Иногда пациенту назначается анализ на стерильность крови. О чем идет речь, и что можно узнать по результатам этого исследования?

Человеческий организм способен синтезировать различные жидкости. Это желчь и грудное молоко, моча и слюна, пот и многие другие вещества. Некоторые из них содержат микроорганизмы, поскольку находятся в резервуарах, сообщающихся с внешним миром. Так, никого не удивит нахождение микроорганизмов в слюне или моче. Но внутренняя среда организма должна быть стерильной и никаких микробов, как вредных, так и полезных, находиться в ней не должно. Пример такой жидкости — кровь, лимфа и цереброспинальный ликвор, омывающий головной и спинной мозг.

Но лимфатическая жидкость и ликвор находятся не везде, а вот кровь проникает в самые удаленные участки человеческого тела, и отсутствует кровоснабжения только в двух отделах: это оптические среды глаза, которые должны быть прозрачными, и хрящевая ткань, которая находится в суставах. Все остальные органы и ткани снабжаются кровью и она должна быть стерильной.

Кровь на стерильность: что это такое?

В повседневной жизни иногда встречаются состояния, когда у здорового человека микробы попадают в кровь. Примером является лечение зубов у стоматолога, когда небольшое количество нормальной микрофлоры полости рта на короткое время попадает в кровоток после стоматологических манипуляций.

При проведении хирургических операций, несмотря на всё соблюдение правил асептики, микроорганизмы в небольшом количестве способны проникать в кровоток. Это — транзиторная, или временная бактериемия, которая не влияет на здоровье. У пациента с сильным иммунитетом вся микробная контаминация крови вскоре исчезает, и кровь вновь становится стерильна.

Если же у пациента в организме существует постоянный гнойный очаг, например пневмония или эндокардит, то бактериемия может быть не одноразовой, а периодической, и тогда это состояние называется интермиттирующей бактериемией. Это гораздо более опасная ситуация, поскольку такой патологический «десант» может освоить новые «территории».

Наконец, в том случае, если микробы очень хорошо себя чувствуют в сосудистом русле и начинают там размножаться, то такая бактериемия является постоянной, и часто приводит к септикопиемии.

Септикопиемия — это состояние, при котором гноеродные микроорганизмы не только не погибают, но и интенсивно размножаются в крови. При этом возникают так называемые септикопиемические, или метастатические гнойные очаги на удалении от кровотока, в органах и тканях, где оседают микробные колонии. Так, при сепсисе может возникнуть абсцесс (отграниченный гнойный очаг) головного мозга, лёгкого или абсцесс почки вследствие гематогенного заноса или диссеминации возбудителей. В том случае, если иммунных сил организма не хватит, чтобы отграничить гнойное воспаление, которым является абсцесс, то возможно развитие разлитого воспаления, например гангрены легкого. Она протекает с чрезвычайной интоксикацией у ослабленных пациентов и часто приводит к летальному исходу.

В связи с постепенным старением населения и уменьшением степени иммунной защиты у пожилых, в связи с частым назначением различных инвазивных медицинских процедур (лапароскопия), риск проникновения микробов в кровь возрастает. Тем более этот риск связан с широким применением иммуносупрессивных препаратов, например, при трансплантации внутренних органов и при лечении злокачественных новообразований. Поэтому проникновение микробов в кровь диагностируется не так редко, как в прошлом веке. При подозрении на эти, и многие другие состояния, ведущие к септическим осложнениям, и требуется анализ на стерильность крови.

Большое значение для получения правильного результата имеет правильный сбор крови и правильная технология бактериологического исследования. Какие условия должен соблюдать пациент, чтобы это исследование было проведено грамотно?

Как подготовиться к сдаче крови на стерильность?

Если просто так, без всяких предварительных процедур и подготовки взять у пациента кровь на стерильность, у которого подозревается распространённый и генерализованный инфекционный процесс, то, чаще всего, ничего не будет обнаружено. Ведь что показывает этот анализ? Он призван «поймать» чужеродного возбудителя, который вовсе не обязан попасть в образец крови. Это не метаболит, не фермент и не белковая фракция, которая обязательно будет в любой порции. Нужно учитывать многие факторы, которые повысят вероятность обнаружения патогенной флоры. Как подготовиться к сдаче крови на стерильность?

Известно, что примерно через час после выброса микробов в кровоток у пациента начинается характерная лихорадка и озноб. Поэтому, если взять кровь как можно раньше, при самом начале такого приступа, то это существенно повысит шансы на обнаружение патогенной флоры.

Второе обязательное условие — это отсутствие приема антибиотиков и других препаратов для антимикробной терапии. На фоне лечения антибиотиками довольно часто выявляются или искажённые, или ложноотрицательные результаты, которые не соответствуют действительности. Немного «притравленная» антибиотиками флора не хочет расти на искуственных средах, но она жива, и способна к активизации.

Наконец, не допускается взятие крови на стерильность при наличии постоянно стоящего внутривенного катетера. Такой забор делается только в крайних случаях, когда у пациента никак не удаётся получить доступ к венам, или при особом назначении анализа, когда врач подозревает у пациента так называемую инфекцию, ассоциированную с катетером. Эти, на первый взгляд незначительные, но очень важные факторы нужно учитывать при назначении посева крови на стерильность. Какие же показания существуют к проведению этого метода исследования?

Показания

Прежде всего, это плохое самочувствие, периодические ознобы, проливные поты, слабость, частые простудные заболевания, и другие симптомы, связанные с каким-либо тяжёлым инфекционным процессом или говорящие о снижении иммунитета.

Кроме этого, показанием к назначению гемокультуры (это синоним исследования крови на стерильность) является существование особых факторов риска, которые могут привести к распространению инфекции в кровь. Это наличие:

• постоянного катетера мочевого пузыря;
• внутривенные катетеры или шунты, например, у пациентов, находящихся на хроническом гемодиализе;
• фактором риска являются обширные полостные операции, и особенно повторные и многократные, например, поэтапные пересадки кожи в клинике ожоговой хирургии;

Длительное лечение антибиотиками также уменьшает защитные силы организма и способствует появлению резистентных штаммов микроорганизмов, которые могут быть довольно стойкими. Поэтому длительное лечение антимикробными средствами, которое не дает результата, также является показанием для проведения анализа крови на стерильность.

Длительная иммуносупрессивная терапия, приём кортикостероидных гормонов, все разновидности пульс — терапии и химиотерапии также способны в значительной степени снизить иммунную защиту, и могут привести к клинике сепсиса и проникновению микроорганизмов непосредственно в кровоток.

Также показанием к проведению этого исследования являются результаты анализа крови, например, токсическая зернистость нейтрофилов, особенно на фоне клиники сепсиса, и некоторые другие результаты исследований.

В настоящее время посев крови на стерильность, или гемокультура является «золотым стандартом» диагностики септических состояний. Кроме этого, анализ может выявить не только наличие микроорганизмов и бактерий, но также и грибков в кровяном русле, поэтому анализ крови на стерильность позволяет диагностировать и грибковый сепсис. Этот вид тяжелого инфекционного поражения очень часто встречается у ВИЧ-инфицированных пациентов, находящихся в стадии СПИДа и больных оппортунистическими инфекциями.

Проведение исследования

Как сдавать кровь на стерильность? Существуют многочисленные данные исследований, которые говорят, что при правильном заборе практически исключена вероятность ошибки, которая связана с внешним обсеменением образцов. Применение специальных автоматизированных аппаратов и значительного уменьшения ручных манипуляций в лаборатории способствует получению более достоверного результата.

Необходимо провести посев крови, и гемокультура растет в течение 8 дней при температуре 37 градусов. Кроме основной среды, которая называется двойной, посев делают на кровяной агар. В том случае, если во всех средах нет признаков роста, то лаборатория выдает на 10 день отрицательный ответ. В том случае, если среда изменилась, то выделяют чистую культуру возбудителя.

Поскольку риск случайного обсеменения внешними микробами одной порции крови составляет, в среднем, 3% случаев даже при тщательном соблюдении всех правил, то всегда берут одновременно как минимум две пробы, и в таком случае риск ошибки составляет уже 0,3*0,3=0,09%.

Поэтому для максимальной чистоты исследования необходимо как минимум две, а то и больше проб, при объеме каждой не менее 10 мл. Существуют специальные, регламентированные методические указания по технике сбора биоматериалов. В них, в частности, говорится, что:

• при подозрении на острое септическое состояние, остеомиелит, на менингит менингококковой этиологии, осложненный менингококцемией, то есть проникновением менингококка в кровь, вполне достаточно 2 изолированных проб, но обязательно перед началом лечения;
• если врач имеет дело с лихорадкой неясного генеза, то у больного берутся вначале две пробы из разных сосудов (или из разных мест одной вены). Затем, через сутки, или через 36 часов, берутся ещё две пробы, и желательно, чтобы они были взяты после начала озноба и ухудшения самочувствия, но как можно раньше;
• если есть подозрение на вялотекущий сепсис, или поражение клапанов сердца – бактериальный эндокардит, то при обострении состояния срочно берутся две пробы, на фоне повышения температуры, но не при ее максимуме! Максимум температуры говорит о уже произошедшем разрушении микробов в крови, и выходе их антигенов и токсинов наружу, что и вызвало пирогенную реакцию, и вряд ли анализ будет результативным. Поэтому нужно постараться взять анализы на фоне роста лихорадки;
• если же эндокардит, сепсис протекает в стертых чертах, то берутся уже не 2, а 3 пробы с интервалом в 15 минут;
• если посев крови на гемокультуру всё-таки проводится у больных на фоне лечения антибиотиками, (ведь не всегда при тяжелых болезнях можно провести их отмену), то в течение двух суток берётся 6 проб, каждая по 10 мл.

Из вышеприведенных фактов понятно, что взятие образцов не гарантирует получения истинной картины даже при очень тщательном и идеальном соблюдении всех правил забора крови, ведь возбудителей нужно просто «поймать».

На смену старым лабораториям в «ручном режиме» приходят современные приборы — анализаторы. Так, существует прибор, который может быстро обнаружить грибы и бактерии в образцах крови. Для этого необходимы специальные флаконы оригинального образца, которые помещаются на специальную рабочую станцию прибора. С помощью флуоресцентной методики определяется углекислый газ, который обычно довольно активно выделяют во внешнюю среду растущие и развивающиеся микроорганизмы.

Уже в первые сутки инкубации при автоматизированном проведении этого анализа можно получить предварительный результат, и начать срочное эмпирическое лечение, или изменить действующую схему антибактериальной терапии. Применение современных приборов резко уменьшило частоту развития инфекционно-токсического шока, и увеличило выживаемость пациентов с тяжелым течением инфекционной патологии. Как же интерпретировать полученный результат?

Интерпретация результатов

Нормальный результат у здорового человека должен быть только один: отрицательный. Полное отсутствие во всех пробах крови бактерий и грибков, она стерильна. В том случае, если существует какой-либо рост бактериальной флоры на средах, тогда результат становится положительным.

Положительные результаты

Довольно часто стрептококки и стафилококки, клостридии приводят к . Различные аэробные палочки, бактероиды вызывают ее помутнение. Аэробные грамположительные палочки так же, размножаясь, приводят к появлению пузырьков газа в жидкой и плотной среде, и это сразу становится заметно через несколько дней после инкубации. При псевдомонадной инфекции и при дрожжевом сепсисе на поверхности среды образуется пленка, а золотистый стафилококк образует специфические хлопья. Могут появляться колонии самой разной формы, и по этим культуральным, микробиологическим и биохимическим свойствам и определяют конкретного возбудителя.

По данным отечественных лабораторий, чаще всего выделяются культуры золотистого стрептококка, фекальные энтерококки, клебсиелла, кишечная палочка. Довольно часто диагностируется кандидозный сепсис. При этом особенности роста также имеют большое значение. Так, если во всех средах очень быстро, в течение 2 суток выделяется одна и та же культура, взятая при этом из разных проб и в разное время, то это является практически стопроцентным подтверждением того, что не произошло никакой ошибки во время взятия образцов и во время инкубации.

Ложноотрицательные результаты

При каких условиях, кроме стерильной крови, может быть получен отрицательный результат? Такой результат будет ложноотрицательным, и причина его может крыться в следующих факторах:

• инфекционный процесс локализован только лишь в одном месте, иммунная система ограничивает его распространение;
• вторая причина — это неправильно подобранное время взятия анализа. Медицинские работники просто не успели зафиксировать момент роста лихорадки, и все микробы в кровотоке были уже уничтожены;
• довольно часто пациент принимает разные антибиотики и забывает сказать об этом;
• не удается взять достаточный объем крови. Если количество крови слишком маленькое, то существенно уменьшается вероятность выделения из неё гемокультуры.

Также существует и еще одно обстоятельство, которое возникает нечасто. Так, существуют медленно растущие микроорганизмы, для которых не хватает даже 8 или 9 дней инкубации, и не удается получить чистую культуру. К таким микроорганизмам можно отнести туберкулезную палочку, возбудителя иерсиниоза и других бактерий, нечасто вызывающих сепсис.

Мы подробно рассмотрели, что это такое – анализ на стерильность крови. Не стоит думать, что посев крови на стерильность — это методика, при которой здоровый человек приходит в лабораторию, и довольный уходит домой. Этот процесс скорее напоминает рыбалку, когда врач закидывает удочку, и нет гарантий, что микроорганизмы откликнутся на эту приманку. Это целенаправленный поиск, который должен осуществляться с соблюдением всех правил асептики, антисептики и со знанием течения болезни. Кроме этого, кровь на гемокультуру часто берется в условиях стационара у тяжелых больных.

Анализ крови на стерильность – клиническое исследование, направленное на выявление болезнетворных бактерий в крови. Позволяет диагностировать тяжелые заболевания различной этиологии.

Внимание! Правильная диагностика бактериальных инфекций позволяет назначить эффективную медикаментозную терапию. В последние годы наблюдается значительное увеличение числа бактериальных инфекций, резистентных к современным антибиотикам. Ученые считают, что это связано с повсеместным неправильным назначением антибактериальных препаратов.

Известные антибактериальные препараты

Что такое анализ на стерильность крови?

Что показывает общеклинический анализ на стерильность крови? Анализ на стерильность проводится с целью выявления бактериальной инфекции в крови. В норме кровь стерильна, однако некоторые микробы способны нарушать это состояние и приводить к развитию болезней. В муниципальных и частных клиниках врач при подозрении на бактериальную инфекцию выписывает направление на бакпосев.

Бактериемия в крови указывает на наличие заболеваний:

• Сепсис.
• Фурункулез.
• Менингит.
• Миокардит.
• Туберкулез.

Исследование выявляет стафилококковые, стрептококковые, палочковидные и другие бактериальные патогены. Бакпосев – эффективная методика диагностики, способная выявить вид патогенного микроорганизма. Основной недостатк метода – длительный период исследования, который составляет от 4 до 15 суток. За такой промежуток времени инфекционный возбудитель способен вызвать серьезные осложнения и привести к летальному исходу. Поэтому медикаментозную терапию начинают на начальных стадиях развития инфекции, не дожидаясь результатов анализов из лаборатории. В РФ назначают первоочередно препараты пенициллинового ряда, но в последнее время появляется все больше данных об аллергических реакциях на данный антибактериальный агент.

Клиническое исследование крови

Часто забор крови на стерильность осуществляют при резистентности к антибиотикам первой линии. У таких пациентов присутствуют бактерии со сниженной чувствительностью к антибактериальным препаратам. Обязательное условие посева крови на патогенные возбудители – постоперационный период, подозрение на сепсис и шунтирование сердечной мышцы. ВИЧ-инфицированные подвержены влиянию вредоносных микроорганизмов. Такие пациенты имеют в крови микобактерии туберкулеза.

Анализ крови на бакпосев: подготовка к процедуре

Биологический материал необходимо сдать натощак и в утреннее время. Перед процедурой исключить прием жирных продуктов и избыточного количества «быстрых» углеводов. Отказаться от приема пищи за 12 часов до забора биологического материала и проведения гемотеста. Женщинам во время беременности и грудным детям избегать психоэмоциональных, физических нагрузок.

Противопоказано употребление психотропных веществ и лекарственных средств. О приеме медикаментов сообщить лечащему врачу заблаговременно. Несоблюдение условий повышает вероятность того, что гемотест покажет ложноположительный результат.

Кровь на стерильность: правила забора биологического материала

Взятие крови на стерильность производится из вены на сгибе локтевого сустава. У новорожденного ребенка материал для исследования берут из пальчика. Техника забора крови на стерильность выполняется согласно стандартам ВОЗ.

Алгоритм действий, как взять на стерильность кровь:

1. Место укола обрабатывают антисептиком (этиловым спиртом).
2. Забор материала осуществляется одноразовым шприцем и в среде, где относительно стерильно.
3. После введения иглы в вену осуществляется взятие 6-11 мл крови, которая помещается в специальный флакон.
4. Повторно обрабатывается место укола.
5. Медработники доставляют исследовательского материал в лабораторию на исследование.

Впоследствии материал помещают в инвитро-среду, где бактерии размножаются. Современный инструментарий определяет вид вредоносного микроорганизма и производит расшифровку результатов исследования.

Техника забора материала из вены

Совет! При уколе существует риск заражения инфекцией или появления кровотечений (особенно при наличии гемофилии или ДВС-синдрома). Поэтому важно заняться стерилизацией поверхности кожи до забора крови.

Предварительные результаты анализов в ЦМД можно получить через трое суток, а в «Хеликсе» – через 5 дней. Окончательный результат – через 8-15 суток. Многое зависит от вида патогенного микроорганизма и скорости его размножения.

Видео показывает, как развивается бактериальный патоген в крови. Своевременное лечение и диагностика таких расстройств – верный шаг к выздоровлению. Важно вовремя обращаться к лечащему врачу при возникновении «тревожных» симптомов.

Еще:

Трактовка времени свертываемости по Ли Уайту, нормы и методы проведения анализа Особенности анализа ПСА и подготовка к сдаче, что это такое, зачем необходимо это исследование и какие заболевания выявляет?

У здорового человека кровь абсолютна стерильна, а наличие в ней бактерий является верным признаком развития сложных заболеваний. Для выявления бактериемии проводится специальный лабораторный анализ крови на стерильность. В каких случаях рекомендуется выполнение исследования и на что оно указывает?

Что показывает анализ

Главное диагностическое значение анализа – определение бактериемии, которая свидетельствует о развитии патологических процессов в организме. Исследование направлено на обнаружение стафилококков, энтеробактерий, стрептококков и дрожжевых грибов.

Проникновение микроорганизмов в кровь и их выявление в анализе свидетельствует о распространении болезни за пределы очага заражения. Активизация бактерий провоцирует поражение других органов и вызывает развитие осложнений. Как правило, наличие в крови болезнетворных микроорганизмов сопровождается повышением температуры, увеличением количества лейкоцитов и нарушением работы сердечной мышцы.

Анализ на стерильность не только определяет наличие бактерий, но и позволяет оценить их опасность для организма (они могут быть патогенными или условно-патогенными) и установить степень развития заболевания. Проведение исследования используется также для того, чтобы определить чувствительность бактерий к определенной группе антибиотиков.

Показания

Анализ крови на стерильность назначается пациентам со сниженным иммунитетом (например, при ВИЧ-инфекции), для определения некоторых заболеваний, постановки точного диагноза и выбора правильного и эффективного лечения. Исследование обязательно проводится при подозрении на сепсис, менингит, остеомиелит, пиодермию и эндокардит. Показано проведение анализа и после оперативного вмешательства или длительного использования катетеров.

Исследование назначается врачом и в том случае, если на протяжении длительного времени невозможно установить причины неприятных симптомов, в частности высокой температуры, которая создает идеальные условия для развития бактерий.

Методика проведения

Для проведения анализа берут образец венозной крови. Для исследования нужно 5-10 мл биологического материала, который помещают во флакон с питательной средой (приблизительно 500-100 мл). В некоторых случаях за 20 минут до исследования проводится подкожное введение адреналина (1 мл), который способствует сокращению селезенки, и все бактерии попадают в кровоток. Предварительные результаты анализа готовы, как правило, на 3-и сутки после забора крови, но полную картину можно узнать только через 10 дней.

Для того чтобы данные, полученные в результате исследования, были максимально точными, соблюдайте правила подготовки к нему. Накануне анализа откажитесь от употребления жирной и жареной пищи, а кровь сдавайте только натощак. Исключите из рациона алкоголь и не курите. Обязательно предупредите врача, если вы принимаете какие-либо препараты и не можете самостоятельно отказаться от них.

Анализ крови на стерильность – это достаточно редкий вид исследования, который проводится в исключительных случаях, когда есть подозрение на развитие бактериемии.

Что такое бактериологический посев, каким образом и с какой целью он проводится?

Основной целью бактериологического исследования крови является определение наличия бактерий в крови. Поскольку под микроскопом невозможно подтвердить или исключить бактериемию, из-за недостаточного количества бактерий, предварительно проводится выращивание (размножение) бактерий в специальной питательной среде, содержащей все необходимые элементы для быстрого роста бактерий.

Когда обнаруживается видимый рост бактерий, культуру, обогащенную бактериями, окрашивают и исследуют под микроскопом. Так проводится предварительная идентификация вида микроорганизмов, находящихся в крови. Для более точной идентификации требуется посев жидкой культуры на плотную среду (в чашке Петри). При таком исследовании можно увидеть, как растут колонии бактерий. С образцами колоний проводятся химические тесты, которые позволяют точно и окончательно выявить вид микроорганизма.

После выявления вида бактерий, присутствующих в крови, определяется их чувствительность к антибиотикам. Это необходимо для того, чтобы выяснить, с помощью какого лекарства можно бороться с выявленным видом бактерий наиболее эффективно.

Показания для проведения бактериологического посева крови

Врач-микробиолог Наталья Петрова: «Показанием проведению бактериологического анализа может быть подозрение на заражение крови; длительное время повышенная температура тела, по причине, которую не удается выяснить; подозрение на инфекционные заболевания (например, эпидемический менингит, стафилококковые и стрептококковые инфекции, кишечные инфекции). Поскольку однократное исследование крови может быть малорезультативным, поэтому могут быть проведены серии из 2 и более исследований за определенный промежуток времени. Утверждать, что возбудителем является какой-то конкретный микроорганизм, позволяет быстрое (48 часов) обнаружение микроорганизма, при неоднократном выделении его из крови или других видов исследуемого материала (мочи, мокроты и т.п.), кроме того, обнаружение этого микроорганизма одновременно на разных видах питательных средах».

Когда берут пробы для бактериального анализа крови?

Кровь для бактериологического посева необходимо сдавать до начала лечения антибиотиками, поскольку употребление антибиотиков может отсрочить или предотвратить рост бактерий, что приведет к ложноотрицательному результату. У пациентов с периодическим повышением температуры тела, кровь нужно брать в период, когда температура растет или сразу же после прохождения пика температуры. Именно в это время в крови находится максимальное количество бактерий. Во многих лабораториях специалисты рекомендуют сдать второй образец крови не позднее, чем через один час после первого, для того, чтобы увеличить шансы обнаружения бактерий.

Необходимый объем крови

У больного с бактериемией в 1 мл крови может присутствовать всего одна микробная клетка, поэтому если в бутылку с питательной средой внести недостаточное количество крови, можно получить ложноотрицательный результат.

Парадоксально, однако получить ложноотрицательный результат можно и тогда, когда в питательную среду вносится слишком много крови. Так происходит потому, что кровь в большом количестве продолжает оказывать бактерицидное. Конечно же, существует компромисс между слишком малым объемом крови и избыточным объемом крови. Оптимальное разведение крови в питательной среде должно соответствовать соотношению 1:10, требуемый объем (обычно 5-10 мл), все зависит от того, какая именно питательная среда используется для анализа.

Техника выполнения бактериологического посева

При бактериологическом посеве нужно придерживаться асептической техники, чтобы исключить возможность бактериального загрязнения крови. Если образец взят согласно правилам, в бутылку с питательной средой попадут только те микроорганизмы, которые находится в крови больного.

Правила взятия крови для бактериологического посева:

• Кровь следует брать из периферической вены, без использования катетера, чтобы исключить загрязнение.
• Процедура выполняется в стерильных перчатках. Место венепункции смазывается антисептиком.
• Также антисептиком дезинфицируется и крышка бутылки с питательной средой.
• Кровь берется стерильным шприцем.
• В бутылку кровь вносится через резиновую пробку. Снимать пробку с бутылки нельзя.
• Культура крови снабжается этикеткой с данными о пациенте.

Результаты бактериологического посева крови делятся на следующие три группы:

• Роста бактерий нет.
• Чистый рост бактерий.
• Смешанный рост бактерий.

Отсутствие роста бактерий : Нормальный результат, означающий, что кровь пациента стерильна.

Чистый рост бактерий : результат, означающий, что имеется рост одного вида бактерий, который был выделен из культуры. Получения такого результата следует ожидать, когда у пациента сепсис.

Смешанный рост : результат указывает на то, что из культуры было выделено более одного вида бактерий. Такое инфицирование крови случается редко. Чаще всего, смешанный рост бактерий является подтверждением того, что питательная среда была загрязнена.

Департамент здравоохранения Воронежской области

БУЗ ВО «Воронежская областная клиническая больница №1»

Исследование крови на стерильность

на современном этапе

Информационно-методическое письмо для врачей-бактериологов

Составители: главный внештатный специалист по микробиологической диагностике

департамента здравоохранения Воронежской области, заведующий бактериологической лабораторией

БУЗ ВО ВОКБ №1 Е.В. Бондаренко

Врач-бактериолог БУЗ ВО ВОКБ№1 Т.М. Лапа

Кровь - один из наиболее распространенных образцов биоматериала, исследуемых в бактериологической лаборатории. Исследование крови на стерильность является важнейшим методом лабораторного исследования у пациентов с определенными показаниями.

Основные показания для посева крови:

• Лихорадка (более 38° C )
• Гипотермия (менее 36°C )
• Лейкоцитоз
• Гранулоцитопения

Бактерии проникают в кровь экзогенным (например, при травме) и эндогенным (из очага инфекции) путями.

Бактериемия : Наличие бактерий в крови, подтвержденное результатами посева

• Транзиторная бактериемия, когда происходит кратковременный выброс в кровь микроорганизмов под действием таких факторов, как физическая нагрузка, перегревание, переохлаждение. Подобные явления протекают обычно бессимптомно.
• Интермиттирующая бактериемия, когда существует локальный очаг инфекции, например пневмония или внутрибрюшной абсцесс.
• Продолжающаяся бактериемия проявляется внутрисосудистой

инфекцией, например, инфекционным эндокардитом или септическим тромбофлебитом.

Сепсис - это патологический процесс, в основе которого лежит реакция организма в виде генерализованного (системного) воспаления на инфекцию различной природы (бактериальную, вирусную, грибковую).

В последнее десятилетие в мире отмечается учащение случаев бактериемии и фунгемии. Это связано с развитием инвазивных медицинских вмешательств, старением населения, увеличением количества трансплантаций органов и костного мозга, увеличением количества более вирулентных и трудно поддающихся лечению микроорганизмов, более агрессивной внутрибольничной инфекцией.

Факторы риска, способствующие проникновению бактерий в кровяное русло и развитию бактериемии:

• внутривенные катетеры
• катетер мочевого пузыря
• любые инвазивные процедуры
• операционные вмешательства
• нейтропения
• терапия антибиотиками (эмпирическая), кортикостероидами, цитотоксическая

Гемокультивирование является в настоящее время «золотым стандартом» в диагностике септицемии

Принципы микробиологической диагностики

Точный диагноз устанавливается только при обнаружении возбудителей в крови пациентов. Важное условие - своевременный забор пробы. Для проведения анализа используют кровь непосредственно из венозного сосуда. Сбор пробы из постоянного внутривенного или внутриартериального катетеров допускается только в случаях подозрения на наличие катетер-ассоциированной инфекции или отсутствия возможности ее получения венопункцией.

• Лихорадка и озноб начинается примерно через час после попадания микроорганизмов в кровоток
• Чаще всего кровь забирается как можно скорее после приступа лихорадки или озноба при подозрении на инфекцию
• Забор крови должен осуществляться по возможности до назначения антимикробной терапии.

Объем крови - один из наиболее значимых факторов в повышении чувствительности гемокультивирования. Считается, что риск случайной контаминации 1 отдельно взятой пробы крови составляет 3% (0,03).

Тогда вероятность случайной контаминации одновременно 2 проб составляет: 0,03*0,03=0,0009= 0,09%. Поэтому более информативно исследование 2 и более проб каждая объемом не менее 10мл.

Рекомендуемое число отбираемых проб крови в зависимости от предполагаемого заболевания по МУ 4.2.2039-05 Техника сбора и транспортирования биоматериалов в микробиологические лаборатории :

1) Острый сепсис, менингит, менингококоцемия, остеомиелит, артрит, острая пневмония, пиелонефрит 2 пробы из двух сосудов или двух участков кровеносного сосуда перед началом антибактериальной терапии

2) Лихорадка неясного генеза 4 сначала 2 пробы из разных кровеносных сосудов (двух участков сосуда), затем через 24-36 ч. еще 2 пробы

3) При подозрениях на наличие эндокардита и вялотекущего сепсиса: при обострении 2 пробы из двух сосудов в течение первых 1 - 2 ч подъема температуры тела (не на пике температуры!) до начала терапии; при подостром и вялотекущем течении сначала 3 пробы с интервалом 15 мин. и более. Если все пробы отрицательны, на вторые сутки после посева собирают еще 3

4) у пациентов с эндокардитами, получающими антибиотики, собирают по 2 отдельные пробы в течение трех дней

5) У больных, в комплекс терапии которых включены антибиотики, собирают 6 проб в течение 48 ч; пробы необходимо собирать непосредственно перед введением следующей дозы препарата

6) при лихорадке неясного генеза сначала 2 пробы из разных кровеносных сосудов, затем через 24-36 часов еще 2 пробы

Минимальный набор сред для посева крови согласно положениям Приказа 535:

“Двойная среда” - скошенный во флаконе 1,7-2% питательный агар (150 мл) и 150 мл полужидкой среды, приготовленной на питательном бульоне с добавлением 15 г глюкозы и 0,15 г агара.

“ Среда для контроля стерильности” - стандартная тиогликолевая среда к которой добавляют 15-20 г дрожжевого экстракта и агар 4,25-5 г на 1 литр к среде добавляют 0,001 г резазурина в качестве индикатора анаэробиоза.

Необходимое оснащение для взятия крови:

• Флаконы с питательными средами.
• 70о этиловый спирт;
• 2% или 5% настойка йода
• венозный жгут
• резиновые (латексные, виниловые) перчатки
• спиртовка (только при использовании флаконов со средами, изготовленными в лаборатории)

Техника получения пробы крови . Сбор проб крови для посева производят 2 человека у постели больного или в процедурной.

Участок кожи над выбранным для пункции сосудом продезинфицировать: обработать кожу тампоном, смоченным 70%-м этиловым спиртом, затем другим тампоном, смоченным 1 - 2%-м раствором йода или другим дезинфектантом, разрешенным к применению для этих целей в установленном порядке, круговыми движениями, начиная от центра, в течение 30 с; подождать, пока высохнет обработанный участок. Не допускается пальпировать сосуд после обработки кожи перед введением иглы;

При работе с флаконами с двойной средой: стерильным шприцем собрать у взрослых 10 мл крови, у детей - 5 мл; над пламенем спиртовки открыть флакон; внести кровь во флакон из шприца, предварительно сняв иглу; обжечь горлышко и пробку флакона в пламени спиртовки, закрыть флакон пробкой; осторожно, чтобы не замочить пробку флакона, перемешать его содержимое круговыми движениями.

Визуальные признаки роста гемокультур при посевах крови

Макроскопические изменения среды	Возможные микроорганизмы
	Стрептококки, стафилококки, Listeria spp., клостридии, Bacillus spp.
Помутнение	Аэробные грам(-) палочки, стафилококки, Bacteroides spp.
Газообразование	Аэробные грам(-) палочки, анаэробы
Образование пленки	Pseudomonas spp., Bacillus spp., дрожжевые клетки
Образование хлопьев
Видимые колонии («дымчатые»)	Стафилококки, стрептококки

Причины отрицательных результатов:

Локальная инфекция (защитные силы организма удерживают инфекцию в одном месте)

Неактуальное время взятия материала (вероятность упустить интермиттирующую бактериемию)

Слишком маленький объем полученного материала

Прием антибиотиков пациентом

Идентификация выделенных бактерий при бактериемиях:

• Значимы и часто встречаются - S.aureus, S.pneumoniae, E.coli и др. энтеробактерии, P.aeruginosa, C.albicans
• Значимы - S.pyogenes, S.agalactiae, L.monocytogenes, N.meningitidis, N.gonorrhoeae, H.influenzae, B.fragilis группа, Candida spp, Cryptococcus neoformans
• Контаминанты или нет? (зависит от конкретных случаев) - КОС, зеленящие стрептококки, Propionibacterium acnes, Acinetobacter calcoaceticus, Clostridium spp., Corynebacterium spp., Bacillus spp

Дополнительные критерии в пользу клинической значимости изолята:

Быстрое выделение культуры - в течение первых 48 часов

Выделение монокультуры

Выделение одного и того же вида микроорганизма в разных пробах

Выделение одного и того же вида микроорганизма из крови и других локусов

Помимо ручных методов существуют методы автоматизированного культивирования крови, которые являются более современными, более чувствительными. Самая известная серия бактериологических анализаторов для посева крови на стерильность,- BD BACTEC .

Прибор Bactec предназначен для ускоренного обнаружения бактерий и грибов в клинических образцах крови. Образцы крови отбираются у пациентов и вносятся напрямую в оригинальные флаконы с питательной средой, после чего - по возможности незамедлительно - помещаются в рабочие станции приборов серии BD Bactec™ 9000. Наличие микроорганизмов в крови устанавливается с помощью высокочувствительной флуоресцентной технологии, основанной на индикации СО2, выделяемого в питательную среду растущими и интенсивно делящимися микроорганизмами. С помощью системы BD BACTEC 90% положительных результатов выявляются в первые 24 часа инкубации, что позволяет своевременно начать эмпирическую антибактериальную терапию либо внести изменения в действующую схему лекарственной терапии. Своевременная бактериологическая диагностика бактериемии значительно сокращает частоту возникновения септического шока и увеличивает выживаемость больных.

Флаконы для гемокультивирования выпускаются нескольких видов. Наиболее часто используются следующие:

• Флаконы со средой для культивирования аэробов
• Флаконы со средой для культивирования анаэробов

• Флаконы со средой для культивирования детской крови

Предназначены для исследования малого объема крови до 3 мл, также содержат частицы латекса

• Флаконы с селективной средой для выявления дрожжей и грибов

Используется вакуумное взятие крови с использованием системы для забора крови игла-бабочка. Под действием вакуума кровь втягивается через иглу BD VacutainerTM напрямую из вены в пробирки BD VacutainerTM и флаконы BD BactecTM и сразу же смешивается с питательной средой.

Традиционно отбор проб крови осуществляется одномоментно в аэробный (BD BACTEC™ PLUS+ Aerobic/F) и в анаэробный (BD BACTEC™ PLUS+ Anaerobic/F) флаконы. Альтернативный набор складывается из: а) аэробного флакона и дополнительного аэробного; б) анаэробного и/или Mycosis IC/F, и/или Myco F/Lytic флаконов (оба типа флаконов - для культивирования гемокультур грибов).

Оптимальный объем крови для гемокультивирования

• Дети:
• Новорожденные 1-2 мл крови/флакон (допустимый для посева объём крови - 0,5-5 мл)
• Дети 2-5 мл/флакон
• Подростки 10-20 мл/флакон
• Взрослые:

Одномоментно 20 -30 мл (по 10 мл во флакон) крови 2 или 3 раза в течение 24 ч

ШАГ 1	Продезинфицируйте место венепункции 70%-ным раствором этилового спирта. Круговыми движениями от центра к периферии продезинфицируйте место венепункции 1-10%-ным раствором йода или хлоргексидином Дождитесь полного высыхания антисептика
ШАГ 2	Промаркируйте подготовленные к посеву флаконы того или иного типа (с соответствующей задачам исследования питательной средой), указав на этикетке каждого флакона Ф.И.О. пациента и/или № истории болезни, время отбора пробы крови, № и/или название отделения Удалите пластиковый колпачок и протрите резиновую пробку 70%-ным раствором этилового спирта
ШАГ 3	Используйте BD Vacutainer® (367282 / 367284) - набор для отбора проб крови (игла -“бабочка” 21G / 23 /G, зелёная с защитной защелкой; 18-тисантиметровый катетер, Луер-адаптер с клапаном для отбора проб крови, 50 шт/упак.) с адаптером для флаконов (364815; 250 шт/упак.) Пропунктируйте вену Вставьте флакон в держатель Держите флакон строго вертикально
	В первую очередь засевайте аэробный флакон Под действием вакуума кровь начнет набираться во флакон самостоятельно. Наполните флакон соответствующим количеством крови (в “детские” флаконы - 1-3 мл, [для новорожденных - 0,5-2 мл], во “взрослые” флаконы - 7-10 мл) Извлеките флакон из держателя Вставьте в держатель следующий флакон
ШАГ 4	Приложите сухую стерильную салфетку к месту венепункции Извлеките иглу из вены Транспортируйте флаконы в лабораторию как можно скорее

При правильном заборе крови контаминация составляет не более 2-3 % всех гемокультур. Использование наборов для забора крови BD VacutainerTM существенно снижает степень контаминированности культур.

При наличии роста микроорганизма во флаконе анализатор оповещает персонал лаборатории с помощью световой индикации на передней панели прибора, а также с помощью звуковой индикации. Таким образом, нет необходимости делать высевы из всех флаконов, высев делается целенаправленно из положительного флакона.

Объем исследований и микропейзаж при гемокультивировании в бактериологических лабораториях ЛПУ Воронежской области.

Общее количество проб крови для исследования на стерильность по Воронежской области составило 12515. В 2013г это число было гораздо меньше: 8406. Доля этих анализов по лечебно-профилактическим учреждениям показана в таблице:

Общее количество положительных высевов из образцов крови по области 1245, что составило 9,95% , в 2013г 808, что составило 9,6%.

Микропейзаж выделенных культур :

Наиболее часто из крови выделялись следующие культуры: S. аureus- 165, коагулазоотрицательные стафилококки- 639 (основная масса- S. epidermidis- 478), Enterococcus faecalis- 74, Pseudomonas sp- 59, Klebsiella- 54, E. coli-31, Enterococcus faecium 36. Среди грибов рода Candida чаще всего выделялись C. albicans и C. glabrata.

В небольшом количестве выделялись: Enterobacter-18, Ps. aeruginosa 20, Acinetobacter 17, Streptococcus spp 20.

В количестве от 2 до 5 выделялись такие культуры, как Str.viridans, Str. β-haemolyticus, Str pyogenes, Proteus mirabilis, Proteus vulgaris, Candida tropicalis, Candida krusei.

Все бактериологические лаборатории в Воронежской области, за исключением двух, исследуют кровь на стерильность ручными методами. Бактериологические анализаторы «Бактек» имеются в бактериологических лабораториях Воронежской областной клинической больницы №1 и в лаборатории Перинатального центра 1к. В результате анализа микробиологического мониторинга за 2011-2014гг в этих лабораториях отмечается увеличение количества высеваемости культур микроорганизмов. До использования аппаратной технологии высеваемость микроорганизмов из крови в составляла в 2010-2012гг от 6 до 10%, при исследовании с помощью «BD Bactec 9050» в 2013г- 24,7%, в 2014г-26,9% у взрослых пациентов и у новорожденных в 2013гг 17,5%, в 2014г-20,3%.

Литература

1. «Руководство по медицинской микробиологии» под редакцией А.С. Лабинской, Н.Н. Костюковой, Москва, 2013г

2. «Методы клинических лабораторных исследований». Справочное пособие под редакцией В.В. Меньшикова. Том 3 Клиническая микробиология. М, 2009.

3. «Лаборатория» журнал для врачей №5 2014г

4. «Клиническая микробиология» П.Р. Мари, И.Р. Шей, краткое руководство, пер с англ., Москва, 2006г

5. Клиническая Микробиология и Антимикробная Химиотерапия
2013, том 15 (4).