الخلايا الليمفاوية. الانفجارات عبارة عن خلايا كبيرة مستديرة الشكل لها نواة كبيرة تحتل معظم السيتوبلازم. تحتوي النواة على العديد من النوى القاعدية الكبيرة ؛ السيتوبلازم للانفجارات حبيبي. تمت دراسة RBTL في مزرعة الخلايا الليمفاوية في المختبر تحت تأثير مستضد يتم تحسس الخلايا الليمفاوية له ، عن طريق العد المباشر للانفجارات في المستحضرات المصبوغة تحت المجهر.

رد فعل تثبيط هجرة البلاعم- يكمن في حقيقة أن الخلايا الليمفاوية للكائن الحي الحساس في وجود مستضد معين في وسط المزرعة تنتج ليمفوكين - وهو عامل يمنع هجرة الضامة.

وآخرون (اقرأ بنفسك): ظاهرة تشكل الوردة ، تشكل البلاك.

تكاثر فيروس البوم

يختلف أسلوب تكاثر الفيروسات أيضًا عن الانقسام ، أو التبرعم ، أو التبويغ ، أو العملية الجنسية التي تحدث في الكائنات أحادية الخلية ، وفي خلايا الكائنات متعددة الخلايا ، وفي الأخير بشكل عام. يحدث التكاثر ، أو التكاثر ، كما تشير الفيروسات عادةً ، بشكل منفصل (المصطلح الأخير الآن ضمنيًا في كثير من الأحيان أكثر من استخدامه). يحدث تكوين الفيريونات إما عن طريق التجميع الذاتي (تعبئة الحمض النووي الفيروسي في قفيصة بروتينية وتشكيل nucleocapsid بهذه الطريقة) ، أو بمشاركة الخلية (بعض لاقمات الميكوبلازما المحتوية على دهون) ، أو عن طريق كلا الطريقتين (الفيروسات المغلفة). بطبيعة الحال ، فإن التعارض بين انقسام الخلايا الانقسامية والتكاثر ليس مطلقًا ، لأن طرق تكرار المادة الوراثية للخلية والفيروسات المحتوية على الحمض النووي لا تختلف اختلافًا جوهريًا ، وإذا أخذنا في الاعتبار أن تركيب المادة الوراثية في يتم أيضًا تنفيذ الفيروسات المحتوية على الحمض النووي الريبي وفقًا لنوع القالب ، ثم يكون النسبي هو معارضة الانقسام الفتيلي وتكرار جميع الفيروسات. ومع ذلك ، فإن الاختلافات في طرق تكاثر الخلايا والفيروسات كبيرة لدرجة أنه من المنطقي تقسيم العالم الحي بأكمله إلى فيروسات وغير فيروسات.

العديد من المفاهيم الأخرى التي تعتبر "سمات" للكائنات ، وقبل كل شيء ، المفاهيم الأساسية مثل "الفرد" ، "السكان" ، "الأنواع" لا تنطبق على الفيروسات.

من المعتاد تفسير مفهوم "الفيريون" كفرد فيروسي ، على الرغم من أن الفيروس ليس سوى مرحلة معينة في حياة الفيروس ، وهو فقط المرحلة التي لا يظهر فيها الفيروس نشاطًا حيويًا. لذلك ، تم اقتراح تسمية هذه المرحلة من وجود الفيروس بـ virospore. وفي الوقت نفسه ، هناك عدة مجموعات من الفيروسات لا يكون الجينوم فيها مجزأًا فقط (يحدث هذا أيضًا في الخلايا حقيقية النواة ، التي يكون جينومها منفصلاً ويوجد كمجموع من الكروموسومات) ، ولكن شظاياها المختلفة منفصلة وتقع في جزيئات مختلفة. يظهر الفيروس خصائص معدية فقط عندما يدخل مجموعة كاملة من الجسيمات غير المتجانسة ، وعددها في فيروسات النبات 2-4 ، وفي بعض فيروسات الحشرات يصل إلى 28. ما هو الفرد الفيروسي في هذه الحالات ، حتى عند المفهوم من "virion" لا يمكن تطبيقها؟

بالانتقال إلى تحليل النشاط الحيوي النشط للفيروس ، والذي تم تقليصه تمامًا إلى تكاثره ، نجد أن مكان الفيروس الذي اخترق الخلية احتل إما بحمضه النووي العاري (على سبيل المثال ، في شلل الأطفال الفيروس) ، أو مركب البروتين النووي (على سبيل المثال ، في فيروس الأنفلونزا) ، أو هياكل التخريب الأكثر تعقيدًا (على سبيل المثال ، في الفيروسات reovirus). ثم يحدث تخليق جزيئات ابنة الجينوم الفيروسي. في العديد من الفيروسات المحتوية على الحمض النووي ، لا تشبه هذه العملية تخليق الحمض النووي الخلوي للكروموسومات فحسب ، بل يتم توفيرها أيضًا إلى حد كبير ، وأحيانًا بشكل كامل تقريبًا ، عن طريق الإنزيمات الخلوية. علاوة على ذلك ، لا يحدث هذا فقط في تكوين فيروسات بسيطة وصغيرة (فيروسات بابوفا ، فيروسات بارفو) ، ولكن أيضًا في تخليق فيروسات معقدة ذات جينوم كبير (فيروسات الهربس ، الفيروسات القزحية) ، حيث يتم تحفيز نسبة معينة من تخليق الحمض النووي عن طريق الإنزيمات الخاصة بهم. بالكاد يمكن وصف وسيطة النسخ المتماثل الناتجة على أنها أفراد فيروسية: فهي قوالب يتم فيها تصنيع نسخ عديدة من جينومات الفيروس الابنة. في الفيروسات ذات الجينوم في شكل الحمض النووي الريبي أحادي الشريطة ، إما أنها لا تعني شيئًا إعلاميًا ، أي أنها لا تشفر البروتينات الخاصة بالفيروسات (فيروسات ذات قطبية جينوم إيجابية) ، أو على العكس من ذلك ، تحتوي على جينات للفيروس. البروتينات ، لأن virion RNA ليس له خصائص تشفير.

إلى جانب الدورة الإنتاجية ، يمكن لبعض الفيروسات المحتوية على الحمض النووي (العاثيات المعتدلة ، وفيروسات البابوفا ، وفيروس التهاب الكبد B ، وما إلى ذلك) أن تدخل في تفاعل تكاملي مع الجينوم الخلوي ، وتتكامل معه وتتحول إلى مجموعة من الجينات الخلوية التي تنتقل إلى الخلايا المتحدرة (في حقيقيات النوى) وفقًا لقوانين مندليف. في هذه الحالة ، فإن الجينوم الفيروسي المتكامل ، الذي يُشار إليه بالفيروس ، هو في الواقع مجموعة من الجينات الخلوية. إذا حدثت طفرة في أحد الفيروسات التي تجعل من المستحيل "قطع" الجينوم الفيروسي من الجينوم الخلوي ، فإن مثل هذا الفيروس الطاهر المعيب يمكن أن يصبح إلى الأبد جزءًا لا يتجزأ من الجينوم. تسمح لنا العديد من البيانات باستنتاج أن جينومات البروتينات وحقيقيات النوى تحتوي على جينات متكاملة أو جينومات لفيروسات كانت مستقلة سابقًا.

هناك مجموعة كبيرة من الفيروسات القهقرية المحتوية على الحمض النووي الريبي والتي يتم فيها تصنيع الحمض النووي التكميلي على مصفوفة جينومها. يتم دمجه (إدخال تساهميًا) في الجينوم الخلوي في شكل DNA مزدوج الشريطة وفي هذا الشكل هو قالب لتخليق جزيئات ابنة من virion RNA و mRNA لتخليق البروتينات الفيروسية. في كلتا الحالتين (فيروسات قابلة للتكامل تحتوي على الحمض النووي ، الفيروسات القهقرية) ، يتشكل طاهر الفيروس بهذه الطريقة ليصبح مجموعة من الجينات الخلوية.

توضح هذه الحقائق والأمثلة بوضوح الأطروحة حول عدم قابلية تطبيق مفهوم الفرد للفيروسات.

لا ينطبق مفهوم السكان على الفيروسات أيضًا ، نظرًا لأن مرحلة التكاثر داخل الخلايا ، وحتى عمليات التكامل ، تحرم تمامًا تفسير تكاثر الفيروس كمجموعة سكانية. يضاف إلى ذلك بيانات عن الجسيمات المعيبة المتداخلة التي "تصاحب" تقريبًا كل عدوى فيروسية. هذه الجسيمات عبارة عن فيريونات ذات جينوم غير مكتمل ، لذا فهي غير قادرة على التكاثر. ومع ذلك ، فإنها تلعب دورًا بيولوجيًا مهمًا في ضمان استمرار وجود الفيروسات في الكائنات الحية المصابة أو في مزارع الأنسجة. وبالتالي ، فإن "السكان" الفيروسي يمثل غالبًا مجموع الفيروسات الكاملة والتكوينات المعيبة ، أي المواد الميتة بالفعل. هذا النوع من "السكان" ، المكون من أفراد أحياء وأموات ، من المستحيل حتى تخيله في عالم الكائنات الحية. في بعض الحالات ، يمكن أن يؤدي مجموع الجسيمات المعيبة ذات العيوب في أجزاء مختلفة من الجينوم إلى تطور عدوى فيروسية (ظاهرة إعادة التنشيط المتعددة).

بطبيعة الحال ، إذا لم يكن هناك أفراد ، ولا مجتمع ، فمن الصعب تقديم مفهوم الأنواع. سيتم دعم هذا الاستنتاج من خلال اعتبارات حول أصل وتطور الفيروسات. ومع ذلك ، وجدت هذه المفاهيم تطبيقًا في علم الفيروسات. نحن نتحدث عن مجموعات مختلفة من الفيروسات في الحياة الواقعية على مستوى كل من الكائنات المصابة والمجموعات المضيفة للفيروسات ، ويستند التصنيف الحديث المعترف به دوليًا للفيروسات إلى تحديد الأنواع والأجناس وحتى العائلات واستخدام التسميات ذات الحدين ، وهو مقبول لجميع الممثلين الآخرين للعالم العضوي. وهذه ليست متعة خالصة ، ولكنها مناهج منهجية مثبتة نظريًا ومفيدة عمليًا. سنعود إلى شرح هذه المفارقات فيما بعد.

إذا لم تكن الفيروسات كائنات حية ، فما هي إذن؟ للإجابة على هذا السؤال ، من الضروري تحديد نطاق الهياكل البيولوجية التي يمكن تصنيفها على أنها فيروسات. يكون هذا أمرًا سهلاً عندما يتعلق الأمر بالفيروسات الشائعة المعترف بها عمومًا ، مثل فيروسات الجدري أو MS2 phage. , على الرغم من حقيقة أن أولهما يحتوي على جينوم - DNA بوزن جزيئي يصل إلى 240 10 6 ، والثاني - RNA بوزن جزيئي يبلغ حوالي 1.2 10 6. الاختلافات بين هذه الفيروسات ربما لا تقل أهمية ، على سبيل المثال ، بين الإشريكية القولونية والفيل ، أو على الأقل أي خلية من هذا الحيوان. ومع ذلك ، فإن عالم الفيروسات أكثر ثراءً ، إن لم يكن مقصورًا على الفيروسات المعدية المعترف بها عمومًا.

لا شك أن الفيروسات المعيبة يجب أن تُدرج أيضًا ضمن الفيروسات. العديد من الفيروسات القهقرية المسرطنة معيبة ، لأن اكتسابها للجينات المشفرة للجينات الورمية غالبًا ما يكون مصحوبًا بتقسيمات جينات أخرى. في حالة وجود فيروسات مساعدة كاملة ، عادة ما تكون قريبة من كونها معيبة بيولوجيًا ، يمكن للفيروس المعيب إما أن يتكاثر (إذا لم يكن به عيب في جين البوليميراز) أو يستخدم بروتينات الفيروس المساعد (إذا كان به عيوب في الجينات للبروتينات الداخلية أو المغلفة). ربما استخدام بروتينات فيروسات بعيدة بيولوجيًا: إذا كان الفيروس المعيب ، من حيث بروتينات الغلاف ، ينتشر في وجود فيروس التهاب الفم الحويصلي ، فسيكون للفيروسات الغلاف الخارجي لهذا الأخير. ومع ذلك ، ليس من الضروري حتى أن يكون أحد الفيروسات معيبًا: مع العدوى المختلطة ، تشكل العديد من الفيروسات فيريونات ، يكون جينومها مغلقًا في أغلفة فيروس آخر.

البلازميدات ، أو كما كان يُطلق عليها ، الحلقات ، عوامل الوراثة خارج الصبغية ، "تقترب" من الأقمار الصناعية. هذه صغيرة نسبيًا ، عادةً بوزن جزيئي أقل من 10 7 ، جزيئات دائرية ، وغالبًا ما تكون خطية ، جزيئات الحمض النووي التي توجد غالبًا في الخلايا البكتيرية. يؤدون وظائف مختلفة حسب جيناتهم: السموم التي تقتل الحشرات. الجينات التي تسبب نمو الورم في النباتات. الإنزيمات التي تدمر أو تعدل المضادات الحيوية ؛ عامل الخصوبة - في الواقع تحفيز العملية الجنسية في البكتيريا - تبادل الجينات بين كروموسومات اثنين من البكتيريا. تم العثور على مواد قتل (RNA مزدوج الشريطة) في الخميرة ، حيث يتم "ترميز" السموم التي تقتل خلايا الخميرة التي لا تحمل مواد قاتلة. تتميز البلازميدات باختلافين رئيسيين عن الفيروسات ، بما في ذلك الفيروسات المعيبة ، والأقمار الصناعية: جيناتها لا ترمز لتخليق البروتينات التي يتم فيها تعبئة الأحماض النووية ، ويتم توفير تكاثرها بواسطة الخلية. عادة ما توجد البلازميدات في الشكل الحر في السيتوبلازم ، ولكن يمكن دمجها في جينوم الخلية الحاملة ، ويمكن أيضًا تحرير الأخيرة منها. لا توجد حدود حادة بين البلازميدات والفيروسات العادية. وبالتالي ، من الواضح أن بعض البلازميدات هي مشتقات من العاثيات ، حيث فقدت معظم جيناتها واحتفظت بقليل منها فقط. يمكن أن يستمر عدد من الفيروسات ، على سبيل المثال ، فيروس الورم الحليمي البقري ، لفترة طويلة في شكل بلازميدات - جزيئات DNA عارية. يمكن أن تستمر فيروسات الهربس في شكل بلازميدات مع جينوم محذوف بالكامل أو جزئيًا. مع تطور الهندسة الوراثية ، أصبح من الممكن الحصول بشكل مصطنع على البلازميدات من الحمض النووي الفيروسي ، وإدخال الجينات الأجنبية في البلازميدات ، وحتى تكوين البلازميدات بشكل مصطنع من أجزاء من الحمض النووي الخلوي.

أشباه الفيروسات هي العوامل المسببة للأمراض النباتية المعدية. وهي لا تختلف اختلافًا كبيرًا عن الأمراض الفيروسية العادية ، ولكنها ناجمة عن هياكل غريبة - جزيئات RNA دائرية صغيرة (الوزن الجزيئي 120،000-160،000) فائقة الالتفاف. في جميع النواحي الأخرى ، هذه أمراض فيروسية نموذجية مع بعض المظاهر ، العدوى أثناء الانتقال الميكانيكي ، وتكاثر أشباه الفيروسات في الخلايا المصابة.

أخيرًا ، فإن أمراض الحيوان (الأغنام والماعز) والبشر (مرض كورو ومرض كروتزفيلد جاكوب) ، التي يتم التعبير عنها في تطور اعتلال الدماغ الإسفنجي ، تشبه الالتهابات الفيروسية. يُعتقد أن هذه الأمراض ناتجة عن جينات خارجة عن السيطرة تقوم بترميز البروتينات ، والتي هي نتاجها ومشتقاتها ، وسبب الضرر المميز للخلايا العصبية.

لقد تم إثبات وإثبات إمكانية التطور التنكسي بشكل متكرر ، ولعل أبرز مثال على ذلك هو أصل بعض عضيات الخلية حقيقية النواة من البكتيريا التكافلية. في الوقت الحاضر ، بناءً على دراسة تماثل الأحماض النووية ، يمكن اعتبار أن البلاستيدات الخضراء للبروتوزوا والنباتات تنشأ من أسلاف البكتيريا الزرقاء والخضراء الحالية ، والميتوكوندريا من أسلاف البكتيريا الأرجواني. كما تمت مناقشة إمكانية أصل المريكزات من تكافلات بدائية النواة. لذلك ، لا يتم استبعاد مثل هذا الاحتمال بالنسبة لأصل الفيروسات ، خاصة تلك الكبيرة والمعقدة والمستقلة مثل فيروس الجدري.

ومع ذلك ، فإن عالم الفيروسات متنوع للغاية بحيث لا يمكن الاعتراف بإمكانية حدوث مثل هذا التطور التنكسي العميق لمعظم ممثليها ، من الجدري والهربس والفيروسات القزحية إلى الأدينوساتيلايت ، من الفيروسات المتكررة إلى الأقمار الصناعية لفيروس نخر التبغ أو فيروس دلتا المحتوي على الحمض النووي الريبي. - القمر الصناعي لفيروس التهاب الكبد في،ناهيك عن الهياكل الوراثية المستقلة مثل البلازميدات أو أشباه الفيروسات. يعد تنوع المادة الوراثية في الفيروسات إحدى الحجج المؤيدة لمنشأ الفيروسات من الأشكال الخلوية. وبالفعل ، فإن المادة الجينية للفيروسات "تستنفد" جميع أشكالها الممكنة: الحمض النووي الريبي المفرد والمزدوج الشريطة ، وأنواعها الخطية والدائرية والمتشظية. لقد جربت الطبيعة ، كما كانت ، جميع المتغيرات المحتملة للمواد الجينية على الفيروسات قبل أن تختار أخيرًا أشكالها الأساسية - الحمض النووي المزدوج الشريطة كحافظ للمعلومات الجينية و RNA أحادي الشريطة كمرسل لها. ومع ذلك ، فإن تنوع المادة الوراثية في الفيروسات هو دليل على وجود أصل متعدد الخلايا للفيروسات أكثر من كونه دليلًا على الحفاظ على أشكال أسلاف ما قبل الخلوية ، والتي تطور جينومها على طول مسار غير محتمل من RNA إلى DNA ، من أشكال مفردة تقطعت بهم السبل إلى مضاعفة. - أشكال محددة ، إلخ.

بدت الفرضية الثالثة من 20 إلى 30 عامًا غير مرجحة ، بل إنها تلقت اسمًا ساخرًا لفرضية الجين المسعور. ومع ذلك ، فإن الحقائق المتراكمة تقدم المزيد والمزيد من الحجج لصالح هذه الفرضية. سيتم مناقشة عدد من هذه الحقائق في جزء خاص من الكتاب. نلاحظ هنا أن هذه الفرضية هي التي تشرح بسهولة ليس فقط أصل الفيروسات الواضحة تمامًا ، ولكن أيضًا القواسم المشتركة بين هذه الهياكل المتنوعة مثل الفيروسات الكاملة والمعيبة ، والأقمار الصناعية والبلازميدات ، وحتى البريونات. ويترتب على هذا المفهوم أيضًا أن تكوين الفيروسات لم يكن حدثًا لمرة واحدة ، ولكنه حدث عدة مرات ويستمر في الحدوث في الوقت الحاضر. بالفعل في العصور القديمة ، عندما بدأت الأشكال الخلوية في التكون ، تم الحفاظ على الأشكال غير الخلوية ، الممثلة بالفيروسات ، والتركيبات الوراثية المستقلة ، ولكن المعتمدة على الخلايا ، وتطويرها جنبًا إلى جنب معها. الفيروسات الموجودة حاليًا هي نتاج التطور ، سواء من أسلافها الأقدم أو الهياكل الوراثية المستقلة التي ظهرت مؤخرًا. من المحتمل أن العاثيات الذيل هي مثال على الأولى ، بينما تعد البلازميدات R مثالًا على الثانية.

الموقف الرئيسي للنظرية التطورية لتشارلز داروين هو الاعتراف بالصراع من أجل الوجود والانتقاء الطبيعي كقوى دافعة للعملية التطورية. استكملت اكتشافات G.Mendel والتطور اللاحق لعلم الوراثة الأحكام الرئيسية للنظرية التطورية بعقيدة التباين الوراثي ، الذي له طابع عشوائي عشوائي ، على وجه الخصوص ، الطفرات وإعادة التركيب ، وهي "مادة" الانتقاء الطبيعي . أدى التطور اللاحق لعلم الوراثة الجزيئي إلى تجسيد مفهوم الجين والأسس الكيميائية للطفرات وإعادة التركيب ، بما في ذلك الطفرات النقطية ، والإدخال ، والحذف ، وإعادة الترتيب ، وما إلى ذلك. ومع ذلك ، فقد لوحظ بحق أن علم الوراثة الجزيئي يشرح جيدًا فقط عمليات التطور الجزئي بشكل أساسي. داخل العالم وشرح بشكل سيئ عمليات التطور الكلي - تشكيل مجموعات تصنيفية كبيرة ، والتي هي أساس التطور التدريجي.

لشرح الأساس الجزيئي لهذه العمليات ، وكذلك معدل التطور الفعلي ، تم اقتراح نظرية الجين وتضاعف الجينوم. يتوافق هذا المفهوم مع الحقائق المرصودة ويفسر بشكل جيد تطور العالم العضوي على الأرض ، على وجه الخصوص ، ظهور الفقاريات (الحبليات) وتطورها الإضافي من غير الجمجمة البدائية إلى البشر. لذلك ، سرعان ما اكتسب هذا المفهوم قبولًا بين علماء الأحياء الذين يدرسون الأساس الجزيئي للتطور.

إلى جانب ذلك ، تراكم عدد كبير من الحقائق التي تشهد على وجود في الطبيعة على نطاق واسع من تبادل كتل جاهزة من المعلومات الجينية ، بما في ذلك بين ممثلي مختلف الفيروسات البعيدة تطوريًا. نتيجة لمثل هذا التبادل ، يمكن للخصائص الوراثية أن تتغير بسرعة وبشكل مفاجئ عن طريق تضمين جينات أجنبية (استعارة وظيفة جينية). يمكن أن تنشأ أيضًا صفات وراثية جديدة بسبب مزيج غير متوقع من الجينات الخاصة والمتكاملة (ظهور وظيفة جديدة). أخيرًا ، تفتح الزيادة البسيطة في الجينوم على حساب الجينات الخاملة إمكانية تطور الأخير (تكوين جينات جديدة).

دور خاص في توفير هذه العمليات ينتمي للفيروسات - الهياكل الوراثية المستقلة ، بما في ذلك الفيروسات التقليدية والبلازميدات. تم التعبير عن هذه الفكرة بعبارات عامة ، ثم تم تطويرها بمزيد من التفصيل [Zhdanov V. M.، Tikhonenko T. I.، 1974].

تكاثر فيروسات الحمض النووي. دورة النسخ المتماثل للفيروسات المحتوية على الحمض النووي. تكاثر فيروسات البابوفا. تكاثر فيروسات الغد.

الفيروسات خالية من supercapsid(على سبيل المثال ، الفيروسات الغدية) تخترق الخلايا عن طريق viropexis ، ولها واحد (جدري وفيروس الهربس) - بسبب اندماج supercapsid مع غشاء الخلية. تشمل الدورة التناسلية للفيروسات المحتوية على الحمض النووي المراحل المبكرة والمتأخرة (الشكل 5-4). في فيروسات الحمض النووي الكبيرة ، هناك تناقض واضح بين قدرة الترميز للجينوم والوزن الجزيئي للبروتينات التي يسببها الفيروس والبروتينات التي تشكل الفيروسات. على سبيل المثال ، في فيروسات الهربس ، يشفر 15٪ فقط من الحمض النووي جميع بروتينات الفيروسات وسلائفها. من الممكن أن يحتوي جزء كبير من الجينوم على جينات ترميز تخليق الإنزيمات والبروتينات المنظمة. تتكاثر فيروسات Papova- و adeno- و herpesvirus بشكل موحد نسبيًا ، في حين أن تكاثر فيروسات الجدري له بعض الميزات.

مرحلة مبكرة من التكاثر. الحمض النووي الفيروسيتخترق نواة الخلية ، حيث يتم نسخها بواسطة بوليميراز الحمض النووي الريبي المعتمد على الحمض النووي الخلوي. في هذه الحالة ، يُقرأ جزء من الجينوم الفيروسي ("الجينات المبكرة") ثم يُترجم. نتيجة لذلك ، يتم تصنيع "البروتينات المبكرة" (البروتينات التنظيمية والبروتينات المصفوفة للبوليميراز الفيروسي).

البروتينات المنظمةأداء وظائف مختلفة. عندما تصاب الخلية ، فإنها تمنع تخليق الحمض النووي الريبي الخلوي والحمض النووي والبروتين وتعزز في نفس الوقت التعبير عن الجينوم الفيروسي عن طريق تغيير خصوصية استجابة البوليميرات الخلوية والبوليبوزومات. كما أنها تؤدي إلى تكرار الحمض النووي الخلوي المعدل بواسطة جينومات الحمض النووي المضمنة التي تحتوي على فيروسات وفيروسات قهقرية ، أي تكاثر الجينومات الفيروسية. البوليمرات الخاصة بالفيروسات. يتضمن تكاثر الجينومات الفيروسية أيضًا بوليمرات DNA خاصة بالفيروس تشارك في تكوين جزيئات الحمض النووي للمجموعات البنت.

بروتينات المصفوفةضروري لتكاثر الحمض النووي وتجميع السكان البنات. إنها تشكل مجموعات كثيفة الإلكترون في الخلية ، تُعرف باسم أجسام التضمين (على سبيل المثال ، أجسام Guarneri في الجدري).

المرحلة الإنجابية المتأخرة. في هذه المرحلة ، يحدث تخليق الأحماض النووية للفيروس. لا يتم تغليف كل الحمض النووي الفيروسي المُصنَّع حديثًا في فيريونات السكان البنات. يستخدم جزء من الحمض النووي ("الجينات المتأخرة") لتخليق "البروتينات المتأخرة" اللازمة لتجميع الفيروسات. يتم تحفيز تكوينها بواسطة بوليميراز خلوي فيروسي ومعدّل.

فيروسات البابوفا والفيروسات الغدية. تكاثر فيروسات البابوفا. تكاثر فيروسات الغد.

الامتزاز، الاختراق ونزع البروتينات مماثلة لتلك الموجودة في فيروسات الحمض النووي الريبي ، ولكن في بابا- و الفيروسات الغديةيحدث نزع البروتين في النواة ، بينما يحدث في فيروسات الحمض النووي الريبي في السيتوبلازم.

مرحلة الإنجاب المبكرة. يتم نسخ الحمض النووي الفيروسي ("الجينات المبكرة") في نواة الخلية. على أحد خيوط الحمض النووي ، يتحقق نسخ mRNA الفيروسي "المبكر". تشبه آليات نسخ الحمض النووي الفيروسي قراءة المعلومات من الحمض النووي الخلوي. يتم ترجمة mRNA المحدد ، ويبدأ تركيب الإنزيمات اللازمة لتكوين نسخ ابنة من الحمض النووي. يمكن زيادة تخليق الحمض النووي الخلوي مؤقتًا ، ولكن بعد ذلك يتم تثبيته بالضرورة بواسطة البروتينات المنظمة للفيروس.

المرحلة المتأخرة من التكاثر. خلال المرحلة المتأخرة ، يستمر نسخ الحمض النووي الفيروسي الابنة بنشاط بواسطة بوليميراز الحمض النووي الريبي الخلوي ، مما ينتج عنه منتجات توليفات متأخرة خاصة بالفيروس. يهاجر الرنا المرسال "المتأخر" إلى السيتوبلازم ويترجم على الريبوسومات. نتيجة لذلك ، يتم تصنيع بروتينات قفيصة من السكان الابنة ، والتي يتم نقلها إلى النواة وتجميعها حول جزيئات DNA الابنة لجزيئات فيروسية جديدة. ويقترن إطلاق مجموعات البنات الكاملة بموت الخلايا.

فترة أوليةيشمل مراحل امتزاز الفيروس على الخلية ، والاختراق في الخلية ، والتفكك (نزع البروتين) أو "نزع الملابس" من الفيروس. تم تسليم الحمض النووي الفيروسي إلى الهياكل الخلوية المناسبة ، وتحت تأثير إنزيمات الخلايا الليزوزومية ، يتم إطلاقه من طبقات البروتين الواقية. نتيجة لذلك ، يتم تكوين بنية بيولوجية فريدة: تحتوي الخلية المصابة على جينومين (خاص وفيروسي) وجهاز واحد اصطناعي (خلوي) ؛

بعد ذلك يبدأ المجموعة الثانيةعمليات تكاثر الفيروسات ، بما في ذلك معدلو الفترات النهائية ،أثناء حدوث قمع للجينوم الخلوي والتعبير عن الجينوم الفيروسي. يتم توفير قمع الجينوم الخلوي من خلال البروتينات المنظمة ذات الوزن الجزيئي المنخفض مثل الهستونات ، والتي يتم تصنيعها في أي خلية. مع العدوى الفيروسية ، يتم تحسين هذه العملية ، والآن تكون الخلية عبارة عن بنية يتم فيها تمثيل الجهاز الوراثي بواسطة الجينوم الفيروسي ، ويتم تمثيل الجهاز الاصطناعي بواسطة الأنظمة الاصطناعية للخلية.

2. يتم توجيه المسار الإضافي للأحداث في الخليةلتكاثر الحمض النووي الفيروسي (توليف مادة وراثية لفيروسات جديدة) و تنفيذ المعلومات الجينية الواردة فيه (تخليق مكونات البروتين للفيريونات الجديدة). في الفيروسات المحتوية على الحمض النووي ، سواء في الخلايا بدائية النواة أو حقيقية النواة ، يحدث تكرار الحمض النووي الفيروسي بمشاركة بوليميراز الحمض النووي المعتمد على الحمض النووي الخلوي. في هذه الحالة ، تتشكل الفيروسات المحتوية على DNA وحيدة السلسلة أولاً مكملحبلا - ما يسمى بالشكل التكراري ، والذي يعمل كقالب لجزيئات الدنا الوليدة.

3. تنفيذ المعلومات الجينية للفيروس الواردة في الحمض النووي ، يحدث مثل هذا:بمشاركة بوليميراز الحمض النووي الريبي المعتمد على الحمض النووي ، يتم تصنيع الرنا المرسال ، والذي يدخل ريبوسومات الخلية ، حيث يتم تصنيع البروتينات الخاصة بالفيروس. في الفيروسات المزدوجة المحتوية على الحمض النووي ، والتي يتم نسخ جينومها في سيتوبلازم الخلية المضيفة ، يكون هذا هو البروتين الجيني الخاص بها. تستخدم الفيروسات التي يتم نسخ جينوماتها في نواة الخلية بوليميريز الحمض النووي الريبي المعتمد على الحمض النووي الخلوي الموجود هناك.

في فيروسات RNAالعمليات تكراريتم إجراء الجينوم والنسخ وترجمة المعلومات الجينية بطرق أخرى. يتم إجراء تكرار الحمض النووي الريبي الفيروسي ، سواء ناقصًا أو زائدًا ، من خلال الشكل التكراري لـ RNA (مكمل للأصل) ، والذي يتم توفير توليفه بواسطة RNA polymerase المعتمد على RNA ، وهو بروتين جيني تمتلكه جميع الفيروسات المحتوية على RNA . لا يعمل الشكل التكراري للحمض النووي الريبي للفيروسات سالبة الجدائل (زائد حبلا) فقط كقالب لتركيب جزيئات الحمض النووي الريبي الفيروسية (ناقص الخيوط) ، ولكنه يؤدي أيضًا وظائف الرنا المرسال ، أي يذهب إلى الريبوسومات ويضمن تخليق البروتينات الفيروسية (إذاعة).

في زائد الشعيرةتؤدي الفيروسات المحتوية على الحمض النووي الريبي وظيفة الترجمة لنسخها ، والتي يتم توليفها من خلال الشكل التكراري (الخيط السلبي) بمشاركة بوليميرات الحمض النووي الريبي المعتمد على الحمض النووي الريبي.

تمتلك بعض فيروسات RNA (فيروسات reovirus) آلية نسخ فريدة تمامًا. يتم توفيره بواسطة إنزيم فيروسي محدد - النسخ العكسي (النسخ العكسي)ويسمى النسخ العكسي. يكمن جوهرها في حقيقة أنه في البداية يتم تكوين نسخة على مصفوفة الحمض النووي الريبي الفيروسي بمشاركة النسخ العكسي ، وهو خيط واحد من الحمض النووي. على ذلك ، بمساعدة بوليميراز DNA الخلوي المعتمد على الحمض النووي ، يتم تصنيع الخيط الثاني وتشكيل نسخة DNA مزدوجة الشريطة. منه ، بالطريقة المعتادة ، من خلال تكوين i-RNA ، تتحقق معلومات الجينوم الفيروسي.

نتيجة عمليات النسخ المتماثل والنسخ والترجمة الموصوفة هي التكوين جزيئات الابنةالحمض النووي الفيروسي و البروتينات الفيروسيةالمشفرة في جينوم الفيروس.

بعد ذلك يأتي الفترة الثالثة والأخيرةالتفاعل بين الفيروس والخلية. يتم تجميع فيريونات جديدة من المكونات الهيكلية (الأحماض النووية والبروتينات) على أغشية الشبكة السيتوبلازمية للخلية. عادة ما تموت الخلية التي تم كبت (قمع) جينومها. virions مشكلة حديثًا بشكل سلبي(بسبب موت الخلية) أو بنشاط(عن طريق التبرعم) اترك الخلية ووجدت نفسها في بيئتها.

في هذا الطريق، تخليق الأحماض النووية الفيروسية والبروتينات وتجميع الفيروسات الجديدةتحدث في تسلسل معين (منفصل في الوقت المناسب) وفي هياكل خلوية مختلفة (منفصلة في الفراغ) ، فيما يتعلق بطريقة تكاثر الفيروسات طباقي(مفكك). في حالة العدوى الفيروسية المجهضة ، تنقطع عملية تفاعل الفيروس مع الخلية لسبب أو لآخر قبل حدوث كبت الجينوم الخلوي. من الواضح ، في هذه الحالة ، لن تتحقق المعلومات الجينية للفيروس ولا يحدث تكاثر للفيروس ، وتحتفظ الخلية بوظائفها دون تغيير.

أثناء العدوى الفيروسية الكامنة ، يعمل كلا الجينوم في نفس الوقت في الخلية ، بينما أثناء التحولات التي يسببها الفيروس ، يصبح الجينوم الفيروسي جزءًا من الخلية الخلوية ، ويعمل ويرث معه.

الشعاب المرجانية

يعتمد تفاعل التألق المناعي على تفاعل الأجسام المضادة للكلاميديا ​​مع مستضد الكلاميديا ​​الخاص بالجنس. هناك نوعان من تفاعل التألق المناعي - المباشر وغير المباشر. في الحالة الأولى ، يتم تمييز جسم مضاد محدد بشكل مباشر بالفلوروكروم ويحدث التفاعل في مرحلة واحدة ، مما يقلل بشكل كبير من وقت الدراسة. في الحالة الثانية ، لا يتم تمييز الجسم المضاد المحدد ، وللكشف عن معقد AG-AT المتكون في المرحلة الأولى ، يتم استخدام الأجسام المضادة المسمى الثانية الخاصة بالأجسام المضادة المضادة للكلاميديا. يتم تقييم نتيجة التفاعل بصريًا باستخدام مجهر الفلورسنت.

بالإضافة إلى الأدوات المستوردة ، ظهرت أدوات منزلية لتشخيص عدوى المتدثرة عن طريق تفاعل التألق المناعي المباشر ، وهي عمليًا ليست أقل جودة من حيث الخصوصية والحساسية ، ولكنها ذات سعر أقل بكثير.

مادة الدراسة عبارة عن مسحات - بصمات ، معدة وفقًا للقواعد. يتم تحضير مسحات RIF على أكواب خاصة منزوعة الألوان ضمن مساحة محدودة بقطر 8-10 مم. بعد ذلك ، يتم تجفيفها في الهواء وتثبيتها بغمرها في كحول إيثيل بارد 96٪ (يفضل المطلق) لمدة 5-10 دقائق أو وضع 0.1 - 0.15 مل من الأسيتون اللامائي المبرد على المستحضر حتى يتبخر تمامًا. يمكن فحص المستحضرات الثابتة على الفور أو ، إذا لزم الأمر ، تخزينها في درجة حرارة الغرفة ليوم واحد أو عند -20 درجة مئوية لمدة أسبوعين (في نفس الوقت ، من الضروري استبعاد الرطوبة أثناء التخزين وإحضار المستحضر إلى درجة حرارة الغرفة قبل الفحص باستخدام كيس من البلاستيك وهلام السيليكا).

عند إجراء RIF مباشر ، يتم تطبيق محلول من الأجسام المضادة المسمى على المستحضر بالكمية اللازمة لتغطية اللطاخة بالكامل (25 - 30 ميكرولتر). يتم تحضين الدواء في وضع أفقي في غرفة رطبة لمدة 15 دقيقة عند + 37 درجة مئوية. تجفيف الكاشف غير مقبول لتجنب النتائج الإيجابية الخاطئة. بعد ذلك ، تُغسل اللطاخة بالماء الجاري لمدة 30 ثانية ، وتشطف بالماء المقطر ، وتجفف وتحضر للفحص المجهري.

عند إجراء RIF غير المباشر ، يتم تطبيق الكمية الضرورية من محلول الأجسام المضادة لمضادات كلاميديا ​​على المستحضر ويتم إجراء الحضانة الأولى في نفس الظروف كما هو الحال أثناء RIF المباشر. ثم يتم غسل الدواء وتجفيفه في الهواء ويتم تطبيق الكاشف الثاني - الأجسام المضادة الموصوفة للأجسام المضادة للكلاميديا ​​ويتم إجراء الحضانة الثانية أيضًا في غرفة رطبة عند + 37 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة. بعد الغسيل ، يتم تجفيف المستحضر وتحضيره للفحص المجهري. يوصى بالاطلاع على الاستعدادات الجاهزة على الفور. إذا لزم الأمر ، من الممكن تخزين المستحضرات الملطخة لمدة 1-2 أيام عند + 2-8 درجة مئوية في مكان مظلم بدون رطوبة.

يتم إجراء الفحص المجهري باستخدام نظام الغمر. هناك خياران للفحص المجهري الغاطس:

1. الغمر بالزيت: 20 - 25 ميكرولتر من سائل التركيب (الجلسرين المخزن مع درجة حموضة عازلة الفوسفات 7.2 - 7.6) يتم وضعه على المستحضر المجفف النهائي ، المغطى بغطاء منزلق خالٍ من الدهون ، حيث يتم وضع قطرة من زيت الغمر غير الفلوري ثم يتم تطبيقه وفحصه مجهريًا بهدف (وضع علامة "L" - إنارة) مع تكبير 90 وعينية بتكبير 5.

2. الغمر في الماء: يتم وضع قطرة مقدارها 20 ميكرولتر من المخزن المؤقت للفوسفات درجة الحموضة 7.4 على التحضير النهائي ويتم فحصها بالمجهر بهدف الغمر في الماء (وضع علامات - شريط أبيض و "L" - مضيء) مع تكبير 60 وعينة مع عدسة تكبير 5. الغمر في الماء يعطي ضوءًا أكثر سطوعًا ونقاءً.

يجعل RIF من الممكن اكتشاف الهياكل المستضدية لكل من الأجسام الأولية والشبكية. تقع EBs في الغالب خارج الخلية ، مدورة الشكل مع حواف ناعمة ، صغيرة (الحجم 1: 100-1: 150 بالنسبة للخلايا المحيطة بها) ، بنية متجانسة ، لها توهج أخضر زمردي ساطع ، والذي ، عند العمل باستخدام ميكروسكوب يمكن أن تعطي حلقات الحيود (بيع الحلقات). تعتبر RTs أكثر ندرة ، وتقع بشكل أساسي داخل الخلايا ، ولها بنية أقل تجانسًا ، وهي أكثر تعددًا للأشكال ، ولكن لها أيضًا حواف واضحة ولها توهج أخضر زمردي مشرق. أي مادة فلورية أخرى غير منتظمة الشكل ذات حواف غير متساوية أو غير واضحة أو لون أخضر باهت أو توهج بلون مختلف تشير إلى القطع الأثرية. تعتمد شدة وهج ودرجة توهج معين على الرقم الهيدروجيني للسائل المتصاعد أو المخزن المؤقت المستخدم في الفحص المجهري. تزيد الكثافة العالية لإضاءة FITC في وسط قلوي من حساسية الطريقة ، ولكنها تؤدي إلى زيادة عدد الكائنات ذات اللمعان غير المحدد ، وبالتالي إلى نتائج إيجابية خاطئة. في البيئة الحمضية ، تنخفض شدة التوهج FITC ، مما قد يؤدي إلى نتيجة سلبية خاطئة. البكتيريا المصاحبة ، وكذلك نوى الخلايا المحيطة ، غير ملطخة على وجه التحديد في ظلال مختلفة من البرتقالي مع بروميد الإنديوم ، السيتوبلازم - في ظلال مختلفة من الطوب البني مع إيفانز الأزرق.

للحصول على نتيجة موثوقة ، يوصى بمشاهدة العديد من مجالات رؤية الدواء. تعتبر النتيجة إيجابية إذا كان الدواء يحتوي على خلايا طلائية ومن الممكن اكتشاف ما لا يقل عن 6 أجسام أولية تحتوي على جميع الميزات المذكورة أعلاه.

إن اكتشاف كمية أقل من العامل الممرض يجعل النتيجة مشكوك فيها ويتطلب إعادة الفحص ، ويفضل أن يكون ذلك على خلفية استفزاز (طعام - كحول ، دواء - حقن بيروجيني ، ميكانيكي - تدليك مجرى البول على البوجي). يجب أن يتم التحكم في العلاج في موعد لا يتجاوز أسبوعين ، حيث أنه من الممكن الاحتفاظ بمواد مستضدية غير مستبعدة لمسببات الأمراض غير القابلة للحياة ، والتي ستعطي نتائج إيجابية خاطئة. الحصول على 3 نتائج سلبية في الرجال في غضون شهر والنساء في غضون 3 دورات شهرية ، يشير عدم وجود المظاهر السريرية لعدوى المتدثرة إلى الشفاء.

RIF ، مع الإعداد المناسب للمريض ، والامتثال لقواعد أخذ المواد وإعداد التفاعل ، هو طريقة حساسة للغاية ومحددة لتشخيص الكلاميديا ​​البولي التناسلي ويسمح لك بتحديد العوامل الممرضة في 90-95٪ من المرضى. هذه الطريقة رخيصة نسبيًا وسهلة الأداء وغنية بالمعلومات ولا تتطلب معدات خاصة باهظة الثمن ، وتسمح لك بالحصول على النتيجة بسرعة (0.5 - 1 ساعة) والتحكم بصريًا في جودة أخذ المواد للبحث.

طرق استخدام مبادئ البيولوجيا الجزيئية

تشتمل المجموعة على طرق تحقيقات الحمض النووي وتفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) ، والتي تسمح بتحديد المادة الوراثية للممرض في المادة الحيوية المدروسة. لا تزال مجموعات تشخيص الكلاميديا ​​باستخدام مجسات الحمض النووي في مرحلة التطوير والتجارب السريرية.

يتم إدخال PCR بنشاط في ممارسة التشخيص المختبري. تعتمد الطريقة على عزل تسلسل محدد من الحمض النووي أو الحمض النووي الريبي للعامل الممرض باستخدام بادئات تكميلية ، ونسخه المتكرر المتكرر وتراكمه لمزيد من الكشف عن طريق طرق الكشف التقليدية (الرحلان الكهربي أو ELISA). تتميز هذه الطريقة بخصوصية وحساسية عاليتين ، وتقترب تقريبًا من الطريقة الثقافية ، وتسمح لك باكتشاف مسببات الأمراض الفردية في المادة قيد الدراسة. تتطلب طريقة تفاعل البوليميراز المتسلسل معدات خاصة باهظة الثمن ، ومختبرًا منفصلاً مجهزًا بشكل خاص ، وتدريبًا مناسبًا ومؤهلات عالية للعاملين في المجال الطبي. في الوقت نفسه ، لا يسمح لنا الافتقار إلى شهادة البادئات المستخدمة في روسيا والخبرة الكافية في استخدام طريقة PCR ، وخصوصية مادة الاختبار ، وتلوثها المتكرر بالميكروفلورا المصاحبة (التي يمكن أن تعطي نتائج إيجابية خاطئة) للحكم بشكل لا لبس فيه على قيمتها في تشخيص الكلاميديا ​​البولي التناسلي.

وهكذا ، في الوقت الحاضر ، فإن الطريقة الأكثر سهولة في الوصول إليها وبسيطة وفي نفس الوقت مفيدة للغاية لتشخيص الكلاميديا ​​البولي التناسلي وإيجاد علاج هو تفاعل التألق المناعي المباشر (RIF). يجب مراقبة ديناميكيات مسار المرض وفعالية العلاج عن طريق تحديد عيار الأجسام المضادة لمرض الكلاميديا ​​في مصل الدم عن طريق المقايسة المناعية الإنزيمية (ELISA).

تفاعل التألق المناعي - RIF (طريقة Koons) هناك ثلاثة أنواع من الطريقة المباشرة ، الطريقة غير المباشرة ، مع المكملة. رد فعل Koons هو طريقة تشخيصية سريعة لاكتشاف المستضدات الميكروبية أو الكشف عن الأجسام المضادة.

تعتمد طريقة RIF المباشرة على حقيقة أن مستضدات الأنسجة أو الميكروبات المعالجة بمصل مناعي بأجسام مضادة تحمل علامات الفلوروكرومات قادرة على التوهج في الأشعة فوق البنفسجية لمجهر الفلورسنت. تتوهج البكتيريا الموجودة في اللطاخة ، التي يتم علاجها بمصل إنارة ، على طول محيط الخلية في شكل حد أخضر.

تتكون طريقة RIF غير المباشرة في تحديد معقد الأجسام المضادة للمستضد باستخدام

مصل مضاد للجلوبيولين (مضاد للأجسام المضادة) المسمى بالفلوروكروم. للقيام بذلك ، يتم علاج مسحات من الميكروبات المعلقة بأجسام مضادة من مصل تشخيص الأرانب المضاد للميكروبات. ثم يتم غسل الأجسام المضادة غير المرتبطة بالمستضدات الميكروبية ، ويتم الكشف عن الأجسام المضادة المتبقية على الميكروبات عن طريق معالجة اللطاخة بمضاد الغلوبولين (مضاد الأرانب) المسمى

الفلوروكرومات. نتيجة لذلك ، يتم تكوين ميكروب معقد + أجسام مضادة للأرانب المضادة للميكروبات + أجسام مضادة للأرانب تحمل علامة الفلوروكروم. لوحظ هذا المركب في الفلورسنت

المجهر ، كما في الطريقة المباشرة.

23. مكونات المقايسة المناعية الإنزيمية ، التركيب ، المحاسبة ، التقييم. مجالات الاستخدام.

أنا Radioimmunoassay.

طريقة المناعة الإشعاعية ، أو التحليل (RIA) ، هي طريقة حساسة للغاية تعتمد على تفاعل الجسم المضاد للمستضد باستخدام مولدات الضد أو الأجسام المضادة الموصوفة بالنويدات المشعة (125J ، 14C ، 3H ، 51Cr ، إلخ). بعد تفاعلهم ، يتم فصل المركب المناعي المشع الناتج ويتم تحديد نشاطه الإشعاعي في عداد مناسب (إشعاع بيتا أو جاما). كثافة الإشعاع تتناسب طرديا مع عدد جزيئات المستضد والجسم المضاد المرتبطة.

إضافة مصل المريض ومصل مضاد الغلوبولين المسمى بالإنزيم والركيزة / الكروموجين للإنزيم.

II. عند تحديد المستضد ، يتم إدخال المستضد (على سبيل المثال ، مصل الدم مع المستضد المطلوب) في الآبار مع الأجسام المضادة الممتصة ، والمصل التشخيصي ضده ، وتضاف الأجسام المضادة الثانوية (ضد مصل التشخيص) المسمى بالإنزيم ، وثمالركيزة / الكروموجين للإنزيم.

24. تفاعلات تحلل المناعة ، التطبيق. تفاعل مكمل ملزم. المكونات ، الصياغة ، المحاسبة ، التقييم. طلب.

يتكون تفاعل التثبيت التكميلي (RCC) من حقيقة أنه عندما تتوافق المستضدات والأجسام المضادة مع بعضها البعض ، فإنها تشكل معقدًا مناعيًا ، والذي يرتبط به المكمل (C) من خلال جزء Fc من الأجسام المضادة ، ويكون المكمل مرتبطًا بالجسم المضاد للمستضد مركب. إذا لم يتم تكوين معقد الأجسام المضادة للمستضد ، فسيظل المكمل مجانيًا. يتم إجراء RSK على مرحلتين المرحلة الأولى - حضانة خليط يحتوي على مستضد + جسم مضاد + مكمل ، المرحلة الثانية (مؤشر) - الكشف عن المكمل الحر في الخليط عن طريق إضافة نظام انحلالي يتكون من كريات الدم الحمراء ومصل انحلالي يحتوي على أجسام مضادة لهم. في المرحلة الأولى من التفاعل ، عندما يتم تكوين معقد الأجسام المضادة للمستضد ، يحدث ارتباط مكمل ، ثم في المرحلة الثانية ، لن يحدث انحلال دم كريات الدم المحسّسة بواسطة الأجسام المضادة (يكون التفاعل إيجابيًا). إذا كان المستضد والجسم المضاد غير متطابقين (لا يوجد مستضد أو جسم مضاد في عينة الاختبار) ، فإن المكمل يظل حراً وفي المرحلة الثانية سينضم إلى معقد الأجسام المضادة لخلايا الدم الحمراء ، مما يتسبب في انحلال الدم (تفاعل سلبي).

25. ديناميات تكوين الاستجابة المناعية الخلوية ، مظاهرها. مناعي
ذاكرة.

الاستجابة الخلوية المناعية (CIR) عبارة عن تفاعل تعاوني معقد متعدد المكونات لجهاز المناعة ناتج عن مستضد غريب (حواتم الخلية التائية). ينفذه نظام T- الحصانة. مراحل مكتب الاستثمار الكويتي

1. التقاط مستضد APC

2. المعالج. AG في البروتيازومات.

3. تشكيل الببتيد المركب + معقد التوافق النسيجي الكبير من الدرجة الأولى والثانية.

4. نقل مكمل إلى غشاء APC.

5. تكملة الاعتراف من قبل مساعدو T الخاصة AG 1

6. تفعيل APC و T-helpers 1 ، وإطلاق IL-2 و gamma-interferon بواسطة E-helpers1. الانتشار والتمايز في مجال الخلايا اللمفاوية التائية المعتمدة على AG.

7. تكوين الخلايا الليمفاوية التائية الناضجة من مجموعات سكانية مختلفة وخلايا لمفاوية تي في الذاكرة.

8. تفاعل الخلايا الليمفاوية التائية الناضجة مع AH وتحقيق المستجيب النهائي.

مظاهر مكتب الاستثمار الكويتي:

منظمة العفو الدولية المضادة للعدوى:

مضاد فيروسات،

مضاد للجراثيم (البكتيريا الموجودة داخل الخلايا) ؛،

أنواع الحساسية IV و I ؛

مضاد الأورام IO ؛

زرع منظمة العفو الدولية.

التحمل المناعي

ذاكرة مناعية

عمليات المناعة الذاتية.

26. توصيف المجموعات السكانية الفرعية التنظيمية والمستجيبة للخلايا اللمفاوية التائية. رئيسي
علامات. مستقبلات الخلايا التائية (TCR). التحكم الجيني في تنوع TCR

تمثل الخلايا الليمفاوية التائية ثاني مجموعة مهمة من الخلايا الليمفاوية ، والتي تتشكل سلائفها في نخاع العظام ثم تهاجر لمزيد من النضج و

التمايز في الغدة الصعترية (اسم "الخلايا اللمفاوية التائية" يعكس الاعتماد على الغدة الصعترية ، باعتبارها الموقع الرئيسي للمرحلة المبكرة من النضج).

وفقًا لطيف النشاط البيولوجي ، فإن الخلايا اللمفاوية التائية هي خلايا تنظيمية ومؤثرة توفر الوظيفة التكيفية لنظام المناعة T. لا ينتجون جزيئات الأجسام المضادة. TCR هو جزيء غشائي يختلف عن HCR ، ولكنه يشبه من الناحية الهيكلية والوظيفية الأجسام المضادة.

TCR - خاص بال AG. مستقبل. إنه الجزيء الرئيسي الذي ينتمي إلى عائلة Ig الفائقة. يتكون من 3 أجزاء: فوق غشائي وغشائي وحشوي. يتكون ذيل TCR من جزيئين كرويين ألفا وبيتا لهما نطاقات متغيرة وثابتة (Vα و Vβ و Сα و Сβ).

تشكل Vα و Vβ مجمع TCR النشط. هناك 3 مناطق متغيرة للغاية - مناطق محددة ثابتة (CDO). وظيفة KDO هي التعرف على ببتيدات الخلايا التائية وربطها ، أي مجموعات محددة من AG. يجلس TCR بإحكام على الخلية ويشارك ذيلها السيتوبلازمي ، الجزء السيتوبلازمي ، في تنفيذ inf. في النواة أثناء تفاعلها مع AG. ما يقرب من 90٪ TCR. أنها تحمل سلاسل ألفا وبيتا ، وحوالي 10٪ تحمل سلاسل جاما ودلتا.

يتم ترميز TCR وراثيًا. يتم تشفير سلاسل α و ، عن طريق القياس مع سلاسل IG الخفيفة ، بواسطة جينات V و G و C ، و و ، عن طريق القياس مع سلاسل IG الثقيلة ، بواسطة V ، G ، E. α و على الكروموسوم 7 و و على الكروموسوم 14.

مستقبل CD-3 هو بنية تكميلية ، جزيء Ig. يتكون من 3 بروتينات عبر الغشاء: εδ ، εγ و dimer-zeta. ، ذيل فوق غشائي ، غشائي وخلوي. إنها تمثل مجمعًا واحدًا مع TCR ، والذي يضمن توصيل الإشارات الخاصة بـ AG إلى نواة الخلية.

CD4 و CD8. يعبرون إما في وقت واحد مع TCR أو بشكل منفصل عنه. يلعبون وظيفة المستقبلات المشتركة. أنها تعزز الالتصاق بالخلية التي تقدم AG. إنها تضمن توصيل إشارة خاصة بـ AG إلى نواة الخلية.

تنقسم الخلايا اللمفاوية التائية وفقًا لنوع التعرف ، جزيء:

تفصيل CD4 الببتيد MHC الدرجة الثانية

CD8 الببتيد + الدرجة الأولى MHC

خصائص المجموعات السكانية الفرعية الرئيسية للخلايا اللمفاوية التائية: يمكن تصنيف سكان الخلايا اللمفاوية التائية إلى ثلاث فئات:

A. المساعدون ، ومؤثرات العلاج التعويضي بالهرمونات (CD 4+) والمثبطات السامة للخلايا (CD 8+) ؛

ب. غير محفز (CD 45 RA +) وخلايا ذاكرة (CD 45 RO +) ؛

النوع 1 - (IL-2 ، INF-gamma ، TNF-beta إنتاج) ؛
النوع 2 - (IL-4 ، IL-5 ، IL-6 ، IL9 ، IL 10 المنتجة).

اختبار التألق المناعي (IF) هو اختبار مصلي يكتشف الأجسام المضادة لمولدات المضادات المعروفة. تتكون الطريقة في الفحص المجهري للمسحات الملطخة.

يستخدم هذا التفاعل في علم المناعة وعلم الفيروسات وعلم الأحياء الدقيقة. يسمح لك بتحديد وجود الفيروسات والبكتيريا والفطريات والأوليات و ICC. يستخدم RIF على نطاق واسع في الممارسة التشخيصية للكشف عن المستضدات الفيروسية والبكتيرية في المواد المعدية. تعتمد الطريقة على قدرة الفلوروكروم على الارتباط بالبروتينات دون انتهاك خصوصياتها المناعية. يستخدم بشكل رئيسي في تشخيص التهابات المسالك البولية.

هناك الطرق التالية لتنفيذ تفاعل التألق المناعي: مباشر ، غير مباشر ، مع مكمل. تتمثل الطريقة المباشرة في تلطيخ المادة بالكروم الفلوري. نظرًا لقدرة مستضدات الميكروبات أو الأنسجة على التوهج في الأشعة فوق البنفسجية لمجهر الفلورسنت ، يتم تعريفها على أنها خلايا ذات حدود خضراء زاهية الألوان.

تتكون الطريقة غير المباشرة في تحديد معقد المستضد + الجسم المضاد. للقيام بذلك ، يتم معالجة المادة التجريبية بأجسام مضادة من مصل الأرانب المضاد للميكروبات المعدة للتشخيص. بعد أن ترتبط الأجسام المضادة بالميكروبات ، يتم فصلها عن تلك غير المقيدة ومعالجتها بمصل مضاد للأرانب المسمى بالفلوروكروم. بعد ذلك ، يتم تحديد الميكروب المعقد + الأجسام المضادة للميكروبات + الأجسام المضادة للأرانب باستخدام مجهر الأشعة فوق البنفسجية بنفس الطريقة كما في الطريقة المباشرة.

لا غنى عن تفاعل التألق المناعي في تشخيص مرض الزهري. تحت تأثير الفلوروكروم ، يتم تحديد العامل المسبب لمرض الزهري كخلية ذات حدود صفراء وخضراء. عدم وجود توهج يعني أن المريض غير مصاب بمرض الزهري. غالبًا ما يوصف هذا التحليل بتفاعل واسرمان الإيجابي. تعتبر هذه الطريقة فعالة جدًا في التشخيص ، حيث تتيح لك التعرف على العامل الممرض في المراحل المبكرة من المرض.

بالإضافة إلى حقيقة أن RIF يسمح لك بتشخيص مرض الزهري ، فإنه يستخدم أيضًا لتحديد وجود مسببات الأمراض مثل الكلاميديا ​​والميكوبلازما والتريكوموناس ومسببات مرض السيلان والهربس التناسلي.

للتحليل ، يتم استخدام المسحات أو الدم الوريدي. إجراء أخذ اللطاخة غير مؤلم تمامًا ولا يشكل أي خطر. استعد لهذا التحليل. قبل اثنتي عشرة ساعة من ذلك ، لا ينصح باستخدام منتجات النظافة ، مثل القليل أو المواد الهلامية. أيضًا ، في بعض الأحيان ، وفقًا لشهادة الطبيب ، يتم إجراء استفزاز. للقيام بذلك ، يوصون بتناول الطعام الحار أو الكحول ، أو إجراء حقنة من مادة استفزازية ، مثل لقاح الغونوفاكين أو الحمى. بالإضافة إلى ذلك ، يجب أن تكون الفترة الفاصلة بين تناول الأدوية المضادة للبكتيريا وإجراء الاختبار أربعة عشر يومًا على الأقل.

عند تقييم النتائج ، ينبغي للمرء أن يأخذ في الاعتبار حقيقة أن اللمعان لا يُلاحظ فقط في البكتيريا الحية ، ولكن أيضًا في البكتيريا الميتة ، خاصة بالنسبة للكلاميديا. بعد تناول المضادات الحيوية ، تتوهج أيضًا خلايا الكلاميديا ​​الميتة.

مع الإعداد المناسب للمريض والامتثال لتقنية أخذ اللطاخة ، يتيح لك هذا التحليل تحديد الأمراض في المراحل المبكرة ، وهو أمر مهم جدًا للعلاج في الوقت المناسب. الجوانب الإيجابية لهذه الطريقة هي قصر الوقت للحصول على النتيجة ، وسهولة التنفيذ وانخفاض تكلفة التحليل.

تشمل العيوب حقيقة أن كمية كبيرة بما فيه الكفاية من المواد قيد الدراسة مطلوبة للتحليل. بالإضافة إلى ذلك ، يمكن فقط لأخصائي متمرس تقييم النتائج.