Инфекция, вызванная вирусом иммунодефицита человека, – серьезный диагноз. Ошибки при диагностике могут привести к плачевным последствиям. Анализ ИФА на ВИЧ – наиболее доступный метод исследования, но не во всех случаях он информативен.

ИФА – иммуноферментный анализ. Задача метода ИФА – выявление антител к вирусу иммунодефицита в биологическом материале. С помощью метода можно отследить присутствие в жидкости не самих вирусов, но только антител, вырабатывающихся в ответ на их присутствие. Иммуноферментный анализ широко используется при диагностике ЗППП. Он помогает выявить , передающиеся половым путем.

Существует несколько видов ИФА: прямой вариант, косвенный вариант, метод «сэндвича». В любом случае методика основана на определении наличия антител, которые служат индикатором проникновения чужеродного агента. Чтобы выявить эти «метки», биологический компонент обрабатывают ферментами.

Иммуноферментный анализ определяет антитела с точностью 96 – 98%, погрешность незначительна. Она составляет 2 – 4%.

ИФА – метод диагностики ВИЧ

ИФА анализ на ВИЧ – это первый этап диагностики. Антигенами вируса иммунодефицита являются протеины p24, p15, p17, p31 и гликопротеины gp 41, gp55, gp66, gp120, gp160.

Чтобы обнаружить вирусный белок, берут порцию крови из вены. Образец, направленный на исследование крови ИФА, обрабатывают иммуноферментными реагентами. Из крови выделяют сыворотку. Если в ходе исследования обнаруживаются , значит, в крови уже присутствует вирус.

Кровь сдают строго натощак. За 2 дня до анализа не рекомендуется есть жирную пищу и употреблять алкоголь. Следует за 14 дней прекратить прием противовирусных препаратов.

Преимущества метода:

• сравнительно небольшая стоимость;
• высокая стабильность реагентов;
• высокая чувствительность;
• короткий срок проведения;
• минимальное влияние человеческого фактора.

Современные тест-системы для ИФА производят по мировым стандартам. Это повышает точность метода.

Иммуноферментный анализ не всегда дает достоверные результаты. После попадания вируса в кровь начинается латентная (скрытая) стадия развития. Период, пока вирусы не начали размножаться, и антитела еще не сформированы, называется «время серонегативного окна». Делать ИФА на этом этапе бессмысленно. Если заражение произошло, результат будет . Как быстро вирус себя обнаружит, зависит от того, какое количество опасных клеток попало в организм. При незащищенном половом акте или переливании зараженной крови этот срок будет минимальным.

Для высокой достоверности ИФА на ВИЧ исследование проводят трижды. Сроки сдачи ИФА на вирус иммунодефицита человека:

• через 6 недель после вероятного контакта,
• через 3 месяца,
• спустя полгода.

ИФА 4 поколения на ВИЧ – метод, наиболее информативный на ранних сроках заражения. Его можно проводить уже через 1 месяц после предполагаемого инфицирования. Тест на является дорогостоящим по сравнению с аналогом 3-го поколения. Поэтому в государственных медучреждениях он используется как дополнительный метод диагностики. Бесплатно проводится тест 3. Если по его итогам однозначного ответа дать нельзя, пациента направляют на ИФА 4 поколения.

Важно! Сразу после инфицирования человек становится заразным. Он опасен для окружающих, даже когда еще не знает о своем диагнозе!

Если при ИФА выявлены антитела к антигенам ВИЧ, необходимо проводить дополнительные исследования. К таким относится . Достоверность этого метода – 80%. С помощью ПЦР исследуют кровь, сперму и влагалищные выделения. Биологическую жидкость расщепляют в медицинском реакторе, затем подвергают обработке ферментами. В итоге получают данные о том, какова концентрация клеток ВИЧ в жидкой среде. Из-за большой погрешности (20%) при положительном результате дополнительно проводят иммунный блоттинг.

Следующий этап диагностики – тест Комбо (или иммунный блоттинг). Это высокочувствительное исследование (98% достоверности), которое проводят, если через 6 месяцев результаты ИФА неоднозначны.

Расшифровка результатов ИФА

Время расшифровки составляет от 24 до 48 часов. Если необходимо получить информацию срочно (требуется хирургическое вмешательство), расшифровку проводят за 2 часа. В провинциальных медицинских пунктах не всегда есть необходимые реагенты. Пробу берут по месту обращения, затем ее передают в областной центр. При таких обстоятельствах итог можно узнать через 1- 2 недели.

Результат иммуноферментного анализа может быть либо положительным, либо отрицательным; других вариантов нет.

Даже если при первичном и повторных ИФА итог был положительным, пациента нельзя признать ВИЧ-инфицированным. Возможна погрешность. Причины ложноположительного результата:

• хронические заболевания;
• длительные инфекционные заболевания;
• беременность.

Поэтому результат анализа должен быть уточнен дополнительными исследованиями.

Если при проведении иммуноблоттинга на ВИЧ (реактивный), человек считается ВИЧ-инфицированным, а значит, что он здоров.

Клетки вируса со временем адаптируются к назначенным препаратам. Чтобы контролировать , тест ИФА периодически повторяют.

Иногда иммуноблоттинг показывает ложноотрицательный результат. Крайне редко вирус иммунодефицита 6 месяцев (и более) . Это возможно, если в кровь попало незначительное количество клеток вируса. В 0,5% от общего числа случаев диагностировать заражение удается лишь через год. В 99,5% в течение полугода после инфицирования при проведении ИФА получится достоверный результат.

Даже при проведении высокоточных исследований остается вероятность ошибки, составляющая 2%. Не следует забывать о человеческом факторе. Чтобы исключить вероятность ошибки, тест можно провести в 2-х разных учреждениях.

Как проводится исследование методом ИФА

Механизм реакции

В основе иммуноферментного анализа лежит иммунная реакция антигена с антителом,а присоединение к антителам ферментной метки позволяет учитывать результат реакции антиген-антитело по появлению ферментативной активности или по изменению ее уровня.В упращенном виде механизм реакции можно представитьследующим образом:

	Первая реакция происходит между определяемым Ig (Ab) и очищенным антигеном возбудителя (Ag), фиксированным к поверхности лунок иммунологического планшета
	Для выявления образовавшихся иммунных комплексов проводят вторую иммунологичесую реакцию, в которой в качестве антигена выступает связавшийся специфический Ig, а в качестве антител к нему - коньюгат, представляющий собой Ig (Ab) к соответствующему Ig человека, меченный ферментом -пероксидазой (K)
	Далее происходит ферментативная реакция, катализируемая ферментной частью молекулы коньюгата.Субстратом данной реакции служит бесцветное вещество - хромоген, который в ходе реакции образует окрашенное вещество. Интенсивность окраски в лунке определенным образом зависит от количества содержащихся в пробе иммуноглобулинов.

Подсчет результатов

Проведение иммуноферментного анализа

Для серодиагностике используются 96 луночные полистирольные планшеты, на стенках ячеек которых заранее адсорбируется антиген. Исследуемая сыворотка вносится в ячейку планшета. При этом гомологичные антигену антитела прикрепляются к нему. Не прикрепившиеся антитела удаляются промыванием. Далее в ячейки вносят антитела против иммуноглобулинов (антител) человека, меченные ферментом. Если в исследуемой сыворотке присутствовали определяемые антитела, то они на этом этапе выступят в роли антигенов, с которыми прореагируют меченные антитела. Добавление после промывки хромогенного вещества (красителя) позволит учесть реакцию по развивающемуся окрашиванию в ячейках. Интенсивность окраски при этом пропорциональна количеству фермента, а следовательно количеству антител.При измерении оптическую плотности (ОП) жидкости в ячейке и сравнивании ее с контрольным образцом подсчитывается концентрация антител в единицах объема.Наиболее часто применяется подсчет результатов в единицах оптической плотности.Надо учитывать,что для каждой тест-системы есть свои показатели учета результатов и показатели нормы и патологии на которые надо ориентироваться при интерпретации результатов.

Какие инфекции можно выявить методом ИФА

В основном в современной венерологии применяется для диагностики сифилиса (в комплексе с другими реакциями),ВИЧ-инфекции ,вирусных гепатитов .Имеет ограниченное значение для диагностики хламидийной инфекции ,цитомегаловирусной инфекции и других герпетических инфекций .Метод ИФА используется также для определения антител при различных инфекционных заболеваниях,уровня гормонов,аутоантител и различных маркеров онкологических заболеваний.

Как интерпретировать результаты ИФА

Исследование наличия и уровня антител различных классов в некторых случаях помогает определить стадии инфекционного процесса

Стадия заболевания	IgM	IgA	IgG
Первичная фаза (2 недели от инфицирования)
Первичная фаза (2,5 - 3 недели от инфицирования)
Первичная фаза (3-4 недели от инфицирования)
Обострение хронической фазы (2 недели от начала обострения)
Хроническая фаза
Прошедшая (излеченная инфекция)
Выздоровление		снижение титра в 2-4 раза после успешного лечения	снижение титра в 4-8 раз через 1-1.5 мес после успешного лечения
Отрицательный результат

К сожалению,такое важное преимущество ИФА, как количественное определение антител не имеет большого значения в практической работе - т.е. не позволяет точно установить диагноз и не влияет на дозировку и сроки назначения лекарственных средств.

Какая роль метод ИФА в диагностике сифилиса

Метод ИФА в диагностике сифилиса был впервые применен в 1975 год.В настоящее время он широко применяется для серологической диагностики сифилиса в России и используется как потверждающий тест на сифилис.Обычно проводят исследование,выявляющее так называемые суммарные антитела к антигенам бледной трепонемы (IgM и IgG),хотя в отдельных случаях возможно и определение только "ранних" антител класса М.ИФА при сифилисе становится положительным после 3 недели с момента инфицирования и остается положительным довольно длительное время даже после лечения (иногда всю жизнь).Поэтому как тест,подтверждающий излечение сифилиса,ИФА не используется.В большинстве случаев проводится только качественное определение ИФА - т.е. только положительный или отрицательный результат,хотя возможно и количественное определение.

Для проведения комплексной оценки состояния организма применяется ИФА-метод проведения диагностики. Иммуноферментный анализ крови предназначен для диагностирования инфекционных, гематологических, первичных и вторичных иммунодефицитов.

Что такое анализ ИФА

Многие пациенты интересуются методом ИФА: что это, для чего проводится исследование. Иммуноферментный анализ начал использоваться сравнительно недавно. Изначально с его помощью изучались антигенные структуры, и он проводился только в научных целях. Затем ученые пришли к выводу, что при помощи ферментов можно выявить специфические антитела, возникающие в ответ на протекающее заболевание.

Изначально эта методика применялась только узкопрофильными медицинскими учреждениями, в основном на станциях переливания крови. Особое значение имеет метод ИФА для выявления ВИЧ-инфекции.

На сегодняшний день этот метод имеет широкую сферу применения. Современные лаборатории используют его для диагностирования:

• опухолей;
• гормональных нарушений;
• инфекций;
• хронических или перенесенных ранее инфекционных процессов;
• гельминтов.

Если в организме протекает инфекционный процесс, то этот вид диагностики считается наиболее оптимальным для определения типа заболевания.

Суть метода и его виды

Метод ИФА - что это, какова суть этого вида исследования? Этот и многие другие вопросы интересуют пациентов. Основой этого способа диагностики считается связывание иммунных клеток организма с антигенами возбудителей инфекции. Получившийся комплекс определяют при помощи специального фермента.

Чтобы понять принцип метода ИФА, нужно знать, как проходит реакция антиген-антитело. Антиген - чужеродная для организма молекула белкового происхождения, которая проникает вместе с инфекцией. Частички чужой крови, несовпадающие по группе, также считаются антигенами. В организме они провоцируют иммунную реакцию, направленную на защиту от чужеродных веществ. Поэтому тело человека вырабатывает антитела - иммуноглобулины, способные присоединяться к антигенам, образуя иммунный комплекс. Такие соединения намного легче распознаются и уничтожаются клетками иммунитета.

Реакцию на наличие таких иммунных комплексов проводят в лабораторных условиях, применяя уже готовые соединения, чтобы определить, есть ли в крови подобные им.

Суть метода ИФА достаточно простая, однако из-за того, что анализ крови проводится для выявления многих инфекций и болезней, существует несколько его разновидностей. Каждый отличается схемой проведения и областью применения. Может быть прямой или непрямой ИФА. Прямой метод подразумевает под собой то, что применяются обездвиженные антитела, реагирующие с антигенами. Основным плюсом такого метода является то, что все процессы можно автоматизировать, а значит, диагностика занимает немного времени.

Непрямой метод подразумевает, что применяются антитела вторичного характера. А на твердой фазе обездвиживается антиген. Анализ позволяет определить антитела к различным антигенам. Это помогает достигнуть более точного результата, однако метод отличается сложностью.

Преимущества исследования

Методом ИФА имеют множество преимуществ в сравнении с другими способами диагностики. К основным можно отнести такие:

• высокая чувствительность;
• стабильность при хранении ингредиентов;
• скорость проведения диагностики;
• можно применять небольшое количество исследуемого материала;
• есть возможность автоматизации всех процессов;
• можно выявить инфекцию на самых ранних стадиях.

Этот метод диагностики универсальный, поэтому подходит для проведения массового обследования. При помощи анализа есть возможность проследить динамику протекания инфекционного процесса.

Показания для анализа и забор материала

Проведение исследования при помощи метода ИФА могут назначить при подозрении на множество болезней:

На наличие антител исследуется венозная кровь. Перед проведением анализа из нее выделяют элементы, которые могут осложнять исследование. Может проводиться забор и других биологических жидкостей.

Чтобы получить наиболее точную информацию, забор крови проводится на голодный желудок. Если процедура была назначена для определения скрытой инфекции, то за несколько недель до проведения анализа нужно прекратить принимать антибактериальные и противовирусные препараты. В зависимости от оснащенности лаборатории, где проводился забор материала, результат можно получить в течение суток. В экстренных случаях это время сокращается до нескольких часов.

Анализ на сифилис

Использование метода ИФА помогает определить наличие многих инфекций в организме, в частности и сифилиса. Для проведения исследования берется кровь из вены натощак. Затем осуществляется исследование, помогающее определить не только наличие болезни в организме, но и точные сроки ее начала, так как в течение болезни одни антитела заменяются другими в строго определенном порядке.

При острой фазе, свидетельствующей о продолжительном течении болезни, или при обострении хронической инфекции в крови будут обнаружены иммуноглобулины типа M. Наличие иммуноглобулинов типа A свидетельствует о том, что инфекция обитает в организме более 4 недель. Иммуноглобулины группы G говорят о разгаре болезни или о ранее проведенной терапии.

По степени окраса лунок оценивают интенсивность протекания инфекционного процесса, так как его насыщенность зависит от количества образовавшихся иммунных комплексов.

Анализ на ВИЧ-инфекцию

ИФА-метод применяется и для проведения анализа на в таком случае имеет определенные особенности, которые связаны с протеканием и прогрессированием болезни. Этот метод исследования считается наиболее приемлемым для определения, однако проводить его нужно не ранее чем через месяц после воздействия факторов риска. Это связано с наличием инкубационного периода, протекающего от 45 дней и до 6 месяцев. Именно поэтому анализ нужно повторить через полгода.

• аскаридоз;
• лямблиоз;
• токсоплазмоз и др.

Несмотря на все преимущества, существуют также недостатки метода ИФА. Основным недостатком считается то, что при проведении исследования доктор должен заранее иметь предположение о заболевании.

При нет возможности случайно найти возбудителя и определить его иммуноферментные свойства. Тест только указывает на наличие антител в крови больного. Кроме того, это достаточно дорогостоящий анализ.

Расшифровка анализа

Результатом качественного ИФА будет либо наличие антител, либо их отсутствие в крови. Если проводится количественный анализ, то концентрация антител может выражаться или в цифровом значении, или в определенным количеством знаков +.

Кроме того, анализируются такие показатели, как:

Показатель IgM указывает на протекание острого инфекционного процесса в организме. Полное его отсутствие может говорить об отсутствии возбудителя болезни или переходе ее в хроническую стадию.

Показатель IgA при отрицательном результате теста на IgM говорит о хронической или скрытой инфекции. Одновременное присутствие IgM и IgA свидетельствует о том, что болезнь находится в острой стадии. Наличие IgG говорит о переходе болезни в хроническую стадию или о полном выздоровлении и выработке иммунитета.

Сейчас существуют специальные тесты ИФА, которые можно провести самостоятельно.

ИФА или иммуноферментный анализ относится к серологическим исследованиям и предназначен для обнаружения и диагностики патологических микроорганизмов в сыворотке крови.

Посредством анализа определяют различные классы иммуноглобулинов к бактериям: IgM — при остром патологическом процессе, а IgG на стадии выздоровления, которые в отдельных случаях сохраняются на протяжении всей жизни.

Посредством иммуноферментной диагностики выявляют заболевания различной этиологии:

Также ИФА показан для диагностирования сифилиса при подтверждении положительных результатов методом РВ, и позволяет отслеживать эффективность лечения при патологическом процессе.

Иммуноферментный анализ назначается по показаниям (при подозрении на заражение микроорганизмами), является обязательным при беременности и перед хирургическими операциями для выявления носительства различных бактерий.

Процедура анализа производится утром натощак, материал (кровь) забирается из вены. Результаты диагностического исследования готовятся до 10 дней.

Положительный ИФА

Положительный результат ИФА подтверждается наличием иммуноглобулинов класса IgG и IgM. Выявленные титры в крови IgM всегда указывают на болезнь в прогрессирующей стадии, у здорового человека данные антитела отсутствуют.

А IgG свидетельствует о перенесенной ранее инфекции, либо о носительстве патогенных микроорганизмов, некоторые из которых в незначительном количестве расцениваются в пределах нормы. К примеру, бактерии стрептококков и стафилококков присутствуют в каждом человеческом организме.

Сифилис

Антитела IgM при сифилисе обнаруживаются со 2 недели после заражения и указывают на наличие первичного, вторичного или врожденного эпизода, при лечении они исчезают приблизительно через полгода, при отсутствии терапии — через 18 месяцев. Если одновременно выявляются оба вида иммуноглобулинов – подтверждается сифилис в острой фазе. У переболевших людей антитела IgG к сифилису остаются в сыворотке пожизненно.

Вирусные гепатиты

IgM к вирусному гепатиту часто выявляются еще в инкубационном периоде заболевания, до появления первых проявлений и сохраняются во время течения болезни, после излечения – не определяются. Исключение составляет вирусный гепатит С, при котором IgM обнаруживаются как на его активной, так и скрытой или хронической стадии

Антитела IgG на гепатит А могут присутствовать даже у здоровых людей, что обусловлено перенесенной инфекцией или снижением иммунитета, а наличие IgG к гепатитам В, С и D у здоровых людей не наблюдается.

ЦМВИ

ЦМВИ распространена практически повсеместно и не представляет угрозы здоровью населения. Однако несет смертельную опасность для новорожденного и плода при внутриутробном инфицировании.

Выявление антител IgM к цитомегаловирусу указывает на первичное инфицирование или активацию латентной фазы. Титры IgG сохраняются у переболевших людей на протяжении 10 лет.

Герпес

Антитела к вирусу герпеса у здоровых людей в норме отсутствуют. Содержание IgM указывает на острую фазу заболевания, IgG – на скрытую (в данном случае человек является носителем инфекции). При содержании IgG к герпесу следует знать, что вирус в любое время способен активизироваться из латентной стадии в прогрессирующую.

Ветряная оспа

При ветряной оспе и в течение 2 лет после излечения в крови сохраняются иммуноглобулины класса IgM. В норме у здоровых людей антитела к ветряной оспе не выявляются.

Болезни, вызываемые стафилококками и стрептококками

У всех людей присутствуют иммуноглобулины к стафилококкам и стрептококкам. Поэтому диагностировать патологический процесс, вызванный данными группами бактерий можно посредством проведения двукратного иммуноферментного метода. Если отмечается нарастание титров при повторном ИФА (через неделю после первого), то анализ считается подтвержденным.

Хламидиоз

О положительном результате на хламидии свидетельствует выявление IgM титрами 1:8 и выше, и класса IgG – 1:64 и выше, которые повышаются во время течения болезни и достигают высоких значений. К примеру, у детей с хламидийной пневмонией, титры повышаются до 1:2000 – 1:4000. Наличие IgM свидетельствует об активности хламидий, через некоторое время после инфицирования в крови выявляются глобулины IgG.

Об отрицательном иммуноферментном анализе свидетельствует отсутствие антител IgM . Определяющиеся IgG не во всех случаях расценивают как подтверждение диагностического исследования, часто они сохраняются на протяжении нескольких лет после перенесенной инфекции, иногда пожизненно.

После сифилиса, инфекционного мононуклеоза иммуноглобулины IgG сохраняются на протяжении всей жизни и определяются в сыворотке крови. На протяжении 10 лет остаются микроорганизмы ЦМВИ, кори, краснухи, токсоплазмоза.

Титры к амебиазу сохраняются от нескольких месяцев до нескольких лет. Антитела к бактериям стафилококка и стрептококка определяются абсолютно у всех людей в небольшом количестве.

В вышеперечисленных случаях выявление иммуноглобулинов IgG после перенесенных заболеваний позволяет расценивать результаты ИФА, как отрицательные.

Норма при беременности

В первом триместре беременности каждая женщина проходит полное обследование организма, которое включает в себя иммуноферментный анализ.

Обязательными являются исследования на токсоплазмоз, ЦМВИ, хламидии, герпес 2 типа (генитальный), краснуху, уреаплазму и микоплазму, так как эти заболевания несут серьезную угрозу для развития плода. Они способны проникать в организм ребенка, минуя плацентарный барьер.

А особую опасность представляют на протяжении первого триместра беременности и практически всегда ведут к внутриутробной гибели плода и самопроизвольному выкидышу .

Проблема вышеперечисленных болезней в том, что они часто протекают в бессимптомной стадии, без видимых клинических проявлений, и выявить их возможно только посредством иммуноферментной диагностики.

О хороших результатах анализа можно говорить, если микроорганизмы в сыворотке не выявляются. Определяющиеся IgG свидетельствуют о носительстве вирусов и требуют постоянного наблюдения за женщиной для оказания своевременной терапии при внезапном обострении. Положительный IgM сигнализирует о прогрессирующем патологическом процессе, и требует незамедлительного устранения возбудителя.

Выявление титров IgG на краснуху указывает на перенесенное ранее заболевание и является нормой при беременности. IgG к ЦМВИ также не несут особой угрозы для плода, однако, не исключается возможность обострения (частота проявления, примерно 1-2%).

Особую угрозу представляет собой наличие IgG к вирусу герпеса 2 типа или генитальному (ВПГ2), так как риск обострения значительно повышается во время родов. В гестационном периоде частота проявления острой фазы случается в 0,9% случаях. Поражение плода вирусом герпеса при прохождении половых путей происходит в 40% случаях и приводит к летальному исходу в 50%.

При перенесенном токсоплазмозе IgM могут сохраняться до 2 лет после лечения. Риск заражения плода в этом случае составляет 17% в первом триместре и увеличивается до 60% к третьему, так как основной путь инфицирования – трансплацентарный. Выявленные IgG к токсоплазмозу многие специалисты склонны оценивать, как отрицательный результат, который практически не представляет угрозы для течения беременности.