В настоящее время Нp-инфекция является одной из наиболее широко распространенных на земном шаре инфекций. Согласно некоторым оценкам, до 50% населения во всем мире инфицированы этим микроорганизмом. У большинства людей заражение происходит в молодом возрасте (до 20 лет), в то время как частота инфицирования взрослого населения составляет около 0,5% в год. Наблюдается обратная зависимость между социально-экономическим положением человека и распространенностью инфекции, вызванной Hp. В США, странах Европы и Океании инфицировано около 1/3 населения, большую часть которой составляют лица старшей возрастной группы. В России процент инфицированных - 85%, В Америке среди белого населения - 50% и среди черного - 70%, в Индии - 100%. Несколько крупных эпидемиологических исследований указывают на более высокую распространенность инфекции у мужчин, чем у женщин (в среднем на 5-20%) . В некоторых развивающихся странах большинство детей инфицируется H.pylori уже к 10-летнему возрасту, а к середине жизни возбудитель обнаруживается практически у каждого человека.

Helicobacter pylori - грамотрицательная микроаэрофильная бактерия, имеющая изогнутую S-образную или слегка спиралевидную форму с 4-6 жгутиками, обуславливающими способность чрезвычайно быстро двигаться даже в густой слизи или агаре. При культивировании на искусственных питательных средах принимает форму палочки, а при длительной культивации - коккоидную форму. Длина бактерии составляет 2,5-3,5 мкм, ширина - 0,5-1,0 мкм. Наиболее благоприятными условиями существования Нр являются температура 37-42oС и рН среды 6-8. При более низких значениях рН (4-6) бактерии сохраняют свою жизнеспособность, но прекращают рост и размножение.

Бактерия Нр открыта в 1979 году австралийским патологом Робином Уорреном и Барри Маршаллом. Им удалось выделить и изолировать этот микроорганизм из проб слизистой оболочки желудка человека, а также они были первыми, кому удалось культивировать этот микроорганизм на искусственных питательных средах. В оригинальной публикации Уоррен и Маршалл высказали предположение, что большинство язв желудка и гастритов у человека вызываются инфицированием микроорганизмом Helicobacter pylori, а не стрессом или острой пищей, как предполагалось ранее. В 2005 году Робин Уоррен и Барри Маршалл были удостоены Нобелевской премии по медицине.

Источником инфекции, вызванной H.pylori, является человек - больной или бактерионоситель. Нр могут обнаруживаться в слюне, испражнениях, зубном налете. Возбудитель передается орально-оральным, фекально-оральным, контактно-бытовым путем. Орально-оральный путь передачи инфекции реализуется при зондировании желудка и фиброгастроскопии в том случае, если для стерилизации эндоскопов и зондов применяются несовершенные методы дезинфекции. Не исключается попадание H.pylori в организм с микроаэрозолем, который образуется при разговоре или кашле. Как правило, все члены семьи бывают инфицированы одним штаммом Hp, что доказывает контактно-бытовой путь передачи.

Несмотря на высокий процент инфицирования населения Hp подавляющее большинство инфицированных лиц не имеют клинических проявлений на момент диагностики, но они представляют собой группу риска, в которой с течением времени развивается ряд заболеваний. У большинства инфицированных лиц клинические проявления болезни не развиваются в течение всей жизни.

*Инфицирование H.pylori является причиной как минимум 327 тыс. новых случаев рака желудка в год.

Инфицирование H.pylori обычно происходит в молодом возрасте, однако то или иное заболевание обычно развивается только спустя несколько десятков лет. В течение этого длительного периода инкубации в организме хозяина развивается иммунный ответ на проникновение возбудителя. Иммунные реакции не в состоянии ликвидировать инфекцию, однако могут иметь важное значение в развитии болезни. В процессе жизнедеятельности микроба в желудке образуется аммиак защищающий его от переваривания желудочным соком, аммиак попадая в кровь разносится по всему организму, повреждая практически все внутренние органы и вызывая нарушения в работе сердечно - сосудистой системы, центральной нервной системы, мочеполовой и эндокринной систем. Во многих случаях инфекция может протекать бессимптомно. Клиническая картина соответствует развившемуся заболеванию.

Показаниями к назначению анализа для выявления НР являются: язвенная болезнь желудка и/или 12-перстной кишки; неязвенная диспепсия; гастро-эзофагеальная рефлюксная болезнь; атрофический гастрит; рак желудка у ближайших родственников; впервые выявленная хеликобактер-инфекция у совместно проживающих лиц или родственников; профилактические обследования, для выявления людей с риском развития язвы или рака желудка; оценка эффективности эрадикационной терапии; невозможность проведения инвазивных методов диагностики (эндоскопия).
Диагностика инфекции Нelicobacter pylori возможна при использовании целого ряда методов, которые позволяют выявить сам микроорганизм, признаки его жизнедеятельности или иммунологический ответ организма на инфекцию (антитела в сыворотке крови). Как правило, пациента направляют на исследование при обнаружении активного воспалительного процесса в желудке или двенадцатперстной кишке.
1) Обнаружение специфических антихеликобактерных антител классов в крови больного.
2) Дыхательные тесты с регистрацией продуктов жизнедеятельности (углекислый газ, аммиак)
3) Обнаружение ДНК бактерии методом ПЦР в анализах кала, слюны, зубном налете.
4) Обнаружение микроорганизмов при микроскопическом исследовании биоптата слизистой оболочки, взятого при ФЭГДС.

Диагностикой и лечением этой инфекции занимается врач-гастроэнтеролог.

Выявление инфекции Helicobacter pylori в отсутствие воспалительных заболеваний желудочно-кишечного тракта не является показанием к терапии. Для лечения хеликобактерной инфекции разработано несколько терапевтических схем, включающих один, два или три антибактериальных препарата (амоксициллин, кларитромицин, фуразолидон и др.), антисекреторные средства (омепразол, ранитидин) и препараты висмута.
Контроль за эрадикацией (уничтожением) Helicobacter pylori осуществляют через 2-6 недель после проведенного лечения как минимум двумя методами диагностики из приведенных выше.

Классификация методов выявления инфекции Нelicobacter pylori представлена в таблице.

Инвазивные методы требуют проведения эндоскопического исследования (ФЭГДС) с биопсией и дальнейшим изучением гастробиоптатов. Неинвазивные методы эндоскопического исследования не требуют.

Гистологический метод

Гистологический метод исследования биоптатов СОЖ - микроскопия окрашенных различными способами (гематоксилин-эозином, по Гимзе, толуидиновым синим, по Вартину-Старри) мазков-отпечатков гастробиоптатов. Этот метод позволяет определить выраженность воспаления СОЖ, наличие атрофии, кишечной метаплазии и наличие (степень обсемененности) НР.

Быстрый уреазный тест (Хелпил-тест)

Быстрый уреазный тест (Хелпил-тест) - определение HР по уреазной активности микроорганизма в биоптатах СОЖ. Helicobacter pylori продуцирует уреазу, под влиянием которой происходит гидролиз мочевины с образованием иона аммония. При этом увеличивается рН среды, что можно зафиксировать с помощью изменения цвета индикатора. Гастробиоптаты помещают в раствор, содержащий мочевину и индикатор, изменение цвета которого косвенно свидетельствует о наличии HР.

Молекулярно-генетический метод - ПЦР в биоптате

Молекулярно-генетический метод исследования биоптатов СОЖ с помощью ПЦР позволяет выделять высокопатогенные и низкопатогенные штаммы HР.

Бактериологический метод

Бактериологический метод исследования биоптатов СОЖ: культуральное исследование и определение чувствительности HР к антибиотикам перед терапией первой линии важно проводить в регионах с высокой резистентностью к кларитромицину (более 15-20%), если планируется использовать стандартную трехкомпонентную эрадикационную терапию, одним из компонентов которой является кларитромицин. Бактериологический метод с определением чувствительности к антибиотикам также необходимо применять при неэффективности эрадикационной терапии второй линии.

Исследование кала на наличие антигена HР (ИФА)

ИФА (особенно с применением моноклональных антител) выявления антигена HР в кале является высокочувствительным и специфическим методом как для первичной диагностики инфекции НР, так и для контроля результата лечения.

Серологический метод

Серологический метод (ИФА) - определение антител IgG к HР в сыворотке крови - простой и доступный метод первичного скрининга инфекции. Учитывая, что антитела к HР сохраняются в течение многих месяцев после эрадикации микроорганизма, использование серологического метода не рекомендуется для оценки эффективности проведения эрадикационной терапии.

Уреазный дыхательный тест с 13С-мочевиной

Уреазный дыхательный тест - исследование состава выдыхаемого воздуха после приема раствора мочевины, меченной изотопом углерода (13С). При наличие в желудке обследуемого HР мочевина под действием уреазы, продуцируемой бактерией, подвергается гидролизу до Nh5+ и HCO3- с последующим образованием из HCO3- углекислого газа, который, попадая в кровоток, затем выделяется через легкие и может быть определен спектрометром в выдыхаемом воздухе. Этот тест может использоваться как для первичной диагностики HР, так и для оценки эффективности эрадикации.

На фоне инфекции Helicobacter pylori развиваются такие воспалительные заболевания желудочно-кишечного тракта, как язва желудка или двенадцатиперстной кишки, эрозивный гастрит, гастродуоденит.

Нормы

• Гистологический метод исследования биоптатов СОЖ - в норме патологические изменения не определяются.
• Быстрый уреазный тест (Хелпил-тест) - в норме тест отрицательный.
• Молекулярно-генетический метод исследования биоптатов СОЖ с помощью ПЦР - в норме результат отрицательный.
• Бактериологический метод исследования биоптатов СОЖ - в норме результат отрицательный.
• ИФА (особенно с применением моноклональных антител) выявления антигена HР в кале - в норме результат отрицательный.
• Серологический метод (ИФА) - в норме результат отрицательный.
• Уреазный дыхательный тест - в норме тест отрицательный.

online-diagnos.ru

Helicobacter pylori (хеликобактериоз), антиген, кал

Helicobacter pylori antigen, stool

Описание исследования

Helicobacter pylori - бактерия в форме спирали, которая поражает стенку желудка и двенадцатиперстной кишки, вызывая атрофический гастрит, язвенную болезнь и злокачественные образования. Около 50-60% населения инфицировано Helicobacter pylori, обычно заражение происходит еще в детстве.Благодаря своей форме Helicobacter pylori способна повреждать защитный слой слизистой оболочки желудка. Бактерия продуцирует фермент уреаза, который способен нейтрализовать соляную кислоту желудка. Таким образом стенка желудка становится восприимчивой к повреждающему действию соляной кислоты и пепсина, что ведет к язвенной болезни желудка или двенадцатиперстной кишки.Helicobacter pylori может действовать непосредственно на клетки желудка, ослабляя защитный механизм и провоцируя воспаление слизистой. Helicobacter pylori способна усиливать секрецию соляной кислоты в желудке, хотя механизм этого процесса не изучен. Путь передачи инфекции - орально-фекальный и бытовой. Заражение обычно происходит от человека к человеку посредством близкого контакта (при поцелуях). Источником инфекции может быть слюна, вода.Часто инфекция может протекать латентно, не вызывая никаких симптомов.Язвенная болезнь двенадцатиперстной кишки практически в 100% случаев ассоциирована с Helicobacter pylori. Антибактериальная терапия, которая направлена на уничтожение бактерии, приводит к полному излечению от язвенной болезни.У 90% страдающих язвенной болезнью желудка обнаруживается Helicobacter pylori. Антибактериальное лечение приводит к рубцеванию язвы в 70-90% случаев. Тяжелое заболевание желудка - аденокарцинома - в 70-90% случаев вызвано инфицированием Helicobacter pylori.В кале инфицированного Helicobacter pylori можно обнаружить антиген бактерии. Через неделю после проявления симптомов активной инфекции количество бактерий в фекалиях сокращается, что снижает диагностическую ценность метода. Отсутствие антигена к хеликобактеру через 4 недели после проведенной терапии говорит об эрадикации Helicobacter pylori.

Данный анализ позволяет определить антиген Helicobacter pylori, возбудителя заболеваний желудка и двенадцатиперсной кишки. Анализ позволяет диагностировать хеликобактерную инфекцию.

Иммуно-ферментный анализ - ИФА

Информация, касающаяся референсных значений показателей, а также сам состав входящих в анализ показателей может несколько отличаться в зависимости от лаборатории!

В норме результат анализа отрицательный, то есть антиген Helicobacter pylori не обнаружен.

• Диагностика Helicobacter pylori
• Оценка эффективности антихеликобактерной терапии

• Инфицирование Helicobacter pylori

• Отсутствие инфицирования Helicobacter pylori.
• При сохранении клинических проявлений заболеваний, ассоциированных с Helicobacter pylori, рекомендуется повторить анализ через 2 недели.

www.analizmarket.ru

Диагностика хронического гастрита типа В (НР)

ГАСТРИТ - воспаление слизистой оболочки желудка, сопровождающееся дистрофическими и некротическими изменениями.

Причины: нарушение качества и режима питания, химические и лекарственные препараты, инфекция, и прежде всего, Helicobacter pylori (HP). В этом случае отмечается лимфоцитарно-плазмоклеточная инфильтрация слизистой оболочки. На начальных стадиях процесс захватывает только антральный отдел желудка, что сохраняет его основные функции. В дальнейшем присоединяются нарушения регенерации и дифференцировки эпителиальных клеток, что приводит к атрофии слизистых и снижению секреторной функции желудка.

(ДИАГНОСТИКУ ХРОНИЧЕСКОГО ГАСТРИТА СМ. ВНИЗУ СТРАНИЦЫ)

количество 4

Диагностика заболевания

название

количество 4

Дополнительные исследования, помогающие уточнить диагноз

название

* - скидка 3% при оформлении заказа на сайте

Основные симптомы: хронический гастрит может протекать бессимптомно, наиболее характерны боли в верхних отделах живота и язвенно-подобный синдром (голодные эпигастральные боли, тошнота, чувство переполнения желудка, тревога, депрессия). Часто хронический гастрит В переходит в язвенную болезнь желудка и 12-перстной кишки. НР, образуя аммиак из мочевины, постоянно защелачивает антральный отдел желудка, что приводит к гиперсекреции гастрина и гиперпродукции соляной кислоты, которая воздействует на слизистую желудка, приводя к образованию эрозий и язвы, В то же время, НР выделяет особые токсические вещества, повреждающие слизистую оболочку желудка. Двойное повреждающее действие вызывает стимуляцию иммунной системы, истощая лимфоцитарное и фагоцитарное звенья иммунитета. Усиленная агрессия в сочетании со снижением защиты слизистых приводит к возникновению хронического гастрита и язвенной болезни, а также к раку и лимфоме желудка. Гастроскопия как диагностический прием с последующим исследованием биоптата для выявления НР может оказаться не достоверной из-за трудностей точного попадания в очаг инфицирования в измененной слизистой оболочки. Поэтому в настоящее время современная диагностика хронического гастрита В осуществляется с обязательным иммунологическим лабораторным исследованием инфекционного агента, т.е. выявления в кале антигена НР, в сыворотке крови - антител к НР, а также нарушений системного и местного иммунитета (иммунограмма и секреторный IgA). Кроме того, играет диагностическую роль и изменение микрофлоры кишечника.

immunotest.ru

Как сделать анализ кала на хеликобактер

Бактерия хеликобактер пилори (Helicobacter pylori) живет в клетках слизистых тканей желудка и двенадцатиперстной кишки. Некоторые разновидности этого «обитателя» ЖКТ при определенных обстоятельствах способны разрушать здоровые клетки человеческого организма и провоцировать заболевания. Эта бактерия – самая частая причина возникновения гастритов, доуденитов и энтероколитов. Правильное лечение подобных недугов зависит от точного выявления «виновника». Для определения наличия и количества хеликобактерии в организме используется несколько методов, одним из которых является анализ кала или, на языке медицинском, копрограмма.

Виды и механизмы исследований

Анализ кала – самый нетравматичный вариант исследования для пациента в отличие от взятия крови или биопсии. Поэтому он столь распространен в диагностике не только хеликобактерной инфекции, но и других заболеваний, застрагивающих ЖКТ. Предпочтительнее проводить прямой анализ кала на хеликобактер, так как он выявляет непосредственно саму бактерию или ее ДНК, а косвенные методики не столь достоверны.

Выделяют три типа прямого исследования каловых масс:

1. Культуральный анализ.
2. Иммунологический анализ.

Каждый из них имеет свои особенности, критерии нормы и недостатки.

ПЦР

Метод полимеразной цепной реакции (ПЦР) относится к молекулярно-генетическим способам диагностики и гарантирует максимальную информативность анализа. Суть такого исследования заключается в выявлении ДНК определенного болезнетворного мирокорганизма, многократном увеличении его численности и последующей идентификации вида.

Чтобы такой анализ был максимально достоверным, необходимо соблюсти несколько условий подготовки:

• не употреблять антибактериальный препараты и другие, схожие по действию медикаменты минимум за 3 суток до сдачи биологического материала;
• также за 3–4 дня до исследования нельзя использовать ректальные свечи, слабительные препараты и другие средства, влияющие на перистальтику ЖКТ;
• за этот же период времени до сдачи анализа не стоит принимать медикаменты и продукты питания, способные изменить окраску кала (препараты железа, свекла и т.д.);
• емкость для биологического материала должны быть стерильной, и доставить ее в лабораторию желательно как можно быстрее.

В среднем, результат ПЦР-исследования будет готов по истечению суток.

Культуральный анализ

Этот вариант относится к микробиологическим методикам исследования и заключается в следующем: взятые биологический материал помещают в специальную среду, которая является благоприятной для роста тех или иных микроорганизмов. По истечению определенного периода времени, который для хеликобактер пилори составляет 7 дней и более, выращенную культуру тщательно изучают под микроскопом. Чтобы определить род микроорганизма с наибольшей вероятностью, ученые используют дополнительные методы: окрашивают культуру специальными красителями, проводят исследования на взаимодействие с другими веществами, изучают способность выявленных бактерий вступать в ту или иную биохимическую реакцию.

Культуральный анализ позволяет не только определить антиген хеликобактер пилори, но и выяснить, к каким антибактериальный препаратам эта бактерия чувствительна. Это обстоятельство становится крайне важным в случае длительного лечения хеликобактерной инфекции и невосприимчивости ее к ранее назначаемым препаратам. Однако к великому сожалению медиков, полученные результаты чувствительности к определенным антибиотикам не всегда совпадают с реальностью, и те медикаменты, которые «сработали» в пробирке, в жизни оказываются бесполезными или недостаточно эффективными.

Иммунологический анализ

Этот вариант исследования основан на способности антител соединяться с антигенами. Для этого на выбранные антитела наносятся специальные метки, которые, слипаясь с антигенами хеликобактерии, формируют целые комплексы. По их количеству и делается вывод о результатах анализа.

Особенность этого исследования – риск получения ложного результата при анализе, биологический материал для которого взят уже после эрадикации. Тест может быть ложноположительным, так как в кале еще могут быть обнаружены бактерии.

Иммунологический анализ в основном назначают до проведения инструментальных методов обследования, если клиническая картина соответствует хеликобактерной инфекции, и имеются характерные симптомы. В случае подозрения на ложноположительный или ложноотрицательный результат проводится дополнительные анализы другими способами.

Роль анализа ПЦР в правильной терапии заболевания, ассоциированного с Helicobacter Pylori

К сожалению, в нашей стране распространенна практика повального использования антибактериальных препаратов. Это приводит к росту числа микроорганизмов, устойчивых даже к самым современным медикаментам, что ставит под угрозу здоровье и жизнь человека при серьезных недугах, требующих интенсивной антибиотикотерапии. Касается это и лечения хеликобактерной инфекции, ведь далеко не все штаммы этой бактерии опасны и не все требуют немедленного «изгнания».

ПЦР-анализ позволяет не только доподлинно выявить бактерию, но и определить ее штамм, что кардинально влияет на тактику лечения и необходимость терапии в целом.

Достоинства этого метода исследования:

• неинвазивность и простота забора биологического материала;
• высокая чувствительность, что сводит риск получения ложного результата к минимуму;
• максимальная информативность;
• безопасность;
• возможность выявления разных видов и штаммов хеликобактерии.

Именно поэтому специалисты все больше и чаще прибегают к методу полимеразной цепной реакции. Однако и недостатки у этого анализа имеются, и одним из самых главных является довольно высокая стоимость, особенно при необходимости генотипирования.

Анализ кала на антиген хеликобактер пилори может проводится разными способами и дополняться другими методами исследования, как лабораторными, так и инструментальными. Выбор конкретного варианта – прерогатива врача, который также расскажет, как правильно сдать биологический материал, оценит результаты исследования и в соответствии с ними подберет адекватную терапию.

Бактерия Helicobacter pylori (хеликобактер пилори) обитает в клетках слизистой оболочки желудка и двенадцатипёрстной кишки человека. Некоторые штаммы (генетические типы) микроорганизма выделяют специфические токсины, разрушающие клетки и повышающие риск возникновения таких патологий, как хронические гастриты и дуодениты, язвенная болезнь желудка и двенадцатипёрстной кишки, некоторые виды злокачественных опухолейа. Такие штаммы необходимо своевременно выявлять и лечить. Одним из способов определения инфицирования Helicobacter pylori является анализ кала.

Механизм определения хеликобактера с помощью анализа кала

ПЦР (полимеразная цепная реакция), культуральный и иммунологические анализы кала относятся к прямым методам исследования. В отличие от косвенных методов, когда о наличии патологического агента судят по присутствию продуктов его жизнедеятельности или реакции иммунной системы организма (выработка антител), прямые методы обнаруживают непосредственно сам микроорганизм или его ДНК.
Все виды анализа кала на хеликобактериоз являются неинвазивными (нетравматичными) видами исследования в отличие от забора крови или гастродуоденоскопии.

Молекулярная диагностика

Для проведения ПЦР используют специальный прибор - амплификатор

ПЦР-метод является одним из видов молекулярно-генетической диагностики и позволяет определить наличие Helicobacter pylori даже в случае присутствия в материале небольшого фрагмента ДНК бактерии.

Суть метода состоит в многократном умножении анализируемого образца возбудителя заболевания. Для проведения реакции необходим своего рода «каркас», состоящий из двух праймеров – полученных с помощью искусственного синтеза фрагментов ДНК, идентичных нуклеиновой кислоте Helicobacter pylori. Во время реакции между праймерами наращивается цепочка ДНК в случае присутствия в кале фрагмента биоматериала микроорганизма. В случае его отсутствия реакции не происходит.

Реакция проводится при определённых значениях температуры и кислотности среды, состоит из нескольких десятков повторяющихся циклов, для катализа (ускорения реакции) применяется специальный фермент – полимераза. За 30 циклов фрагмент ДНК патологического агента, присутствующий в биоматериале, умножается в миллиард раз, что позволяет с точностью диагностировать инфекцию.

При наличии соответствующих праймеров можно выявить инфицирование цитотоксичными (повреждающими клетки слизистой желудка) видами Helicobacter pylori.

Культуральный анализ

Культуральный анализ (бактериологический посев) является микробиологическим методом исследования.

Биологический материал помещается в специфическую среду, благоприятную для роста бактериальной колонии. По истечении определённого срока (для Helicobacter pylori – более недели) культуру изучают под микроскопом, используя для верной идентификации колонии различные методы – окраску, способность вступать в те или иные биохимические реакции.

Кроме выявления патологического антигена (возбудителя заболевания) метод позволяет провести тест на его чувствительность к антибактериальным препаратам, что сокращает сроки и затраты на лечение, повышает эффективность терапии.

К сожалению, в некоторых случаях результаты теста на чувствительность in vitro («в пробирке») могут не совпадать с результатами лечения in vivo (живого организма): в жизни антибиотики, подобранные лабораторным методом, могут быть не столь эффективны.

Иммунологические методы анализа

Иммунологические методы основаны на свойстве антител слипаться с антигеном. Для исследования антитела со специальными метками соединяются с анализируемым образцом, в результате, при наличии в материале Helicobacter pylori, образуются комплексы антиген-антитело.

Показания к проведению обследования

Все виды диагностики инфицирования Helicobacter pylori имеют свои преимущества и недостатки. Целесообразность применения того или иного метода зависит от разных факторов и этапов лечения. Оптимальный способ исследования выбирает врач-гастроэнтэролог .

Показания к ПЦР-анализу кала:

• язвы, и двенадцатипёрстной кишки;
• атрофия слизистой оболочки желудка;
• полипы, опухоли желудка;
• гастроэзофагеальный рефлюкс (заброс содержимого желудка в пищевод), язва пищевода;
• генетическая предрасположенность: злокачественные опухоли желудка у ближайших родственников (родителей, родных братьев и сестёр);

Исследование ПЦР-методом оптимально назначать для оценки целесообразности проведения специфического лечения антибактериальными препаратами при имеющихся органических повреждениях.

Показание к культуральному анализу – определение чувствительности к лекарственным препаратам при неэффективности эмпирического лечения. Поскольку анализ является сложным (посев требует специальной среды и отсутствия доступа кислорода) и долгосрочным, это исследование не назначается для диагностики инфекции.

Бактериологический посев способен выделять только спиралевидные формы Helicobacter pylori, но не кокковые, получившие в последнее время широкую распространённость. Этот факт дополнительно снижает ценность исследования.

Показания к иммунологическим методам:

• симптомы функциональных и органических патологий желудка и кишечника:
  • , отрыжка;
  • боли, имеющие периодичность в течение суток с обострениями весной и осенью;
  • поносы или запоры;
  • ощущение дискомфорта, переполнения желудка;
• перед назначением длительной терапии нестероидными противовоспалительными препаратами или ингибиторами протонной помпы (средствами для снижения выработки соляной кислоты);
• железодефицитная анемия или тромбоцитопения невыясненной этиологии;
• генетическая предрасположенность;
• инфицирование ближайшего окружения;
• контроль эффективности антибиотикотерапии.

Иммунологические методы и ПЦР без генотипирования назначаются с целью скрининга – ввиду простоты и относительно низкой стоимости исследование проводится широким массам населения для выявления группы риска развития органических и опухолевых поражений желудка и кишечника.

К сожалению, в России скрининг на Helicobacter pylori не получил широкого распространения.

Иммунологический анализ проводится до инструментальных методов исследования при соответствующей симптоматике и позволяет предположить инфицированность Helicobacter pylori. По результатам анализа в случае необходимости назначаются другие методы исследования.

Преимущества и недостатки ПЦР-анализа кала

Специфическая терапия хеликобактериоза антибактериальными препаратами – процесс длительный, сопровождающийся плохой переносимостью у многих больных и высоким риском развития осложнений.

Назначение антибиотиков всем лицам, инфицированным Helicobacter pylori, - порочная практика. Специфическая антибиотикотерапия показана лишь пациентам с тенденцией к прогрессированию органических поражений – эрозий, язв, атрофического процесса, - как правило, заражённым определёнными штаммами хеликобактера. Этим больным требуется антибиотикотерапия с целью достижения ремиссии при язвенной болезни и предупреждения риска развития злокачественных новообразований.

Выявить цитотоксичные типы Helicobacter pylori можно только посредством ПЦР-метода.

Преимущества ПЦР-анализа кала:

• высокая чувствительность метода;
• высокая специфичность теста;
• простота и неинвазивность забора материала;
• безопасность;
• возможность выделения как спиралевидных, так и кокковых форм Helicobacter pylori;
• возможность выделения различных штаммов бактерии.

Чувствительность теста – способность к выдаче истинно положительных результатов. Чем выше чувствительность, тем ниже доля ложноположительных результатов, когда антиген якобы выявляется у неинфицированных лиц.

Специфичность теста – показатель, зависящий от количества ложноотрицательных (когда у инфицированного больного антиген не выделяется) результатов исследования. ПЦР-метод исследования кала на Helicobacter pylori характеризуется чувствительностью 64–94% и стопроцентной специфичностью.

Собрать кал легко и просто. В отличие от забора крови или гастродуоденоскопии взятие материала не требует применения местных анестетиков, на которые может развиться аллергическая реакция, не причиняет боли и дискомфорта, безопасно в плане заражения «грязным» инструментом. Исследование не требует приложения определённых усилий, как, например, дыхательный метод, что делает его доступным даже для маленьких детей.

Недостатки ПЦР-анализа кала:

• отсутствие возможности определения чувствительности к антибактериальным препаратам;
• отсутствие возможности различать текущую инфекцию и успешно излеченную, когда фрагменты ДНК бактерии могут оставаться в фекалиях около месяца;
• более низкий показатель чувствительности по сравнению с исследованием биоптата (образца ткани или клеточной массы) слизистой желудка;
• относительно высокая стоимость анализа с генотипированием;
• строгие требования к персоналу: квалификация, неукоснительное соблюдение правил, аккуратность.

Один из основных недостатков ПЦР-метода является продолжением его основного достоинства: высокая чувствительность теста является причиной ложноположительных результатов в случае контаминации («загрязнения» извне) анализируемого материала.

Подготовка к сдаче анализа

Достоверность результата любого анализа зависит от чёткого выполнения определённых условий на всех этапах, и забор материала – не исключение.

Правила взятия материала:

• за трое суток до анализа отменяются антибиотики, слабительные, замедляющие перистальтику препараты, ректальные свечи и некоторые другие лекарства по наставлению врача, поэтому следует предупредить доктора о применении тех или иных лекарственных препаратов;
• сбор кала осуществляется в выданную лабораторией посуду, рекомендуется отбирать пробы из трёх разных точек;
• биоматериал желательно доставить в лабораторию немедленно; в случае отсутствия такой возможности пробу следует хранить при температуре 2–8 градусов не дольше 24 часов;
• если анализ выполняется для оценки эффективности назначенной ранее антибиотикотерапии против Helicobacter pylori, кал собирается не ранее, чем через четыре недели после окончания лечения.

Замедление пассажа каловых масс, запоры могут приводить к разрушению хеликобактера в фекалиях, что является причиной ложноотрицательных результатов. Для повышения достоверности результата врач может назначить перед анализом лёгкое слабительное – лактулозу.

Как и где сдать анализ

Анализы назначает гастроэнтеролог, поэтому перед исследованием на Helicobacter pylori необходима его консультация.

Примерная стоимость исследования кала:

• ПЦР-метод с генотипированием – 1200 рублей;
• ПЦР без генотипирования – 600 рублей;
• чувствительность к антибиотикам – 600 рублей;
• иммунологические методы – 400–650 рублей (в зависимости от метода).

Для наиболее точной диагностики Helicobacter pylori необходимо выбирать медицинское учреждение, заслужившее хорошую репутацию.

Результаты исследования

Период обработки анализов, их достоверность зависят от метода определения антигена.

Сроки выполнения, достоверность и интерпретация результатов анализов кала на хеликобактериоз.

	Сроки	Достоверность	Результаты
ПЦР	от 5–6 часов (экспресс-метод) до 2 дней	высокая	1) отрицательный – не выделено ни одного заявленного генотипа бактерии; 2) положительный – хелибактериоз (текущий или в анамнезе), выделено не менее одного из заявленных генотипов
Бактериологический анализ на чувствительность к антибиотикам	7–10 дней	высокая – на чувствительность; низкая – на выявление антигена	1) количество бактерий 0 – хеликобактер не выделен; 2) количество >0 - хелибактериоз; 3) S – чувствительность к указанному антибиотику; 4) R – резистентность (устойчивость) к антибиотику; 5) I – умеренная чувствительность к антибиотику.
Иммунологические методы	1 день	низкая	1) отрицательный - возбудитель не выявлен; 2) положительный - хеликобактериоз

Низкая достоверность иммунологического и культурального анализа объясняется малымсодержанием антигена в фекалиях: если ПЦР-анализ чувствителен и при наличии 10 клеток, то для достоверного результата других методов клеток должно быть хотя бы в 10 раз больше.

Исследование кала на хелибактериоз безопасно, нетравматично и может осуществляться разными методами, позволяющими обнаружить инфекцию, определить штаммы вируса и чувствительность патогена к антибиотикам.

По результатам анализов можно сформировать группу риска, у представителей которой высока вероятность развития язвы желудка и двенадцатипёрстной кишки, злокачественных опухолей желудка; оценить степень риска и минимизировать его своевременным антибактериальным лечением цитотоксичных штаммов хеликобактериоза.

• Диагностика Helicobacter pylori (Нр)

Диагностика Helicobacter pylori (Нр)

Инфекция Helicobacter pylori (Нр) в настоящее время считается важнейшим фактором патогенеза язвенной болезни, поэтому рекомендуется больных язвенной болезнью обследовать на наличие Нр.

Для диагностики Нр-инфекции используют методы, непосредственно выявляющие бактерию (бактериологический, морфологический) или обнаруживающие продукты ее жизнедеятельности в организме больного (уреазный, дыхательный):

1. бактериологический метод - посев биоптата слизистой оболочки желудка на дифференциально-диагностическую среду;

2. морфологический метод:

• гистологический - окраска бактерии в гистологических препаратах слизистой оболочки желудка по Гимзе, толуидиновым синим, по Вартину-Старри, Генте;
• цитологический - окраска бактерии в мазках-отпечатках биоптатов слизистой оболочки желудка по Гимзе, Граму;

3. уреазный - определение уреазной активности в биоптате слизистой оболочки желудка путем помещения его в жидкую или гелеобразную среду, содержащую субстрат, буфер и индикатор;

4. дыхательный - определение в выдыхаемом больным воздухе изотопов 14С или 13С; они выделяются в результате расщепления в желудке больного меченой мочевины под действием уреазы бактерии Нр;

5. иммуноферментный метод определения антител класса М и G к Нр;

6. определение Нр с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР) в кале.

Бактериологический метод в связи с трудностями выращивания микроорганизма используют в основном в научно-исследовательских целях. Метод ПЦР только начал применяться в клинической практике.

Гистологический метод является "золотым" стандартом диагностики Нр. Метод позволяет не только выявить наличие Нр, но и определять степень обсемененности по следующим критериям:

• бактерии в препарате отсутствуют;
• слабая обсемененность (до 20 микробных тел в поле зрения);
• умеренная обсемененность (от 20 до 50 микробных тел в поле зрения);
• выраженная обсемененность (свыше 50 микробных тел в поле зрения).

Бактериоскопия мазка-отпечатка значительно сокращает время исследования (до 15-20 мин вместо 5-7 дней при гистологическом исследовании). К недостатку метода можно отнести невозможность определять степень обсеменения.

Наиболее перспективным для определения жизнедеятельности Нр считается дыхательный тест, поскольку он неинвазивный и позволяет выявлять активно функционирующие бактерии, что особенно важно для оценки эффективности проведенной санации. Однако метод требует специального оборудования, что в настоящее время ограничивает его широкое применение. Поэтому для определения жизнедеятельности Нр чаще используют уреазный тест.

Метод иммуноферментного анализа (ИФА), основанный на обнаружении специфических антигеликобактерных антител классов М и G в сыворотке крови, является неинвазивным высокочувствительным методом диагностики Нр-инфекции. Однако этот метод не позволяет установить, имеется ли в настоящее время активная инфекция или был только контакт с микроорганизмом в прошлом. В связи с этим метод ИФА может быть использован только для проведения скрининга с целью эпидемиологических исследований распространенности Нр-инфекции и выявления групп риска развития гастродуоденальной патологии, ассоциированной с Нр, особенно бессимптомно протекающей.

Таким образом, обычно для выявления Нр пользуются гистологическим или цитологическим методом, а жизнедеятельность микроорганизма определяют с помощью уреазного теста. Для практических целей наиболее удобны метод бактериоскопии для быстрой диагностики Нр-инфекции и уреазный тест для оценки проведенной эрадикации.

А.Kaлинин и пр.

"Диагностика Helicobacter pylori (Нр)" и другие статьи из раздела

Описание

Метод определения Иммуноанализ

Исследуемый материал Сыворотка крови

Доступен выезд на дом

Маркёр, подтверждающий инфицированность Хеликобактер пилори. Эти антитела начинают вырабатываться через 3 - 4 недели после инфицирования. Высокие титры антител к H.pylori сохраняются до и некоторое время после ликвидации микроорганизма. Особенности инфекции. Инфекция Helicobacter pylori. H. pylori на сегодняшний день - одна из широко распространённых инфекций на земле. К H.pylori-ассоциированным болезням относятся хронический гастрит, язвенная болезнь желудка и двенадцатиперстной кишки. Поражение слизистой оболочки желудка обусловлено прямым повреждением её микроорганизмом, а также вторичным повреждением слизистой оболочки желудка, двенадцатиперстной кишки и кардиальной части пищевода под действием факторов агрессии H.pylori. Хеликобактер представляет собой грамотрицательную бактерию спиралевидной формы со жгутиками. Бактериальная клетка окружена слоем геля - гликокаликса, который защищает её от воздействия соляной кислоты желудочного сока. Хеликобактер чувствителен к действию высоких температур, но длительно сохраняется во влажной среде.

Заражение происходит пищевым, фекально-оральным, бытовым путями. H.pylori обладает способностью к колонизации и персистированию в слизистой оболочке желудка. К патогенным факторам относятся ферменты (уреаза, фосфолипаза, протеаза и гамма-ГТ), жгутики, цитотоксин А (VacA), гемолизин (RibA), белки теплового шока и липополисахарид. Бактериальная фосфолипаза повреждает мембрану эпителиоцитов, микроорганизм прикрепляется к поверхности эпителия и проникает в клетки. Под действием уреазы и других факторов патогенности повреждается слизистая оболочка, усиливаются воспалительные реакции и образование цитокинов, радикалов кислорода, окиси азота. Липополисахаридный антиген обладает структурным сходством с антигенами групп крови (по системе Lewis) и клетками желудочного эпителия человека, в результате возможна продукция аутоантител к эпителию слизистой оболочки желудка и развитие атрофического аутоиммунного гастрита. Поверхностное расположение уреазы позволяет ускользать от действия антител: комплекс уреаза-антитело сразу же отделяется с поверхности. Усиление перекисного окисления липидов и повышение концентрации свободных радикалов увеличивает вероятность канцерогенеза. Обсеменение слизистой оболочки желудка H.pylori сопровождается развитием поверхностного антрального гастрита и дуоденита, ведёт к повышению уровня гастрина и снижению выработки соматостатина с последующим усилением секреции соляной кислоты. Избыточное количество соляной кислоты, попадая в просвет двенадцатиперстной кишки, ведёт к прогрессированию дуоденита и развитию желудочной метаплазии, что создает условия для заселения H.pylori.

В дальнейшем, особенно при наличии дополнительных факторов риска (наследственная предрасположенность, I группа крови, курение, приём ульцерогенных лекарственных препаратов, частые стрессы, алиментарные погрешности), в участках мета-плазированной слизистой оболочки формируется язвенный дефект.

В 1995 г. Международной ассоциацией по изучению рака (IARC) H.pylori признан абсолютным канцерогеном и определён как важнейшая причина злокачественных новообразований желудка у человека (MALToma - Mucosa Associated Lymphoid Tissue lymphoma, аденокарцинома). При проведении эпидемиологических исследований выявлена более частая инфицированность H.pylori у пациентов с неязвенной диспепсией и гастроэзофагеальной рефлюксной болезнью (ГЭРБ), чем без них.

Факторами, ответственными за развитие неязвенной диспепсии или ГЭРБ у H.pylori-инфицированных пациентов, считают нарушение желудочной моторики, секреции, повышение висцеральной чувствительности и проницаемости клеточного барьера слизистой оболочки, а также высвобождение цитокинов в результате её воспалительных изменений. Ликвидация H. pylori у пациентов с язвенной болезнью позволяет прекратить приём антисекреторных препаратов.

Особое значение лабораторная диагностика H. pylori имеет в следующих ситуациях:

Показания к назначению

Язвенная болезнь желудка и/или 12-перстной кишки.

Неязвенная диспепсия.

Гастро-эзофагеальная рефлюксная болезнь.

Атрофический гастрит.

Рак желудка у ближайших родственников.

Впервые выявленная хеликобактер-инфекция у совместно проживающих лиц или родственников.

Профилактические обследования, для выявления людей с риском развития язвы или рака желудка.

Оценка эффективности эрадикационной терапии.

Невозможность проведения инвазивных методов диагностики (эндоскопия).

Интерпретация результатов

Интерпретация результатов исследований содержит информацию для лечащего врача и не является диагнозом. Информацию из этого раздела нельзя использовать для самодиагностики и самолечения. Точный диагноз ставит врач, используя как результаты данного обследования, так и нужную информацию из других источников: анамнеза, результатов других обследований и т.д.

Единицы измерения в лаборатории ИНВИТРО: Ед/мл (тест полуколичественный, результаты выше 8 Ед/мл будут выданы в виде > 8 Ед/мл).

Референсные значения:

При положительном и отрицательном результате:

• < 0.9 - отрицательно;
• 0.9 - 1.1 – сомнительно;
• > 1.1 - положительно;

При сомнительном результате:

• < 0.9 – отрицательно;
• 0.9 - 1.1 – сомнительно (Возможно, целесообразно провести повторное исследование через 10-14 дней);
• > 1.1 - положительно.

Положительно:

1. IgG - инфекция H. pylori (высокий риск развития язвенной болезни или язвенная болезнь; высокий риск развития рака желудка);
2. инфекция H. pylori излечена: период постепенного исчезновения антител.

Отрицательно:

1. IgG - не обнаружена инфекция H. pylori (низкий риск развития язвенной болезни, но язвенная болезнь не исключена);
2. Первые 3 - 4 недели после инфицирования.

Референсные значения: отрицательно.