Samoilikov Pavel Vladimirovich متدرب في قسم التشخيص المخبري السريري

جامعة الطب الحكومية الروسية

أصبحت طرق المقايسة المناعية مستخدمة على نطاق واسع في الممارسة الطبية. في جميع مجالات الطب الحديث ، يتم استخدام المقايسة المناعية ، بشكل أساسي للأغراض التشخيصية والتحليلية. من المهم بشكل خاص أن تجعل من الممكن التعرف على المكونات البيولوجية (الهرمونات ، الإنزيمات ، الببتيدات العصبية ، منتجات الجهاز المناعي ، المستضدات ، إلخ) بتركيزات منخفضة ومنخفضة جدًا. يتم الكشف عن جميع المنتجات التي يمكن الحصول على الأجسام المضادة من خلالها بواسطة هذه الطرق.

يعتمد التحليل المناعي على تفاعل المستضد (AG) والجسم المضاد (AT) باستخدام خيارات وضع العلامات المختلفة لأحد المكونات (الإنزيم ، والنويدات المشعة ، والصبغة الفلورية ، وغيرها). يتم إجراء تقييم التفاعل تلقائيًا على معدات خاصة ، مما يجعل من الممكن توحيد هذه الطرق.

اعتمادًا على نوع الملصق المستخدم وشروط إجراء الاختبار ، يُشار إلى المقايسة المناعية باسم المقايسة المناعية الإنزيمية (ELISA) والمقايسة المناعية الإشعاعية (RIA) والمناعة المناعية وغيرها. عندما يتم تنظيم التفاعلات في مرحلة واحدة أو أكثر ، يتم تصنيفها على أنها مباشرة أو غير مباشرة. الوسط الذي يتم فيه تنفيذ التفاعل مهم. إذا تم إجراء التفاعل باستخدام كواشف مثبتة على السطح ، فسيتم تعيين الاختبار كاختبار المرحلة الصلبة ، على سبيل المثال ، ELISA (مقايسة الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم).

في هذه الورقة ، سيتم النظر فقط في المقايسة المناعية للإنزيم - وهي طريقة مستخدمة على نطاق واسع في علم الأحياء والطب ، عمليًا وأساسيًا.

ظهرت ELISA في منتصف الستينيات وتم تطويرها في الأصل كطريقة لتحديد مستضد في المستحضر النسيجي ، وكذلك لتصور خطوط الترسيب في اختبار الانتشار المناعي والرحلان المناعي ، ثم بدأ استخدامها في التحديد الكمي للمستضدات و الأجسام المضادة في السوائل البيولوجية. شارك E. Engvall و R. Pelman في تطوير الطريقة ، وكذلك ، بشكل مستقل عنهما ، W. Van Veeman و R. Schurs.

الشكل 1. المبدأ الأساسي لـ ELISA.

1) للكشف عن المستضدات. 2) لاكتشاف الأجسام المضادة.

تعتمد الطريقة على الارتباط المحدد لجسم مضاد بمولد ضد ، في حين أن أحد المكونات مترافق مع إنزيم ؛ ونتيجة للتفاعل مع الركيزة الصبغية المقابلة ، يتم تكوين منتج ملون ، يمكن أن تكون كميته تحديد الطيف الضوئي (الشكل 1).

إن اكتشاف إمكانية تجميد المستضد والجسم المضاد على ناقلات مختلفة مع الحفاظ على نشاط الارتباط الخاص بهم قد جعل من الممكن توسيع استخدام ELISA في مختلف مجالات علم الأحياء والطب.

كان ظهور الأجسام المضادة وحيدة النسيلة بمثابة تطور إضافي لـ ELISA ، مما جعل من الممكن زيادة حساسيتها وخصوصياتها وإمكانية تكرار نتائجها.

نظريًا ، تعتمد ELISA على بيانات الكيمياء المناعية الحديثة والأنزيم الكيميائي ، ومعرفة القوانين الفيزيائية والكيميائية لتفاعل المستضد والأجسام المضادة ، وكذلك على المبادئ الرئيسية للكيمياء التحليلية. يتم تحديد حساسية ELISA ومدتها من خلال عدة عوامل رئيسية: الخصائص الحركية والديناميكية الحرارية لتفاعل الجسم المضاد للمستضد ، ونسبة الكواشف ، ونشاط الإنزيم ، ودقة طرق الكشف. بشكل عام ، يمكن وصف تفاعل الجسم المضاد مع المستضد من خلال مخطط بسيط:

+ [AG] ↔ [ATAG]

تحدد مجموعة متنوعة من كائنات الدراسة بدءًا من المركبات ذات الوزن الجزيئي المنخفض إلى الفيروسات والبكتيريا ، بالإضافة إلى مجموعة واسعة بشكل غير عادي من المهام المرتبطة بمجموعة متنوعة من الشروط لاستخدام ELISA ، تطوير عدد كبير جدًا من المتغيرات لهذه الطريقة .

يحتوي أي متغير من ELISA على 3 مراحل إلزامية:

1. مرحلة التعرف على مركب الاختبار بواسطة جسم مضاد خاص به ، مما يؤدي إلى تكوين مركب مناعي ؛

2. مرحلة تكوين ارتباط الاتحاد بالمركب المناعي أو مواقع الارتباط الحرة ؛

3. مرحلة تحويل ملصق الإنزيم إلى إشارة مسجلة.

يعتمد تصنيف طرق ELISA على عدة طرق:

1. وفقًا لنوع الكواشف الموجودة في المرحلة الأولى من ELISA ، تتميز الطرق التنافسية وغير التنافسية.

أ) في ELISA التنافسي ، في المرحلة الأولى ، يحتوي النظام على كل من المركب الذي تم تحليله وتماثله ، المسمى بالإنزيم ويتنافس على مواقع ربط محددة معه.

ب) بالنسبة للطرق غير التنافسية ، يعد التواجد في النظام في المرحلة الأولى فقط للمركب الذي تم تحليله ومراكز الربط الخاصة به سمة مميزة.

2. تنقسم جميع طرق ELISA إلى متجانسة وغير متجانسة.

إذا تم تنفيذ جميع المراحل الثلاث من ELISA في محلول وبين المراحل الرئيسية لا توجد مراحل إضافية لفصل المجمعات المناعية المشكلة عن المكونات غير المتفاعلة ، فإن الطريقة تنتمي إلى مجموعة متجانسة.

أساس ELISA المتجانس ، والذي يستخدم عادة لتحديد المواد ذات الوزن الجزيئي المنخفض ، هو تثبيط نشاط الإنزيم عندما يتم دمجه مع مستضد أو جسم مضاد. يتم استعادة نشاط الإنزيم نتيجة تفاعل الجسم المضاد للمستضد.

عندما يرتبط الجسم المضاد بمستضد يحتوي على ملصق إنزيم ، يتم تثبيط نشاط الإنزيم بنسبة 95٪ فيما يتعلق بوزن جزيئي عالي الركيزة ، والذي يرجع إلى الاستبعاد الفراغي للركيزة من المركز النشط للإنزيم. مع زيادة تركيز المستضد ، يرتبط المزيد من الأجسام المضادة ويتم الاحتفاظ بمزيد من اتحادات إنزيم المستضد الحرة التي يمكن أن تحلل الركيزة عالية الوزن الجزيئي. يتم إجراء التحليل بسرعة كبيرة ، مطلوب دقيقة واحدة لتحديد واحد. حساسية الطريقة عالية جدًا. مع ذلك ، يمكنك تحديد المادة على مستوى البيكومولات.

بالنسبة للطرق غير المتجانسة ، من المعتاد إجراء التحليل في نظام من مرحلتين بمشاركة مرحلة صلبة - حاملة ، ومرحلة إلزامية لفصل المجمعات المناعية عن المكونات غير المتفاعلة (الغسيل) الموجودة في مراحل مختلفة (تشكلت تكون المجمعات المناعية في الطور الصلب ، والمجمعات غير المتفاعلة في محلول). تسمى الطرق غير المتجانسة ، التي يتم فيها تكوين المجمعات المناعية في المرحلة الأولى على المرحلة الصلبة ، بطرق المرحلة الصلبة.

يتم تصنيف الطرق على أنها متجانسة وغير متجانسة ، إذا كانت المرحلة الأولى - يحدث تكوين معقدات محددة في محلول ، ثم يتم استخدام مرحلة صلبة مع كاشف غير متحرك لفصل المكونات.

3- وفقاً لمبدأ تحديد مادة الاختبار:

أ) التحديد المباشر لتركيز مادة (مستضد أو جسم مضاد) من خلال عدد مراكز الارتباط التي تتفاعل معها. في هذه الحالة ، سيكون ملصق الإنزيم في مجمع AG-AT المحدد الناتج. سيكون تركيز المادة التحليلية متناسبًا طرديًا مع الإشارة المسجلة.

ب) تحديد تركيز مادة عن طريق الاختلاف بين العدد الإجمالي لمواقع الربط ومواقع الربط الحرة المتبقية. في هذه الحالة ، سيزداد تركيز المادة التحليلية ، وستنخفض الإشارة المسجلة ، وبالتالي ، في هذه الحالة ، هناك اعتماد عكسي على حجم الإشارة المسجلة.

الانزيمات.

ملصقات الإنزيم لها تأثير تحفيزي قوي للغاية ؛ يمكن لجزيء إنزيم واحد أن يتفاعل مع عدد كبير من جزيئات الركيزة. وبالتالي ، يمكن اكتشاف إنزيم موجود بكميات ضئيلة وتحديد كميته من خلال تكوين المنتجات ، وهو التفاعل الذي يحفزه. ميزة أخرى لاستخدام الإنزيمات كعلامات ترجع إلى وجود العديد من المجموعات الوظيفية في الجزيء (سلفهيدريل ، كربوكسيل ، بقايا تيرازين ، إلخ) ، والتي يمكن من خلالها ربط جزيئات اللجند تساهميًا.

يجب أن تحتوي العلامات الأنزيمية المستخدمة في ELISA على الخصائص التالية:

- نشاط عالي واستقرار للإنزيم في ظل ظروف التحليل وأثناء التعديل وبالاقتران مع الأجسام المضادة أو البروتينات الأخرى ؛

- وجود ركائز حساسة وبساطة طريقة تحديد المنتجات أو ركائز التفاعل الأنزيمي ؛

- إمكانية تكييف أنظمة الركيزة لمزيد من التعزيز ؛

- عدم وجود الانزيم ومثبطاته في السائل البيولوجي المدروس.

يمكن لـ ELISA استخدام 15 إنزيمًا مختلفًا على الأقل. أكبر تطبيق ، وفقًا للمتطلبات المذكورة أعلاه ، وجد بيروكسيداز الفجل (HRP) ، والفوسفاتاز القلوي (AP) و β-D-galactosidase (الجدول 1). الثلاثة جميعها مستقرة وتحفز ردود الفعل الحساسة للغاية. بالإضافة إلى ذلك ، يمكن اكتشاف المنتجات الناتجة عن التفاعلات المحفزة بواسطة هذه الإنزيمات ، اعتمادًا على الركيزة المستخدمة ، ليس فقط عن طريق طرق القياس اللوني ، ولكن أيضًا بطرق الفلورسنت. يتم استخدام إنزيمات أخرى بشكل أقل تكرارًا. ويرجع ذلك إلى انخفاض نشاطهم النوعي مقارنةً بـ HRP و AP.

ركائز.

يتم تحديد اختيار الركيزة بشكل أساسي بواسطة الإنزيم المستخدم كعلامة ، نظرًا لأن تفاعل الركيزة الإنزيمية محدد للغاية.

المتطلبات الأساسية للركيزة:

- ضمان حساسية عالية للطريقة في الكشف عن الإنزيم في الاتحاد ؛

- تكوين منتجات محددة جيدًا (على سبيل المثال ، ملونة) لتفاعل الركيزة الإنزيمية ؛

- يجب أن تكون الطبقة السفلية آمنة ورخيصة وسهلة الاستخدام وسهلة الاستخدام.

الجدول 1.

الإنزيمات وركائزها هي الأكثر استخدامًا في ELISA.

في كثير من الأحيان ، يتم استخدام ركائز الكروموجينيك ، والتي ، عند تدميرها ، تشكل مادة ملونة. الواعد هو استخدام ركائز عالية الطاقة - فلورية ، وميض كيميائي. إن استخدام مثل هذه الركائز يجعل من الممكن نظريًا زيادة حساسية ELISA بمرتبتين من حيث الحجم.

المستضدات والأجسام المضادة.

يجب أن يكون AG و AT المستخدمان في ELISA نقيًا للغاية ونشطًا للغاية. بالإضافة إلى ذلك ، يجب أن يحتوي AG على نسبة عالية من المستضدات وكثافة مثالية وعدد محددات المستضدات والغرابة والتجانس. أثبتت العديد من مستضدات الفيروسات والبكتيريا الاصطناعية والمترابطة أنها جيدة عند استخدامها في ELISA. أدى هذا إلى زيادة خصوصية الطريقة واستنساخها بشكل كبير عن طريق تقليل التفاعلات المتصالبة.

تعتبر الأجسام المضادة من أهم الكواشف في ELISA. تعتمد حساسية ELISA على تركيز ونشاط ونوعية الأجسام المضادة المستخدمة. يمكن أن تكون الأجسام المضادة المستخدمة متعددة الأضداد أو أحادية الخلية ، من فئة مختلفة (IgG أو IgM) وفئة فرعية (IgGl ، IgG2) ، ومضادة للنمط الخيفي أو مضاد للشيء. عند التقارب المنخفض لـ AT ، يؤدي انهيار مجمع AG-AT إلى إزالة AG المرتبط من النظام. يتم تحسين حساسية وخصوصية الطريقة عن طريق استخدام الأجسام المضادة وحيدة النسيلة. في هذه الحالة ، يصبح من الممكن الكشف عن تركيزات منخفضة من AG (AT) في عينات الاختبار.

تشكيل متقارن

الاتحاد هو مستضد أو جسم مضاد مُسمى بعلامة إنزيم. يعد تكوين الاتحاد من الخطوات المهمة في ELISA.

عند تكوين الاتحاد ، يتم اختيار هذه الطريقة المثلى لإدخال ملصق إنزيم بحيث يحتفظ كلا المكونين من الاتحاد بنشاطهما البيولوجي: الإنزيم - القدرة على التفاعل مع الركيزة ، والمستضد أو الجسم المضاد - مولد الضد وربط مولد الضد النشاط ، على التوالي. يسمح وجود مستضد مُصنَّف عالي النقاء باستخدام طرق تنافسية. في هذه الحالة ، يمكن قياس نشاط الاتحاد غير المرتبط بالأجسام المضادة الثابتة في المرحلة النهائية ، مما يتجنب إجراء الغسيل ويجعل التحليل أكثر ملاءمة. ومع ذلك ، تتنوع المستضدات في خواصها الفيزيائية والكيميائية وبنيتها ، مما يعني أنه من المستحيل تطوير طرق عالمية للحصول على اقتران مع مستضد. في هذه الحالة ، يعد الحصول على اتحاد إنزيم مستضد تحديًا منفصلاً. يعد تحضير الأجسام المضادة المسمى ELISA أكثر سهولة من الناحية المنهجية.

يتم إجراء اقتران الإنزيم بالبروتينات النشطة كيميائيًا من خلال طرق مختلفة: الارتباط المتقاطع الكيميائي ، والربط التساهمي لجزيء الإنزيم بـ AG أو AT ، وتشكيل المركبات من خلال الروابط غير التساهمية ، على سبيل المثال ، عند الاتصال بين يتم إجراء الإنزيم و AG أو AT بشكل مناعي ، من خلال تفاعل المستضد مع الجسم المضاد.

الطرق التساهمية الأكثر استخدامًا لتحضير الاتحادات. يتم تحديد اختيار تفاعل الارتباط حسب نوع المجموعات الوظيفية المتوفرة في جزيئات البروتين هذه. يتم استخدام Glutaraldehyde ، و periodate sodium ، وما إلى ذلك ككواشف تستخدم لإدخال الإنزيم في جزيئات المستضد والجسم المضاد.

هناك طرق من خطوة واحدة وخطوتين للحصول على اقتران باستخدام الجلوتارالدهيد. يمكن تكوين متقارنات بأحجام مختلفة مع نشاط إنزيمي منخفض (15-60٪ من الإنزيم الحر). يمكن أن يؤدي الحجم الكبير الناتج إلى إعاقة تحديد مادة الاختبار. تتكون الاتحادات ذات الوزن الجزيئي المنخفض نسبيًا من جزء Fab وجزيء إنزيم واحد.

كنتيجة لتوليف من مرحلتين ، والذي يتكون من التحضير المرحلي للإنزيم الذي تم تعديله أولاً باستخدام عامل ربط متقاطع ، وعزله ، ثم تفاعله اللاحق مع مستضد (جسم مضاد) ، جزيئات من تتكون تركيبة متجانسة تحتوي على 1-2 جزيء إنزيم لكل جزيء غلوبولين مناعي ويحافظ على نشاط إنزيمي ومناعي عالي. ومع ذلك ، فإن كمية هذه الاتحادات المتكونة صغيرة (بالنسبة لبيروكسيداز الفجل 5-10٪).

طريقة الحصول على اقتران مناعي ، على أساس أكسدة عنصر الكربوهيدرات من الإنزيم مع فترة الصوديوم (ارتباط البيروكسيديز بالمتقارن يصل إلى 70-90 ٪ من الكمية الأولية للإنزيم) ، وجد أكبر تطبيق عملي.

يجب أن يكون للمقارن الموثوق به الخصائص التالية:

النمر ذو الجسم المضاد العالي والألفة العالية للمستضد بحيث يمكن استخدامه في التخفيف العالي وبالتالي تقليل الارتباط غير النوعي ؛

خصوصية كافية في تربية العمل ؛

غلبة الأشكال الأحادية على الأشكال البوليمرية ، لأن تميل الأشكال البوليمرية إلى الالتصاق بشكل غير محدد بالبلاستيك ، مما يؤدي إلى ارتفاع مستوى التفاعل في الخلفية ؛

النسبة المولية المثلى بين الإنزيم والأجسام المضادة (النسبة المثلى هي حوالي 1: 1) ؛

نشاط إنزيمي كافٍ للمقارن. يتم تحديد هذه الخاصية بشكل أساسي من خلال شروط الاقتران ونسبة جزيئات الإنزيم والجسم المضاد في الاتحاد.

الحالة الصلبة

يمكن استخدام مواد مختلفة كمرحلة صلبة لـ ELISA: بوليسترين ، بولي فينيل كلوريد ، بولي بروبيلين ومواد أخرى. يمكن أن تكون المرحلة الصلبة عبارة عن جدران أنبوب اختبار ، 96 بئرًا وألواحًا وكرات وخرزًا أخرى ، بالإضافة إلى النيتروسليلوز والأغشية الأخرى التي تمتص البروتينات بنشاط.

يمكن تثبيت المستضد أو الأجسام المضادة في المرحلة الصلبة بثلاث طرق:

- الامتزاز السلبي على أساس التفاعلات القوية الكارهة للماء بين البروتينات والسطح الاصطناعي ؛

- الارتباط التساهمي بالمرحلة الصلبة ؛

- كيميائي مناعي ، وما إلى ذلك (مرفق غير تساهمي وغير امتزاز).

يستخدم الامتصاص السلبي للبروتينات على نطاق واسع عند إجراء ELISA على ألواح المعايرة ، على أغشية النيتروسليلوز. يتبع الامتزاز السلبي مبدأ التشبع ويرتبط بالوزن الجزيئي للمادة الممتصة. سطح الامتصاص للأغشية من أنواع مختلفة (النيتروسليلوز ، النايلون ، إلخ) أعلى 100-1000 مرة من سطح البلاستيك.

غالبًا ما يكون للسكريات والبروتينات عالية الغليكوزيلات تقارب منخفض مع البوليسترين. هناك حاجة إلى طرق أخرى لتثبيتها ، مثل الارتباط التساهمي بالغلوتارالدهيد. الارتباط التساهمي فعال إذا تم استخدام خرزات ماء (الاغاروز) وحبات البوليسترين كمرحلة صلبة.

تعتمد الطرق الكيميائية المناعية على استخدام الأجسام المضادة "المصيدة" التي تم امتصاصها مسبقًا لشل حركة المستضد أو الأجسام المضادة. يكون المستضد المُثبَّت مناعيًا أكثر نشاطًا بعشر مرات من المستضد الممتز بشكل سلبي. يمكن استخدام الليكتينات أو البروتينات المرتبطة بالجلوبيولين المناعي للبكتيريا التي يتم امتصاصها بسهولة على الأسطح البلاستيكية أو غيرها من الأسطح الكارهة للماء ، مثل كونكانافالين A (Con A) أو بروتين المكورات العنقودية A. Con A قادر على شل حركة البروتين gp 120 لفيروس HIV.

يمكن للمواقع الحرة على سطح الطور الصلب التي لا ترتبط بالعامل الممتص أن تثبت الجزيئات الأخرى أثناء الاختبار ، بما في ذلك الاتحادات ، مما يؤدي إلى زيادة إشارة الخلفية. لمنع الارتباط غير المحدد بعد التثبيت على المرحلة الصلبة للمادة الأساسية ، يتم إجراء المعالجة بمواد محايدة للاختبار. أكثر عوامل الحجب شيوعًا هي ألبومين مصل الأبقار (BSA) ، الكازين ، إلخ. يعتمد اختيار عامل الحجب وظروف هذه المرحلة على نوع المرحلة الصلبة ، وحساسية النظام.

حاليًا ، يتم استخدام عدد كبير من الأصناف والتعديلات المختلفة لـ ELISA. أصبحت أنواع مختلفة من مقايسة الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم (ELISA) منتشرة على نطاق واسع.

تم اقتراح المرحلة الصلبة ELISA في عام 1971. المبادئ الأساسية لمرحلة ELISA الصلبة ، بغض النظر عن التعديل ، هي كما يلي:

1. في المرحلة الأولى من التفاعل ، يتم امتصاص المستضدات أو الأجسام المضادة على المرحلة الصلبة. في هذه الحالة ، يمكن إزالة الكواشف غير المرتبطة بالمرحلة الصلبة بسهولة عن طريق الغسيل.

2. تحضن عينة الاختبار في الآبار الحساسة. تحتوي آبار التحكم الإيجابي على كواشف قياسية. في هذه الحالة ، تتشكل المجمعات المناعية على سطح المرحلة الصلبة. تتم إزالة المكونات غير المربوطة عن طريق الغسيل.

3. عند إضافة إنزيم - جسم مضاد أو اتحاد إنزيم - مستضد وربطه بالمركب المناعي الثابت ، يظل الموقع النشط للإنزيم متاحًا للتفاعل اللاحق مع الركيزة. يؤدي احتضان الركيزة في الآبار بمقارن غير متحرك إلى تطوير تفاعل لوني. يمكن إيقاف هذا التفاعل في المرحلة المرغوبة ، ويمكن تقييم شدة التلوين بصريًا أو بالكثافة البصرية.

خطوة مهمة في أي متغير لتحليل المرحلة الصلبة هي إجراء غسل الكواشف غير المقيدة. من المهم ليس فقط شطف المكونات المثبتة على المرحلة الصلبة ، ولكن إزالة الكواشف من عمق الطبقة بالكامل. هذه هي مراحل التحليل الأكثر استهلاكا للوقت والتي تتطلب عمالة مكثفة. يمكن غسل العينات تلقائيًا باستخدام جهاز خاص - غسالة أو يدويًا باستخدام ماصة متعددة القنوات. لإجراء اختبار ELISA ، أنت بحاجة إلى:

- قرص من البوليسترين أو غيره من خيارات الطور الصلب المستخدمة ؛

- محلول الغسيل

- مترافق (مستضدات أو أجسام مضادة موصوفة إنزيميًا) ؛

- خليط من الركائز المستعملة ؛

- محلول التوقف (إيقاف الكاشف - محلول لإيقاف التفاعل) ؛

- العينات المستخدمة للمراقبة الإيجابية و / أو السلبية ؛

- مستضد قياسي (لبناء منحنى معايرة) ؛

- ماصات أحادية ومتعددة القنوات ؛

- غسالة (غسالة) ؛

- جهاز بصري لتحديد الكثافة الضوئية لمحلول الاختبار (قارئ ELISA ، قارئ يقوم بمقاييس ضوئية متتابعة لجميع الآبار) ؛

- 5-100 مايكرولتر من المادة البيولوجية المدروسة.

إليسا المباشر

1. يتم امتصاص المستضدات أو الأجسام المضادة (مادة الاختبار) في آبار الألواح. لوحظ أعلاه أن المستضدات تختلف اختلافًا كبيرًا في قدرتها على الامتصاص على أنواع مختلفة من البلاستيك ، اعتمادًا على فئة المواد (البروتينات أو الكربوهيدرات أو البروتينات الدهنية) التي تنتمي إليها. في كثير من الأحيان في ELISA المباشر ، يكون المستضد المعطل في المرحلة الصلبة هو الخلايا ومستضدات الجسيمات الأخرى.

مراقبة. كعنصر تحكم ، يتم استخدام الآبار التي تحتوي على عينة تحكم إيجابية ممتصة ، والتي تحتوي بالضرورة على المستضد المطلوب ، وعينة تحكم سلبية ، من الواضح أنها لا تحتوي على مستضد الاختبار. في حالة وجود مستضد معياري منقى ، يتم إجراء التفاعل بعدة تخفيفات بحيث يمكن إنشاء منحنى معايرة.

2. "حجب مواقع الربط الحرة المتبقية على الطور الصلب باستخدام الكازين BSA ، وما إلى ذلك (لمنع الامتصاص غير المحدد للمقارن على المرحلة الصلبة).

3. تضاف الأجسام المضادة أو المستضدات الموصوفة بالإنزيم (المتقارن) إلى الآبار وتحضينها. لن يحدث ربط الاتحاد بالطور الصلب إلا إذا كان كلا مكونين من النظام مكملين. بعد الحضانة مع الاتحاد ، يتم غسل الآبار ، وبالتالي إزالة الجزء غير المرتبط من الاتحاد.

4. ثم يتم إضافة الركيزة الخاصة بالإنزيم المستخدم إلى الآبار وحضنها. عندما يتم الوصول إلى المستوى الأمثل للتلطيخ في آبار التحكم الإيجابية ، يتم إيقاف تفاعل الإنزيم.

5. المحاسبة لرد الفعل. أولاً ، تؤخذ نتائج التفاعل بعين الاعتبار بصريًا. للحصول على حساب أكثر دقة للنتائج ، يتم تقييم كثافة التلوين على قارئ ELISA مع مرشح ضوء مناسب. وفقًا لنتائج التحليل ، تم رسم رسم بياني لاعتماد الكثافة الضوئية على التركيز (الشكل 2).

الشكل 2. إليسا المباشر.

أ) للكشف عن مستضد ؛ ب) لاكتشاف الأجسام المضادة.

عادة ما يستخدم هذا البديل من ELISA للكشف عن أجسام مضادة معينة. يتم امتصاص المستضد القياسي في آبار الألواح وحضنها بعينات من مصل الدم أو مواد بيولوجية أخرى تم الحصول عليها من المريض (السائل النخاعي واللعاب وما إلى ذلك). يتم الكشف عن أجسام مضادة محددة مرتبطة بمولد الضد على الطور الصلب باستخدام اتحاد مضاد للجلوبيولين. اعتمادًا على الغرض من التحليل ، يتم استخدام كواشف مختلفة من مضادات الغلوبولين التي تكشف عن الأجسام المضادة من جميع الأنماط المتماثلة ، أو خاصة بالفئات الفردية والفئات الفرعية من الغلوبولين المناعي. الميزة الرئيسية للطريقة هي عالمية المرافق. يمكن استخدام نفس الاتحاد لاكتشاف الأجسام المضادة البشرية لمجموعة متنوعة من المستضدات في أي عينة. رد الفعل بسيط منهجيًا.

المراحل الرئيسية لـ ELISA غير المباشر للكشف عن الأجسام المضادة:

1. يُمتص المستضد على الطور الصلب ، ثم يغسل من المكونات غير المرتبطة.

2. منع مواقع الربط المجانية. مغسول.

3. تضاف مادة الاختبار إلى الآبار ، ثم تحضن ثم تغسل. في موازاة ذلك ، يتم وضع العينات ذات الضوابط الإيجابية والسلبية.

4. إضافة مضادات الغلوبولين المتقارن في تخفيف العمل ، واحتضان ، وغسل المكونات غير منضم.

5. يتم إدخال الركيزة واحتضانها. عند الوصول إلى المستوى الأمثل للتلطيخ في آبار التحكم الإيجابية ، يتم إيقاف التفاعل بإضافة محلول الإيقاف.

6. قم بقياس كمية منتج التفاعل على قارئ ELISA (الشكل 3).

في ظل ظروف الفحص المثلى ، تكون الطريقة محددة وحساسة للغاية. يسمح لك باكتشاف كميات نانوجرام من الأجسام المضادة في مصل المرضى الخاضعين للدراسة. للحصول على نتائج مرضية ، من الضروري توحيد الكواشف والمنهجيات. يمكن أيضًا استخدام متغير ELISA لاختبار الأجسام المضادة وحيدة النسيلة.

يجب أن تحتوي المستضدات المكتشفة باستخدام متغير ELISA هذا على حواتم ربط متعددة للأجسام المضادة أو لها حواتم متكررة ومنفصلة مكانيًا لها نفس الخصوصية.

عند تنفيذ هذا البديل من ELISA ، يتم تحضين الأجسام المضادة متعددة أو وحيدة النسيلة عالية النوعية الممتزة على الطور الصلب مع عينة الاختبار. بعد إجراء الغسيل ، تتم إضافة الأجسام المضادة التي تحمل علامة الإنزيم (مترافقة) إلى نفس المستضد إلى الآبار ، ثم يتم تنفيذ جميع مراحل التفاعل الأخرى. تعتمد كفاءة تكوين معقد معين في كل مرحلة من مراحل التحليل على ثابت الارتباط لتفاعل الجسم المضاد للمستضد.

المراحل الرئيسية للتحليل:

1. يتم تجميد الأجسام المضادة وحيدة النسيلة أو الأجسام المضادة متعددة النسيلة المنقاة بتقارب في المرحلة الصلبة.

2. يتم إدخال عينة الاختبار في آبار الألواح ، ويتم وضع عينة تحكم إيجابية وعينة تحكم سلبية بالتوازي في تخفيفات مختلفة. تحضين وتغسل.

3. يتم إدخال الأجسام المضادة أحادية النسيلة أو متعددة النسيلة (مترافقة) المسمى بالإنزيم في الآبار. يتم الغسيل بعد الحضانة.

4. يتم إدخال الركيزة واحتضانها. يتم إيقاف التفاعل عندما يتحقق التلوين الأمثل في آبار التحكم الإيجابية.

5. المحاسبة عن النتائج على قارئ ELISA.

الميزة الرئيسية لهذه الطريقة هي حساسيتها العالية ، والتي تتجاوز قدرات مخططات ELISA الأخرى (الشكل 4).

الشكل 3. غير المباشر ELISA للكشف عن الأجسام المضادة.

يعتمد خيار التحليل هذا على المنافسة بين الأجسام المضادة المسمى (المترافق) وغير المُسمى (الاختبار) للارتباط بالمولد الضد الممتص على المرحلة الصلبة. ستنخفض كمية الإنزيم المرتبط بالمرحلة الصلبة بما يتناسب مع محتوى الأجسام المضادة الحرة في الخليط. لتحديد مولد الضد ، يتم استخدام نفس الخيار ، ولكن في هذه الحالة ، يتنافس المستضد المطلوب مع مولد الضد المعياري المسمى للارتباط بالأجسام المضادة المثبتة على سطح الطور الصلب.

تتطلب الطريقة التنافسية حدًا أدنى من العمليات ، واستهلاكًا منخفضًا للكواشف ، ويمكن تشغيلها تلقائيًا بسهولة. عند إجراء اختبار ELISA تنافسي للكشف عن الأجسام المضادة ، فمن الأفضل استخدام الأجسام المضادة أحادية الخلية المسمى ، ثم تحدث منافسة الاتحاد مع عينة الاختبار على حاتمة واحدة من المستضد الممتص على المرحلة الصلبة. يستخدم متغير ELISA لتحديد المركبات المختلفة ، مثل الغلوبولين المناعي البشري ، ومستضد السرطان الجنيني ، والأنسولين ، وما إلى ذلك. ويسمح باكتشاف الأجسام المضادة لتشخيص حواتم العوامل المعدية المهمة.

المراحل الرئيسية للتحليل للكشف عن المستضد (الشكل 5):

1. يتم تجميد الأجسام المضادة وحيدة النسيلة الخاصة بالمستضد المراد اكتشافه في المرحلة الصلبة.

2. أضف المستضد المسمى بالإنزيم وعينة الاختبار بتركيز معروف في آبار الألواح. إجراء الحضانة والغسيل. بالتوازي ، يتم وضع الضوابط الإيجابية والسلبية في الآبار المجاورة. لبناء المعايرة باستخدام مستضد قياسي غير محدد في تخفيفات مختلفة.

3. أضف الركيزة ، احتضن ، أوقف التفاعل عندما يتطور تلطيخ مثالي في آبار التحكم الإيجابية.

4. المحاسبة لرد الفعل على قارئ ELISA.

في هذه الحالة ، تتناسب كمية المستضد في عينة الاختبار عكسًا مع النشاط الأنزيمي في المرحلة الصلبة.

في هذا البديل من ELISA ، يرتبط المستضد الموجود في عينة الاختبار بالأجسام المضادة أحادية النسيلة المسمى بالإنزيم ويمنع تفاعلها مع المستضد القياسي المثبت في المرحلة الصلبة. إن وجود كميات ضئيلة حتى من المستضد الخاص بالمقارن في العينة سيمنع ارتباط الأجسام المضادة الموصوفة بالمستضد المعطّل. درجة التثبيط تتناسب طرديا مع محتوى المستضد في المحلول. للتحليل الكمي ، يتم إنشاء منحنى المعايرة باستخدام التخفيفات التسلسلية لمولد الضد القياسي. المراحل الرئيسية من ELISA المثبط للكشف عن المستضد (الشكل 6).

1. يمتص المستضد القياسي في آبار الألواح. حدد التخفيف العملي للأجسام المضادة المسمى عن طريق المعايرة.

الشكل 4. "ساندويتش" - البديل ELISA.

2. يتم تحضين المتقارن مسبقًا في التخفيف العامل مع تخفيفات عينة الاختبار ، ومستضد قياسي وعينات تحكم إيجابية.

3. يتم نقل الخليط إلى آبار الألواح. للتحكم في الارتباط بنسبة 100٪ ، تتم إضافة الأجسام المضادة المميزة فقط إلى العديد من الآبار ، بدون مستضد مثبط. يتم تحضين الألواح ثم غسلها.

4. إضافة الركيزة.

5. سجل النتائج.

تركيز المستضد الذي سيتم تحديده في عينة الاختبار يتناسب عكسياً مع النشاط الأنزيمي في المرحلة الصلبة.

يمكن استخدام ELISA ليس فقط لتحديد مستضد قابل للذوبان أو جسم مضاد ، ولكن أيضًا الخلايا التي تنتج بروتينات مختلفة.

في عام 1983 ، تم تكييف تقنية ELISA للكشف عن الخلايا اللمفاوية التي تفرز الأجسام المضادة أو المستضدات (مثل السيتوكينات) في المختبر. تسمى هذه الطريقة ELISPOT (المقايسة المناعية الأنزيمية أو طريقة البقعة). المبدأ الرئيسي للطريقة:

1. يتم امتصاص المستضدات أو الأجسام المضادة على سطح بئر من البوليسترين (باستخدام 24 لوحة خلية بئر) ، والتي تعمل بمثابة كواشف "محاصرة".

2. تضاف الخلايا اللمفاوية المدروسة ، المزروعة لعدة ساعات عند 37 درجة مئوية ، مما يمنحها الفرصة لشغل مكان معين وأداء وظيفة إفرازية. يتم التقاط الأجسام المضادة أو المستضدات التي تفرزها هذه الخلايا بواسطة الكواشف الممتصة على الطور الصلب.

3. يتم إزالة الخلايا باستخدام محلول الغسيل مع منظف الخلية lysing المنظف.

4. تظهر مواقع تراكم المنتجات الإفرازية عن طريق إضافة الأجسام المضادة المرتبطة بالإنزيم (كاشف مضاد الجلوبيولين).

5. يضاف خليط الركيزة - الاغاروز (يجب أن تذوب الركائز المستخدمة في الاغاروز وتشكل نواتج تفاعل غير قابلة للذوبان) ، وتتشكل بقع بنية أو زرقاء على سطح المرحلة الصلبة (اعتمادًا على الإنزيمات والركائز المستخدمة) ، مما يكشف عن المناطق التي توجد فيها الخلايا تم تحديد موقعهم.

يتم حساب البقع الناتجة تحت المجهر ، وسيكون هذا هو عدد الخلايا المفرزة.

يمكن استخدام غشاء النيتروسليلوز كمرحلة صلبة.في هذه الحالة ، هناك عدد من المزايا: نظرًا لقدرة الامتصاص العالية لـ NCM ، يلزم استخدام كمية أقل بكثير من المستضد المستخدم ككاشف "محاصرة" ، بالإضافة إلى ذلك ، ليست هناك حاجة لتضمين الاغاروز في الركيزة.

من خلال التحديد المتزامن لعدد الخلايا المفرزة والكمية الإجمالية للمستضد أو الجسم المضاد المفرز في البئر ، وهو أمر ممكن عند استخدام ركيزة مختلفة ، من الممكن تحديد كمية المادة المفرزة بواسطة خلية واحدة.

وجدت هذه الطريقة تطبيقًا واسعًا لتقييم عدد الخلايا التي تفرز المستضد الذي تم التقاطه بواسطة الأجسام المضادة الممتصة ، وهي تستخدم لتحديد عدد الخلايا التي تفرز السيتوكينات (IL-1 ، IL-2 ، IL-4 ، IL-6 ، IFN-y ، TNF-a).

عند استخدام الأجسام المضادة عالية التقارب ، تكون حساسية متغيرات ELISA الفردية عالية جدًا ومن الناحية النظرية تجعل من الممكن اكتشاف جزيئات المستضد الفردي ، ولكن في الممارسة العملية ، تكون الحساسية محدودة بعدد من العوامل: نشاط الإنزيم ، وشدة الإشارة ، وطرق حساب الإشارة . تتيح أنظمة تضخيم الإشارة زيادة حساسية متغيرات ELISA المختلفة. ضع في اعتبارك بعض هذه الأنظمة:

بناءً على تفاعل أفيدين-بيوتين.

يتم ربط جزيئات البيوتين المساعد (m.m. 244 Da) مع الأجسام المضادة باستخدام biotinyl-N-hydroxysuccimide. يسهل ربط جزيء البيوتين الصغير بالغلوبولين المناعي أو بروتين آخر دون انتهاك خصائصه المناعية أو الأنزيمية. يرتبط الإنزيم في هذه الحالة ببروتين بياض البيض أفيدين. إن ألفة ارتباط أفيدين بالبيوتين عالية جدًا (ثابت تفكك المعقد هو 10-15 مول) ، تم تثبيت اتحاد إنزيم أفيدين بشكل ثابت على معقد مستضد - جسم مضاد - بيوتين. بعد إضافة الركيزة المناسبة ، يتم تحديد ناتج التفاعل بطريقة القياس الطيفي أو عن طريق شدة التألق.

يتكون جزيء أفيدين من أربع وحدات فرعية متطابقة ، وهو قادر على التفاعل مع أربعة جزيئات من البيوتين ، مما يسمح باستخدامه كجزيء ربط بين مركبين يحتويان على البيوتين. في هذه الحالة ، يتم أيضًا معالجة الإنزيم بيوتينيل ، ويعمل أفيدين كجسر يربط بين جزيئين يحتويان على بقايا البيوتين. يضاف أفيدين المجاني إلى معقد المستضد - الأجسام المضادة - البيوتين الناتج ، متبوعًا بالإنزيم المعالج بالبيوتين. سجل رد الفعل.

يمكن امتصاص بروتين أفيدين بشكل غير محدد على جزيئات أخرى ؛ لذلك ، يتم استخدام بروتين آخر مرتبط بالبيوتين ، وهو الستربتافيدين ، الموجود في البكتيريا Streptomyces avidinii ، بشكل متزايد. يشكل الستربتافيدين أيضًا مركبًا قويًا مع البيوتين ويتكون من أربع وحدات فرعية متطابقة.

يتيح استخدام مركب أفيدين-بيوتين زيادة حساسية ELISA بشكل كبير ، حيث يمكن ربط العشرات من جزيئات البيوتين بجزيء AT واحد أثناء تخليق اتحاد. الحصول على اقتران (الأجسام المضادة والإنزيمات مع البيوتين) سهل للغاية ويصاحبه الحد الأدنى من التغييرات في نشاطها المناعي والإنزيمي. يمكن استخدام مقارنات الإنزيمات مع البيوتين ككواشف عالمية.

استخدام التفاعلات الكيميائية.

يمكن استخدام تفاعلات التلألؤ الكيميائي للحصول على إشارة في ELISA ، مع زيادة حساسية الطريقة وتقليل وقت التحليل. يستخدم بيروكسيداز الفجل على نطاق واسع كعلامة في ELISA ، ويمكن أيضًا استخدام تفاعلات كيميائية مختلفة للكشف عنه. تعتمد تفاعلات اللمعان الكيميائي على قدرة اللومينول على التوهج عند التأكسد باستخدام بيروكسيد الهيدروجين. في التحليل المباشر ، ينتج تفاعل إنزيمي بيروكسيد الهيدروجين ويؤكسد اللومينول ؛ يتم تحفيز هذا التفاعل بواسطة بيروكسيداز الفجل. لتعزيز الإشارة ، يتم استخدام مركبات مختلفة ، على سبيل المثال ، لوسيفيرين ، الفينولات ، في هذه الحالة ، يتم تحسين شدة اللمعان بمقدار 10-100 مرة ، في بعض الحالات بمقدار 500 مرة (التحليل الكيميائي المحسن). إشارة الإنارة مستقرة للغاية ، يصل مستواها إلى الحد الأقصى في 30 ثانية (للمقارنة: تفاعل اللون مع OPD كمؤشر يتطور بشكل كامل فقط في 30 دقيقة).

في التحليل غير المباشر باستخدام luminol أو مشتقاته ، يتم تمييز الجسم المضاد. مثل هذا الملصق في الحالة الحرة يمكن أن يتأكسد بواسطة بيروكسيد الهيدروجين مع إطلاق الضوء. إذا شكل معقدًا ، فإنه يفقد قدرته على الأكسدة.

على أساس أنظمة التعاقب.

لزيادة حساسية ELISA ، يمكن استخدام أنظمة شلال الإنزيم. في هذه الحالة ، ينتج عن الإنزيم الأول المرتبط بالجسم المضاد ركيزة قابلة للاختزال لنظام الإنزيم الثاني. قد يكون نظام الإنزيم الثاني عبارة عن ركيزة - دورية أو دورة الأكسدة الحلقية. في هذه الحالة ، يمكن أن يعمل الفوسفو جلوكويزوميراز ، والألدولاز ، والفوسفاتيز القلوي كتسميات إنزيمية. يتم تحديد ناتج التفاعل النهائي بصريًا أو طيفيًا.

تحقق أنظمة تضخيم ELISA حساسية عالية. تُستخدم أنظمة ELISA لتحديد مستوى الهرمونات (تحفيز الغدة الدرقية ، البروجسترون ، إلخ).

وجدت ELISA تطبيقًا واسعًا في مختلف مجالات الطب والبيولوجيا بسبب البساطة النسبية والحساسية العالية للطريقة. تم استخدام ELISA بنجاح من أجل:

التشخيص الشامل للأمراض المعدية (الكشف عن مستضدات محددة مختلفة أو أجسام مضادة لها) ؛

كشف وتحديد مستوى الهرمونات والأدوية في العينات البيولوجية ؛

تحديدات النمط المتماثل (IgG و IgM وغيرها) للأجسام المضادة ضد مستضد معين ؛

الكشف عن المجمعات المناعية.

الكشف عن علامات الورم.

تحديد بروتينات مصل الدم (الفيريتين ، الفبرونيكتين ، إلخ) ؛

تحديد إجمالي IgE والأجسام المضادة المحددة IgE ؛

فحص الأجسام المضادة رمع عضلي ؛

تعريفات السيتوكينات في السوائل البيولوجية.

حساسية الطريقة

استبدلت ELISA طرق التراص والترسيب و RIA المستخدمة على نطاق واسع في وقت سابق في الممارسة السريرية. مقارنة بالطرق المذكورة أعلاه ، فإن ELISA أقل مجهودًا وأقل استهلاكا للوقت ، وهو مناسب لإجراء عدد كبير من نفس النوع من التحليل.

تجمع ELISA بين الخصوصية الفريدة للمقايسة المناعية والحساسية العالية لتوسيم الإنزيم. حساسية الطريقة (تعني الحساسية أقل كمية يمكن اكتشافها من الأجسام المضادة أو المستضد) تتحدد بالعوامل التالية: تقارب الأجسام المضادة ، يفضل استخدام الأجسام المضادة وحيدة النسيلة ؛ نشاط معين للإنزيم. شدة الإشارة حساسية الإشارة. تختلف متغيرات ELISA المختلفة في حساسيتها. تتيح المتغيرات المنفصلة لمرحلة ELISA الصلبة اكتشاف جزيئات مفردة في العينة. متوسط ​​حساسية ELISA هو 10-9 - 10-12 مول.

Galaktionov V.G. علم المناعة. مطبعة جامعة موسكو ، 1998

كيشكون أ. الدراسات المناعية وطرق تشخيص الأمراض المعدية في الممارسة السريرية. وكالة الأنباء الطبية ، 2009

كوندراتييفا آي. ورشة عمل في علم المناعة. كتاب مدرسي للمدارس الثانوية. الأكاديمية ، 2004

Lefkovits I. ، Pernis B. طرق البحث المناعي. السلام ، 1988

رويت أ ، بروستوف د ، ميل د. علم المناعة. السلام 2000

سوكولوف إي. علم المناعة السريرية. الطب ، 1998

طرق المناعة. الطب ، 1987

خايتوف ر.م.علم المناعة. الطب 2000

شيجينا يو في. علم المناعة: كتاب مدرسي. دار نشر RIOR ، 2007

ياريلين أ. أساسيات علم المناعة. الطب ، 1999

من وقت لآخر ، يصف الأطباء اختبارات ELISA ، ولا يعرف الجميع ما هو. يحتوي فك ELISA على ما يلي - المقايسة المناعية الإنزيمية. يساعد اختبار الدم هذا على فهم كيفية محاربة الجسم لأمراض الطيف المعدي وإظهار مرحلة المرض. يساعد الإنزيم المناعي في تقييم النشاط الوقائي للدم ، وتحديد نقص المناعة في الأمراض المرتبطة بالعدوى ، والمشاكل الهرمونية ، وأكثر من ذلك.

يعمل اختبار الدم ELISA مع المواد المأخوذة من الوريد. بالإضافة إلى ذلك ، يمكن فحص محتويات الجسم الزجاجي ، والسوائل من النخاع الشوكي ، ومسحات من مجرى البول أو قناة عنق الرحم. بالنسبة للمقايسة المناعية للإنزيم ، يمكن أن تأخذ ELISA في النساء الحوامل السائل الذي يحيط بالجنين.

في هذه الحالة ، يمكن اختبار الدم مباشرة من أجل ELISA باستخدام تقنيات مختلفة. هناك طريقة مباشرة ، طريقة غير مباشرة ، منافسة وحجب. عندما يصاب الجسم ببعض العوامل المسببة للأمراض ، والتي تسمى مستضد ، يبدأ الجهاز المناعي في إنتاج أجسام مضادة محددة ، على سبيل المثال ، لالتهاب الكبد. تهدف هذه الأجسام المضادة إلى "التعامل" مع العوامل الأجنبية. ما هي الأجسام المضادة؟ هذه بروتينات خاصة يمكن أن ترتبط بالمستضدات وتشكل مجمعات مستهدفة مناعيًا ، والتي تسمى الأجسام المضادة للمستضد. إن تشخيص ELISA هو المسؤول عن اكتشاف هذه المجمعات.للكشف عن مستضد ، يتم إضافة الأجسام المضادة إلى عينة الدم الناتجة ، أو يتم إجراء الإجراء العكسي.

تعتمد نتيجة ELISA الإيجابية على تفاعل المناعة والإنزيمات. تحت تأثير العامل الأول ، ترتبط عوامل العدوى والعناصر الخلوية ، تساعد الثانية على تصور نتيجة الأول. تتضمن الاستجابة المناعية جسمًا مضادًا ورباطًا مستضديًا. نتيجة لهذه العملية ، يتم تكوين مركب موجه مناعي. تحتوي جميع الخلايا على مستضد على سطحها. تلتقط الخلية المناعية الخلية المشبوهة ، ويخضع المستضد ، المثبت على السطح ، لإجراء مقارنة مع المعلومات التي يتم "تحميلها" في الذاكرة. إذا كان هناك تطابق في الوصف ، فعندئذٍ تعود الخلية إلى موطنها ، وإذا لم يكن الأمر كذلك ، فسيحدث اتصال ، يكون تكوينه مسؤولاً عن الجسم المضاد المرتبط بالسطح.

في غضون ذلك ، يسمح التفاعل الأنزيمي للمواد بالتحول إلى مواد جديدة. تتعرض المادة للإنزيم. في هذه الحالة ، يتم توفير الاختلاف الأنزيمي بواسطة ركائز مختلفة. يتم إرسال المنتج الناتج عن هذا التفاعل لتحديد كمية العامل الممرض ، والذي يعتمد تحديده على كثافة لون المحلول.

ميزات الطريقة

يتم وصف مقايسة الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم عندما يكون من الضروري تشخيص الحساسية ، والأمراض التي من أصل فيروسي. يوجد أيضًا اختبار ELISA لمرض الزهري وعدد من الإصابات الأخرى ، والتي يحدث انتقالها من خلال الاتصال الجنسي غير المحمي. أصبحت مثل هذه التشخيصات أكثر شيوعًا مقارنةً بـ PCR. الحقيقة هي أن تفاعل البوليميراز المتسلسل يتضمن العمل مع اللطاخات. على عكس PCR ، يمكن الحصول على نتائج ELISA من اختبارات الدم.

بالإضافة إلى ذلك ، يمكن وصف اختبار الدم ELISA عندما يكون ذلك ضروريًا لإثبات وجود نقص المناعة وتشخيص الأورام وتقييم مدى فعالية العلاج وتحديد المستوى الهرموني والخضوع لفحص ما قبل الجراحة معًا.

إذا قارنا الدراسات التي أجرتها ELISA ، على سبيل المثال ، مع PCR ، يمكننا العثور على عدد من المزايا. الشيء الرئيسي هو إمكانية التشخيص الكامل حتى في المراحل الأولى من التطور. بالإضافة إلى ذلك ، تساعد نتائج ELISA في تحديد المرحلة المحددة للمرض ، وعلى أي مستوى يتم تطوره.

يتميز تحليل ELISA مقارنةً بـ PCR بكفاءة أعلى ، بالإضافة إلى أنه يمكن أخذه أثناء الحمل للكشف عن الأمراض المنقولة جنسياً. يمكن لأي شخص اجتاز هذا الاختبار معرفة تركيز هرمون TSH في مصل الدم. هذا مهم جدا للتحقق من رد فعل الغدة الدرقية ، ما إذا كانت هناك أعطال في عملها.

ومع ذلك ، فإن المزايا الإضافية التي يتمتع بها تفاعل البلمرة المتسلسل هي سرعة الدراسة ، مما يعني أنه يتم الحصول على النتائج بسرعة. الأطباء يقدرون دقة النتائج. إذا كنا نتحدث عن الأمراض المنقولة بالاتصال الجنسي ، فإن المستوى يصل إلى 98 في المائة ، كما هو الحال مع تركيز هرمون TSH.

بالطبع ، لا يخلو من العيوب. ومع ذلك ، في هذه الحالة نتحدث عن ميزات غير مباشرة للاختبار. على وجه الخصوص ، نحن نتحدث عن حقيقة أنه من المستحيل استبعاد الأخطاء المحتملة في تعريف المعايير. في بعض الأحيان ، يمكن أن يُظهر التحليل الذي تم إجراؤه بواسطة فتاة تتمتع بصحة جيدة نتيجة إيجابية خاطئة ، أو سلبية في الحالة المعاكسة. ومع ذلك ، فإن تصنيف طرق البحث النفسي في معظم الحالات يربط بين أوجه القصور هذه مع الإعداد غير السليم أو انتهاك التقنية التي تم أخذ المادة بها.

ميزات التنفيذ

مع تحليل ELISA ، في معظم الحالات ، يتم التبرع بالدم. قبل التبرع بالدم ، من المهم الحفاظ على ثماني ساعات على الأقل من الصيام ، لاستبعاد استخدام عدد من الأدوية التي تؤثر على نتيجة التحليل. نحن نتحدث عن مضادات الهيستامين والأدوية الهرمونية التي تؤثر على عمل الغدة الدرقية. بالإضافة إلى ذلك ، يجب استبعاد الكحول قبل يوم واحد على الأقل. تأكد من عدم التدخين قبل ساعة واحدة على الأقل من التبرع بالدم. من الممكن أيضًا تشويه النتيجة عند تناول الأدوية.

قبل الشروع في فك التشفير ، تجدر الإشارة إلى طرق القياس المستخدمة لمثل هذا الاختبار. نتيجة التحليل ، سيتم تحديد الأجسام المضادة أو الغلوبولين المناعي Ig. يقصد بها البروتينات المحددة للغاية التي تمت مناقشتها مسبقًا. الخلايا الليمفاوية B هي المسؤولة عن إنتاجها بمجرد دخول الفيروسات أو البكتيريا أو الفطريات إلى الجسم. يتم تمييز خمسة أنواع من الجلوبولين المناعي ، يشار إليها بالأبجدية اللاتينية.

ترتبط اختلافاتهم مع اختلاف الشكل الجزيئي والوزن. لديهم أنصاف عمر مختلفة ، أو يشاركون أو لا يشاركون في العمليات المعدية بطرق مختلفة. يختلف أيضًا الإطار الزمني الذي يمكن خلاله اكتشافهم من لحظة حدوث العدوى.

إذا تم تصنيف الغلوبولين المناعي باستخدام الوزن الجزيئي كأساس ، فإن IgM لديه أعلى المعدلات. من سمات هذا النوع من الغلوبولين المناعي عدم القدرة على المرور عبر حاجز المشيمة. إذا تم الكشف عن IgM في التحليل عند طفل حديث الولادة ، فإننا نتحدث عن وجود عدوى في الجنين.

الغالبية العظمى من دم الإنسان تحتوي على الغلوبولين المناعي IgG ، أقلها IgE. عند الحديث عن العمل في إطار العمليات المعدية ، ينبغي إعطاء أهمية خاصة للخيارات A و M و G. يعمل IgE كعلامة على رد فعل تحسسي. يوجد IgD فقط في أنسجة الغدد الليمفاوية واللوزتين. هذا مهم من وجهة نظر خلق مناعة على المستوى المحلي.

بالإضافة إلى ذلك ، يتم تحديد المستضدات في التحليل. تُفهم على أنها مواد ذات نوع جزيئي عالٍ ، معروفة بأصلها العضوي. على وجه الخصوص ، نحن نتحدث عن مسببات الأمراض المعدية والأمراض الطيفية الأخرى. بالإضافة إلى ذلك ، فإننا نعني أيضًا المواد التي تشير إلى تغيرات الخلايا المختلفة التي لا مفر منها في عدد من الأمراض. يشار أيضًا إلى المركب المناعي ، والذي يوضح مركب الجسم المضاد المستضد الذي يشارك في عملية المناعة.

عادة ، يعتمد وقت الإنتاج على المختبر المحدد الذي تقدمت إليه. يستطيع عدد من المختبرات تقديم النتائج في غضون يوم أو يومين ، بينما يحتاج البعض الآخر إلى أسبوع. قد يكون التأخير بسبب الحاجة إلى تراكم كمية معينة من المصل.

التأثير على النتائج والتفسير

على الرغم من حقيقة أن ELISA تعتبر واحدة من أكثر طرق الاختبار دقة ، إلا أن الأخطاء لا تزال تحدث. يمكن أن يؤثر إجراء أخذ المادة ونقلها غير الصحيح وتخزينها على صحة النتائج. تناول الدواء ، كما ذكر أعلاه ، لوجود أمراض خفية. لن تسمح لك الاضطرابات الأيضية أو نقص المناعة بالحصول على المؤشرات الصحيحة. في فترة الحياة التي تصل إلى عام ، قد لا يكون لدى المواليد الجدد مؤشرات صحيحة تمامًا. هذا يرجع إلى حقيقة أن الأجسام المضادة للأم موجودة في الجسم.

عند الحديث عن فك التشفير ، تستخدم نماذج التحليل علامة موجبة أو سلبية ، والتي تشير إلى نتائج الحساب لكل فئة من فئات الغلوبولين المناعي. الخيارات الممكنة هي التالية.

يشير غياب IgG و IgA و IgM المكتشفة إلى الشفاء التام. النتيجة السلبية لمكونات مثل IgM و IgA و IgG هي نقص المناعة ضد العدوى.

يشير الجمع بين النتيجة الإيجابية والسلبية لـ IgG و IgA مع IgM الإيجابي إلى وجود عدوى حادة في الجسم. تتوافق نتيجة IgG الإيجابية مع قيم IgA و IgM السلبية مع فترة ما بعد التطعيم أو اكتساب المناعة نتيجة للعدوى.

يشير الجمع بين نتيجة إيجابية أو سلبية IgG و IgA ونتائج IgM سلبية إلى وجود عدوى في مسارها المزمن. النتيجة الإيجابية لثلاثة مكونات: IgG ، IgM ، IgA تشير إلى تفاقم العدوى ، والتي كانت في شكل مزمن من الدورة. بالإضافة إلى توضيح فئات الأجسام المضادة بشكل مباشر ، كجزء من فك تشفير تحليل ELISA ، يتلقى الطبيب معلومات حول مؤشراتها الكمية. من المهم التأكيد على أن الطبيب المعالج يجب أن يكون مسؤولاً عن فك التشفير. والحقيقة أن الجمع بين بعض المكونات يمكن أن يؤدي به إلى فكرة النتيجة الخاطئة التي ستؤدي إلى إعادة الاستسلام. فك التشفير الذاتي في هذه الحالة عديم الفائدة.

إن تطور الطب الحديث في عالم التشخيص لا يتوقف أبدًا عن الإعجاب بإنجازاته ، والآن لا يحتاج الطبيب إلى وضع افتراضات حول التشخيص المحتمل ، بالاعتماد فقط على العلامات غير المباشرة. يتيح لك إنشاء وإدخال الدراسات المختبرية للمقايسة الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم (ELISA) إلى عالم التحديد السريع والدقيق ليس فقط وجود العامل الممرض ، ولكن أيضًا العديد من الخصائص الأخرى للمرض.

تاريخ إنشاء وتطوير IFA

بدأ استخدام طريقة اختبار الدم هذه في الطب العملي في منتصف القرن الماضي - في مكان ما في الستينيات. كان هدفها الأولي هو البحث العلمي في مجال الأنسجة ، والذي كان يقتصر على البحث ودراسة التركيب الخلوي المستضدي للأنواع البيولوجية. يعتمد اختبار الدم ELISA على تفاعل المستضدات ذات الصلة (AG) والأجسام المضادة المحددة (AT) ، مع تكوين مركب "مستضد - جسم مضاد" يحدده إنزيم.

دفعت هذه الظاهرة العلماء إلى اتخاذ قرار بإمكانية استخدام الطريقة للتعرف على مركبات البروتين من مختلف الفئات التي تتشكل في مصل الدم عند دخول العامل الممرض إلى الجسم. بسبب مشاركتها المباشرة في عمل الجهاز المناعي ، كانت تسمى هذه المركبات الغلوبولين المناعي (IG ، Ig) ، وكان الاكتشاف أعظم اختراق في التشخيص المختبري.

في الوقت نفسه ، بدأ استخدام هذه الطريقة شديدة الحساسية بنشاط في الثمانينيات فقط ، ولم تكن متوفرة إلا في المؤسسات الطبية عالية التخصص. كانت المحطات ومراكز نقل الدم ومستشفيات الأمراض التناسلية والمعدية هي أول من أتيحت له الفرصة لاستخدام أجهزة تحليل المقايسة المناعية الإنزيمية. كان هذا بسبب الانتشار السريع لـ "طاعون القرن العشرين" - الإيدز ، وكانت هناك حاجة إلى تدابير تشخيصية وعلاجية عاجلة.

إمكانيات التقنية

نطاق اختبار الدم ELISA واسع جدًا - في الوقت الحالي من المستحيل تخيل مدى صعوبة البحث عن أسباب العديد من الأمراض. تُستخدم هذه الدراسة الآن في جميع الفروع الطبية تقريبًا ، حتى في علم الأورام. على الرغم من صعوبة فهم غير المطلعين ، في بعض الحالات ، بعد إجراء ذلك ، كان من الممكن إنقاذ حياة المرضى من خلال اكتشاف الورم في المراحل المبكرة.

مهم! ELISA هو فحص دم يظهر علامات مميزة لبعض العمليات الخبيثة ، مما يسمح لك باكتشاف المرض في مرحلة زمنية لا يخضع فيها لأي طريقة أخرى.

في مراكز التشخيص الحديثة ، يتم تمثيل الفحوصات المخبرية ليس فقط بعلامات الورم - فهي مجهزة بترسانة رائعة من اللوحات لإجراء هذا التشخيص. بمساعدتهم ، يمكنك تحديد العديد من الحالات المرضية ، مثل التشوهات الهرمونية والعمليات المعدية من أصول مختلفة.

بالإضافة إلى ذلك ، فإن إجراء وفك تشفير اختبار الدم ELISA سيجعل من الممكن تتبع تأثير الأدوية على جسم الشخص المريض وحتى الحيوان. يستخدم هذا الأخير على نطاق واسع في العيادات البيطرية ، مما يساعد في الحفاظ على صحة حيواناتنا الأليفة أو معيلنا ، وتوفير إمدادات ثابتة من اللحوم ومنتجات الألبان والبيض ، والتي لا غنى عنها في النظام الغذائي.

لذلك ، نتيجة لأخذ بضعة مليمترات فقط من الدم الوريدي وتشخيصه باستخدام طريقة ELISA ، سيتمكن الطبيب ، بعد وصف المواد البحثية ، من تحديد:

• الحالة الهرمونية ، بما في ذلك المواد النشطة بيولوجيا للجنس والغدة الدرقية ، وكذلك الغدد الكظرية ؛
• وجود عدوى بكتيرية وفيروسية (التهاب الكبد B و C ، الزهري ، الهربس ، الكلاميديا ​​، السل ، myco- و ureaplasmosis ، HIV ، TORCH) وأمراض أخرى من هذا النوع ؛
• علامات النشاط الحيوي لمسببات الأمراض في العملية المرضية ، والتي انتهت بالشفاء وانتقلت إلى مرحلة تكوين الأجسام المضادة (الاستجابة المناعية).

يسهل التعرف على مثل هذه المجمعات والقضاء عليها بواسطة الخلايا المناعية. يتم احتواء التأثيرات المتبقية في شكل أجسام مضادة في حالات متعددة في الدم مدى الحياة ، مما يقلل عمليًا من خطر إعادة العدوى إلى الصفر.

أنواع مختلفة من الغلوبولين المناعي

هناك عدة أنواع من الأجسام المضادة ، ويشارك كل منها في عملية الاستجابة المناعية في مرحلة معينة. على سبيل المثال ، الغلوبولينات المناعية من الفئة M (IgM) هي الأولى التي تتشكل استجابةً لابتلاع المستضد في الجسم. لوحظت أعلى معدلات في الأيام الأولى من المرض.

أنواع الغلوبولين المناعي المستخدمة في ELISA

يقوم الجهاز المناعي بعد ذلك بإطلاق فئة G IGs (IgG) في البلازما ، والتي تكون مسؤولة عن التدمير الكامل للمستضدات وتعافي المريض. في وقت لاحق ، يستمرون في التواجد في الدم ، وبالتالي يعدون جهاز المناعة لإعادة دخول مسببات الأمراض المماثلة. هذه هي الطريقة التي يعمل بها التطعيم. مع إدخال المستضدات الضعيفة للكائنات الدقيقة المرضية ، تظهر العديد من الغلوبولين المناعي في البلازما وتبقى منتشرة.

الأشياء الرئيسية التي تهم التشخيص المختبري هي فئات Ig M و G و A. حسب مستوى تركيزها ، يمكنك تحديد مرحلة المرض ومعرفة الأمراض المعدية التي أصيب بها الشخص في حياته. على سبيل المثال ، يمكنك التحقق من وجود تاريخ من جدري الماء أو الحصبة الألمانية. لمعرفة ما إذا كان نوع معين من AT أو AH موجودًا في جسم المريض أو تركيز أي هرمون ، فلا داعي لأن يصف الطبيب اختبارات معملية متعددة - يكفي كتابة إحالة لـ ELISA.

جوهر التقنية

تعتمد منهجية البحث على عدة خيارات (مباشرة وغير مباشرة - تنافسية وغير تنافسية) للمهام ، كل منها مصمم لأغراض محددة. يتيح لك هذا النهج إجراء بحث مستهدف ، وفي أقصر وقت ممكن لتحديد سبب مرض معين. للكشف عن Ig لفئات فئات مختلفة ، يتم استخدام لوحة 96 بئر (لوحة البوليسترين) ، وتوجد البروتينات المؤتلفة الممتزة في الآبار. يلعبون دور المستضدات ، وفي المرحلة الأولية هم في المرحلة الصلبة.

عندما تدخل البئر ببلازما الدم ، تحدد المستضدات أو الأجسام المضادة الجسم فيما يتعلق بتوجهها ، وتشكل معقدًا (AG - AT). يتم إصلاح هذا التكوين بواسطة مركب إنزيم (مترافق) ، والذي يتجلى لاحقًا على أنه تلطيخ متغير للبئر. يتم إنتاج ELISA على أنظمة اختبار محددة يتم تصنيعها في مختبرات متخصصة ومجهزة بمجموعة كاملة من الكواشف.

يمكن إجراء هذا التحليل على غسالات ومقاييس طيف القراءة ، لكنها تتطلب عملاً يدويًا. بالطبع ، من الأسهل والأسرع عدة مرات أن يقوم مساعد المختبر بجميع عمليات التلاعب على الأجهزة المؤتمتة بالكامل. عند استخدامها ، يتم تحرير طاقم المختبر من قدر كبير من النشاط الرتيب - الغسل والتقطير وبقية الروتين ، ولكن لا تستطيع جميع المؤسسات الطبية تحمل تكلفة هذه المعدات باهظة الثمن.

لذلك ، تستمر العديد من المستشفيات ومؤسسات التشخيص في تنفيذ ELISA بالطريقة القديمة - على الأجهزة شبه الآلية.

إن تفسير المواد البحثية هو اختصاص متخصص في التشخيص المختبري حصريًا - فقط يمكن إخباره بالنتائج المتعلقة بتفاصيل ودقة مسار المرض. في هذه الحالة ، يجب على الطبيب بالضرورة أن يأخذ في الاعتبار إمكانية الحصول على إجابات سلبية أو إيجابية كاذبة.

نسخ المواد

يجب أن تكون نتيجة المقايسة المناعية عالية الجودة للإنزيم استنتاجًا لا لبس فيه - سواء تم العثور على الكائن الدقيق المطلوب في عينة الدم هذه أم لا. سيشير التحليل الكمي إلى مستوى التركيز ويمكن التعبير عنه بطريقتين - القيمة بالأرقام أو عدد العلامات "+".

المؤشرات المحللة

أثناء البحث ، يتم إجراء دراسة شاملة للجلوبيولينات المناعية الرئيسية المشاركة في الاستجابة المناعية ، مثل:

• IgM - الكشف عن هذه الفئة يعني تطور شكل حاد من الأمراض المعدية. يمكن أن تكون النتيجة السلبية في البحث عن IgM دليلًا على عدم وجود العامل الممرض المطلوب ، وانتقال المرض إلى مسار مزمن.
• IgA - يعد تعريف هذه الفئة في حالة عدم وجود IgM في معظم الحالات إشارة إلى شكل مزمن أو كامن لتطور مرض معد.
• IgM و IgA (حضور متزامن) - تشير النتائج الإيجابية لكلا النوعين إلى ذروة الشكل الحاد لعلم الأمراض.
• IgG - يشير وجوده إلى تحول المرض إلى شكل مزمن أو شفاء وتشكيل مناعة للعامل الذي يتم تحديده.

يحدث ظهور وتراكم فئة معينة من IG في مراحل زمنية مختلفة. لذلك ، على سبيل المثال ، يظهر IgM أولاً ، بعد حوالي 5 أيام من إصابة العامل الممرض. تبقى IGs في الدم لمدة 5-6 أسابيع ، ثم تختفي تدريجياً. في هذا الوقت ، هم متاحون لتحديد ELISA. بعد حوالي 3-4 أسابيع من ظهور المرض ، يظهر IgG ، والذي يمكن أن يبقى بعد ذلك لعدة أشهر. لكن في التحليل ليس من الممكن دائمًا اكتشافها.

تتشكل الغلوبولين المناعي A في الدم في فترة 2-4 أسابيع ، 20٪ منها في المصل ، و 80٪ في سر الأغشية المخاطية. كقاعدة عامة ، تختفي هذه الغلوبولين المناعي في غضون 2-9 أسابيع ، مما يشير إلى تدمير العامل الممرض وتعافي المريض. إذا كان ELISA لا يزال يُظهر وجود IgA ، فهذا يشير إلى انتقال العملية إلى شكل مزمن.

خيارات نتائج التحليل

اعتمادًا على البيانات التي تم الحصول عليها ، يمكن إصدار ردود ELISA على النموذج في شكل جدول مع قائمة كاملة بجميع AT و AG وإشارة إلى رد فعل إيجابي أو سلبي. في بعض المواقف ، سيتم عرض قيمة كمية - نتيجة إيجابية أو إيجابية أو ضعيفة أو سلبية بشكل حاد. يشير الخيار الثاني إلى كمية الأجسام المضادة الموجودة في عينة الدم المدروسة.

المتغيرات في تفسير مواد ELISA

بالإضافة إلى القيم المذكورة أعلاه ، في عملية ELISA ، تمت دراسة معامل كمي آخر - مؤشر AT avidity ، محسوب كنسبة مئوية. إنه يوضح المدة التي يستمر فيها المرض - أي أنه كلما ارتفع المؤشر ، زاد الوقت الذي يتطور فيه علم الأمراض.

طريقة ELISA البديلة

يعتبر اختبار الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم تشخيصًا معروفًا وشائعًا إلى حد ما. ربما لم يسمع البعض عنها من قبل ، ولكن هناك نسخة أخرى من هذه الدراسة ، حتى أقل شهرة لمجموعة واسعة من الناس ، والتي يتم فيها أخذ عينة من غير الدم. تسمى هذه التقنية باختبار الدم الخفي في البراز ، وفي كثير من الحالات تتجنب الإجراءات الإضافية المنهكة ، والتي تصاحبها أيضًا أحاسيس مزعجة.

يتيح اختبار ELISA للدم الخفي (جزيئات الهيموجلوبين) إمكانية اكتشاف نزيف في الجهاز الهضمي ، حتى وإن كان طفيفًا ، ولا يمكن العثور على علاماته في براز المريض ، كما يقولون ، بالعين المجردة. يمكن للمقايسة المناعية الإنزيمية للدم الخفي في براز الإنسان في وقت قصير أن تظهر القرحة الهضمية ، وداء السلائل ، وداء الرتج ، والأورام ، والتي لا تترافق في المراحل المبكرة مع أعراض معينة.

حتى الآن ، تم إنشاء آلاف الأنواع من أنظمة اختبار المقايسة المناعية التشخيصية ، والتي توفر القدرة على العثور على AT و AG من قائمة ضخمة من الأمراض. لذلك ، يتم استخدام هذا التحليل في جميع فروع الطب تقريبًا ، لأي فئة عمرية. ويسمح لك الإضرار المطلق باللجوء إليه أثناء الحمل ولتشخيص المرضى الضعفاء.

الغرض من فحص الدم لمرض الزهري هو الكشف عن الأجسام المضادة التي قد يصنعها الجسم لمحاربة مسببات المرض ، اللولبية الشاحبة.

قد يكون التحليل الإيجابي الكاذب لمرض الزهري في الحالات التي يحدث فيها إنتاج المستضدات لأسباب أخرى.

يُشخَّص مرض الزُّهري الإيجابي الكاذب في 10٪ من الحالات.

نظرًا لأن تحليل مرض الزهري موصوف ليس فقط عندما يكون لدى المريض شكاوى ، ولكن عند اجتياز الفحص الطبي ، قبل التوظيف ، أثناء الحمل ، قبل الاستشفاء ، فإن نسبة الإصابة لدى الأشخاص الذين لم يشكوا في وجود مثل هذا المرض مرتفعة .

لإزالة الخطأ ، تحتاج إلى التحقق من موثوقية النتائج.

تنقسم النتائج الإيجابية لمرض الزهري إلى مجموعتين: الحادة والمزمنة. تحدث نتيجة إيجابية كاذبة حادة في غضون 6 أشهر من الاختبار المنتظم.

• الاضطرابات المعدية الحادة.
• صدمة؛
• أي تطعيم قبل 1-7 أيام من أخذ العينات ؛
• تسمم حاد.

في حالة وجود أي من العوامل في الجسم ، يتم تنشيط عملية إنتاج الأجسام المضادة ، وهو ما ينعكس في نتائج الاختبارات.

إذا كانت هناك اضطرابات مزمنة ، فقد يُظهر الاختبار نتائج خاطئة لمدة 6 أشهر أو أكثر.

• اضطرابات النسيج الضام.
• أي شكل من أشكال مرض السل.
• اضطرابات الكبد المزمنة.
• فيروس نقص المناعة البشرية والتهاب الكبد B و C و D والأمراض الفيروسية الأخرى ؛
• عمليات المناعة الذاتية في الجسم.

تصبح النتيجة خاطئة بسبب الإنتاج المنتظم للأجسام المضادة غير النوعية استجابةً لأحد الاضطرابات المذكورة.

ماذا تفعل إذا تم الكشف عن مرض الزهري الكاذب

لتحديد ما إذا كان اختبار مرض الزهري قد يكون خاطئًا أم لا ، تحتاج إلى تقييم وجود عوامل أخرى في ظهور المرض واحتمالية الإصابة.

الشحوب اللولبي هو العامل المسبب للمرض ، والذي ينتقل عن طريق الاتصال الجنسي من خلال الأغشية المخاطية للأعضاء التناسلية والفم والمستقيم عند ملامسة شخص مصاب. من الممكن أيضًا نقل العدوى من الأم المصابة إلى طفلها.

فترة الحضانة التي لا يشعر المرض خلالها بالمرض هي 2-6 أسابيع. بعد ذلك ، تظهر قرح الزهري ذات القاعدة الكثيفة في مواقع اختراق العدوى المحتملة.

بعد أسبوع إلى أسبوعين ، تزداد الغدد الليمفاوية الأقرب لموقع الآفة وتصبح مؤلمة.

عند إجراء التشخيص - مرض الزهري الإيجابي الكاذب ، يجب عليك إعادة تقديم طلب إلى مؤسسة طبية. في نفس الوقت ، قم بالإبلاغ عن جميع الأدوية التي تناولتها عشية التحليل ، الأمراض المزمنة والحادة.

إذا كنت قد مارست الجنس غير المحمي مع شريك لم يتم التحقق منه أو وجدت العلامات الأولى للمرض ، يجب عليك إبلاغ طبيبك بذلك.

بعد جمع سوابق المريض وإجراء الفحص ، سيصف لك الطبيب سلسلة من الاختبارات التي ستتيح لك تحديد نتيجة دقيقة بخطأ أقل من 1٪.

أنواع اختبارات مرض الزهري

التحليلات من نوعين: non-treponemal و treponemal. يتضمن الخيار الأول استخدام نظائرها الاصطناعية من اللولبيات الباهتة ، وفي الحالة الثانية يتم استخدام اللولبيات الحقيقية.

طرق غير لولبية

تستخدم هذه التقنيات على نطاق واسع وغالبًا ما تستخدم في الفحوصات الطبية الروتينية.

الميزة هي التكلفة المنخفضة والنتائج السريعة والقدرة على إجراء البحوث على معدات المختبرات القياسية.

تحليل على RW

لتنفيذه ، يتم أخذ الدم من المريض ، في كثير من الأحيان - السائل النخاعي. يمكن أخذ الدم من الإصبع أو الوريد. يمكن أن يصل الخطأ في مثل هذه الدراسة إلى 7٪.

تفاعل دقيق لهطول الأمطار (MR أو RMP)

قد يشمل نوعين من الاختبارات لمرض الزهري RPR و VDRL. نتيجة لانهيار الخلايا تحت تأثير اللولب ، تتشكل الأجسام المضادة للدهون.

يمكن تدمير الدهون تحت تأثير الاضطرابات الأخرى ، وبالتالي فإن درجة الخطأ في إجراء VDRL و RPR هي 1-3٪.

اختبارات اللولب

لا يتم إجراء مثل هذه الدراسات في جميع العيادات وتتطلب معدات باهظة الثمن.

لذلك ، يتم استخدامها عند الاشتباه في وجود المرض وفقًا لنتائج الاختبارات غير اللولبية. خطأ هذه الدراسات أقل من 1٪.

يسمح بالكشف عن المستضدات والأجسام المضادة. لتحديد النتيجة ، يتبرع المريض بالدم من إصبع أو وريد. نتيجة لذلك ، يسمح لك الاختبار أيضًا بتحديد مرحلة المرض.

يسمح لك تحليل مرض الزهري RPGA بتحديد النسبة المئوية لترابط كرات الدم الحمراء. يمكن الحصول على نتيجة دقيقة لتفاعل التراص الدموي السلبي في اليوم الثامن والعشرين بعد الإصابة.

تحدد ELISA وجود المرض ومرحلة المرض من خلال مستوى الغلوبولين المناعي بأنواعه المختلفة.

الاختبار الأكثر دقة لاكتشاف الحمض النووي الممرض. يتم استخدامه في حالات نادرة ، حيث يتطلب كواشف معقدة.

احتمالية أخطاء اختبار RIF و RPGA و ELISA أقل من 1٪. مع PCR ، يمكن أن يكون الخطأ 0-1٪.

إيجابي لمرض الزهري أثناء الحمل

في النساء الحوامل ، يمكن ملاحظة نتيجة خاطئة في 1.5 ٪ من الحالات عند إجراء الاختبارات غير اللولبية. تحليل هذا النوع من المرض إلزامي طوال فترة الحمل.

يتم إجراء الاختبار الأول لمرض الزهري في الأسبوع 12 ، ثم بعد 30 أسبوعًا وقبل الولادة. قد تكون النتيجة خاطئة بسبب التغيرات الطبيعية في الجسم ، وعلى وجه الخصوص ، المناعة لحماية الجنين النامي.

لذلك ، أثناء الحمل ، يمكن وصف اختبار ثانٍ ، وغالبًا ما يتم وصفه حتى مع وجود نتائج سلبية من الأول ، إذا كان هناك عامل خطر.

يمكن أيضًا وصف اختبارات اللولبيات ، لأن تأثير المرض على جسم الطفل يكون أكثر ضررًا من العلاج بالمضادات الحيوية إذا تم تأكيد التشخيص.

تحليل ايجابي ضعيف

إذا كان النموذج الذي تلقيته بالنتيجة هو 1-2 زائد ، فقد يشير ذلك إلى وجود كمية صغيرة من الأجسام المضادة. يمكن أن تظهر هذه النتائج في عدة حالات:

• فترة حضانة غير مكتملة
• شكل متأخر ، بعد 2-4 سنوات ؛
• الأجسام المضادة المتبقية بعد الشفاء من المرض.

في هذه الحالة ، تكون إعادة الفحص إلزامية بعد أسبوعين.

كيف تستعد للتحليل

إذا تم إجراء اختبار الزهري الخاطئ ، فسيتم تخصيص اختبار ثانٍ لك. من أجل أن تكون نتائجها دقيقة قدر الإمكان ، من الضروري التحضير بشكل صحيح.

• قبل التحليل ، يُسمح بشرب الماء فقط ، ويحظر تناول الطعام ؛
• الإقلاع عن الكحول والتدخين لمدة ساعة واحدة في اليوم ؛
• إذا كنت تتبرع بالدم من الوريد ، فاقضي 10 دقائق في الراحة قبل ذلك ؛
• في حالة تفاقم الأمراض المعدية ، أو مرور الحيض ، أو تعرض المريضة للأشعة السينية في اليوم السابق ، لا يتم إجراء فحص دم لمرض الزهري.

يوجد أيضًا عدد من الأدوية في قائمة موانع الاستعمال ، لذلك إذا كنت تخضع للعلاج ، أخبر طبيبك عن الأدوية التي تتناولها.

إذا تأكد المرض

إذا كانت النتيجة إيجابية بعد عدة فحوصات ، بما في ذلك اختبارات اللولب ، فإن الأمر يستحق اتخاذ عدد من التدابير:

• أبلغ شريكك الجنسي بهذا ، من الضروري أن يخضع أيضًا للفحص ؛
• يجب فحص الأقارب المقربين ؛
• من الضروري إجراء العلاج الوقائي للأقارب ؛
• خلال فترة العلاج بأكملها ، من الضروري إصدار إجازة مرضية وتجنب الاتصال الوثيق بأشخاص آخرين لتجنب انتقال العدوى ؛
• في نهاية العلاج ، يتم إصدار شهادة ، يجب إرفاقها بالسجل الطبي وتقديمها أثناء فحوصات الأجسام المضادة ، حتى لا يكون لدى خبراء التشخيص أسئلة حول ظهور المستضدات في النتائج.

عند إجراء التشخيص ، تكون المعلومات سرية. لا يتم الكشف عنها عند أخذ إجازة مرضية ، في جميع الوثائق الصادرة عن المستشفى ، يتم تشفير اسم المرض ، ولا يتم إبلاغ الأشخاص الذين ليس لديهم اتصال وثيق بالمريض بالتشخيص.

بعد الخضوع للعلاج ، يكون المريض آمنًا تمامًا ، ولا يمكن أن يكون وجود مرض الزهري في الماضي سببًا للحرمان من العمل أو غيره من حقوق الإنسان.

إذا تم تأكيد التشخيص في المراحل المبكرة ، فإن احتمال الشفاء التام هو 100٪. الوذمة اللولبية الباهتة ، وهي واحدة من الحالات القليلة التي عولجت لسنوات عديدة من المرضى الذين يعانون من البنسلين ، لم تطور حماية ضدها.

لذلك ، يتم علاج المرضى بمساعدة الأدوية القائمة على مشتقات البنسلين. إذا كان هناك شكل أساسي من المرض ، فمن الضروري تشخيص وعلاج جميع الشركاء الجنسيين الذين لديهم شخص مصاب في غضون 3 أشهر.

الزهري بعد العلاج في المرحلة الأولية لا يترك مضاعفات. يمكن أن يؤدي المرض إلى الإعاقة في حالة مرور مسار مزمن أو حدوث عدوى في رحم الأم.

إذا كان مرض الزهري إيجابي

أسئلة وأجوبة عن: إيفا إيجابية لمرض الزهري

سؤال للدكتور Sukhov Yu.A.
مرحبًا. لقد قمت بالفعل بطرح سؤال على موقع Health of Ukraine بإيجاز شديد. سأكتب قصتي كاملة. يرجى تقديم النصيحة. ما الاختبارات التي يجب القيام بها؟
قبل عامين كان هناك اتصال جنسي عرضي مفتوح.
بعد 1.5 شهر ، بدأ نوع من الرعب: حمى مطولة ، كما لو كان بعض العمل يجري في الغدة الدرقية ، كان هناك شيء ما يطن ، ثم الصداع ، والتهاب الحلق ، وآلام شديدة في العظام والعضلات ، في البداية من طبيعة الطعن ثم مثل الماء المغلي يمر عبر العضلات ، غثيان ، طفح جلدي لمرة واحدة ، عدوى فيروسية حادة متكررة في الجهاز التنفسي لا تستجيب للعلاج لفترة طويلة ، ضيق في التنفس ، صعوبات في التنفس ، رائحة الفم الكريهة ، ألم عصبي ، تعرق ليلي ، ضعف شديد ، انخفاض الأداء. لقد كدت أن أصبح جثة. قبل ذلك ، كنت فتاة تتمتع بصحة جيدة ومزدهرة ، ومهنية بالرقص ، وكنت جسديًا شديد الصلابة والنشاط. عمليا لم أصاب بنزلات البرد على الإطلاق. كنت بصحة جيدة عمليا.
بعد عام واحد و 10 أشهر بعد الاتصال الجنسي غير المحمي ، اجتازت اختبار فيروس نقص المناعة البشرية في مختبرين مختلفين ، وكانت ELISA للأجسام المضادة لفيروس نقص المناعة البشرية سلبية.
التهاب الكبد B و C سلبي.
EBV PCR سلبي
CMV PCR سلبي
نوع فيروس الهربس 6 سلبي
داء المقوسات PCR سلبي
مرض الزهري سلبي
STI سلبية.

في التحليل العام للدم: ESR 30؛ الباقي طبيعي.
الكيمياء الحيوية إيجابية CRP ، والباقي طبيعي.

ماذا علي أن أفعل؟ أنا في حالة من اليأس ، لقد اختبرت بالفعل كل شيء ، لجميع الإصابات ، ولكن لم يتم العثور على السبب. هل يجب أن أجري اختبار فيروس نقص المناعة البشرية مرة أخرى؟ لقد مضى بالفعل عامان منذ الاتصال. اختفت بعض الأعراض ، لكني أشعر بسوء شديد ، ضعف شديد ، ألم عصبي مستمر ، تعرق في صدري ليلاً. لا أفهم لماذا أنا مريض ، أن هذا الشاب أصابني ، ولم أره مرة أخرى. مساعدة. تقديم المشورة ماذا تفعل؟

مرحبًا!
أبلغ من العمر 31 عامًا وحامل في الأسبوع 35. منذ شهرين ، تبرعت بالدم للعدوى باستخدام طريقة ELISA (لأنني دخلت قسم الأمراض المعدية مع تمزق ، لقد أجروا دراسة هناك) ، لم يوجهني طبيب أمراض النساء للتبرع بالدم للعدوى في المراحل المبكرة من الحمل (الأمر الذي يبدو غريباً بالنسبة لي ، بالرغم من أن مرض الزهري والإيدز أخذ ثلاث مرات أثناء الحمل ، وكلها سلبية). لقد تم إخباري الآن بالنتائج. الرجاء التعليق من فضلك. بعض المؤشرات مقلقة ، مثل فيروس الحصبة الألمانية ، الفيروس المضخم للخلايا ، الهربس HSV 1/2 ، عدوى فيروس إبشتاين بار (EBV):

الحصبة الألمانية Ig G K = 2.0
CMV Ig G K = 4.1
الهربس HSV Ig G 1 نوع K = 3.4 ، نوعان سلبي.
Epstein-Barr VCA K = 4.7 NA-
الكلاميديا ​​والميكوبلازما - نيج.

اتجاهي هو ما يلي:
معامل الإيجابية K = الكثافة الضوئية للعينة. إذا كانت K أقل من 0.9 - تكون النتيجة سلبية ، إذا كانت K من 0.9 إلى 1.1 - مشكوك فيها ، إذا كانت K أكبر من 1.1 - موجبة.
قد تكون قيم Ig G و EBV و NA حتى 55 c.u./ml طبيعية ، وتكون النتيجة أعلى من هذه القيمة موجبة.
الرجاء التعليق! شكرا لك على الاهتمام!

فك رموز نتائج تحليل مرض الزهري

مرض الزهري هو مرض خطير شديد العدوى. للكشف عن المرض ، يتم استخدام اختبارات الدم (الوريدية والشعيرية) ، وفي بعض الحالات ، يتم أيضًا فحص السائل النخاعي. يقوم الطبيب المعالج بفك تشفير تحليل مرض الزهري. يمكن للمريض أن يرى ويفهم بشكل مستقل بعض التعيينات في التحليل ، ولكن الاستنتاج النهائي حول وجود أو عدم وجود المرض يجب أن يتم بواسطة طبيب مؤهل. من الممكن إجراء اختبار إيجابي أو سلبي كاذب لمرض الزهري.

متى ترى الطبيب

لفترة طويلة ، كان مرض الزهري مرضًا خطيرًا لا يمكن علاجه. يمتلك الطب الحديث كل الوسائل لعلاج المرض تمامًا. كلما أسرعنا في تشخيص المرض واكتشافه ، كان العلاج أسهل. تحدث الإصابة بمرض الزهري ليس فقط من خلال الاتصال الجنسي ، ولكن أيضًا عند استخدام نفس الأدوات المنزلية مع المريض (فرشاة أسنان ، منشفة ، أدوات المطبخ ، إلخ). لذلك ، يوصى بإجراء فحص دم دوري سريع لمرض الزهري لكل شخص.

عند الإصابة ، هناك زيادة في الغدد الليمفاوية في الفخذ ، وظهور تقرحات وطفح جلدي في الفم والأعضاء التناسلية. إذا تم الكشف عن الأعراض الأولى للمرض ، يجب عليك استشارة الطبيب على الفور. يمكن أن يكون الفحص مجهولاً بإحالة من طبيب أمراض النساء أو أخصائي المسالك البولية أو طبيب المستقيم أو طبيب الأمراض التناسلية أو الممارس العام. بعد اجتياز الاختبار ، يجب عليك الاتصال بطبيبك للحصول على نسخة من تحليل مرض الزهري.

الغرض من المسح

في كثير من الأحيان أثناء الفحوصات الجسدية ، قد يصف الطبيب العديد من الاختبارات المعملية ، بما في ذلك اختبار الزهري. مثل هذا الاتجاه لا ينبغي أن يؤخذ على أنه اشتباه في وجود مرض. في العديد من مجالات الحياة العامة ، يلزم تقديم شهادة عدم وجود المرض.

• خطة العائلة
• التسجيل في النزل
• القبول في مكان العمل للعاملين الصحيين وموظفي تقديم الطعام وما إلى ذلك.
• التبرع بالأعضاء أو الدم
• المرضى النشطين جنسيا
• وجود أعراض سريرية
• نهاية علاج مرض الزهري

كدراسة أولية ، كقاعدة عامة ، يتم وصف أحد الاختبارات غير المحددة (غير اللولبية). موثوقية هذه الاختبارات منخفضة نسبيًا وقد يحصل المريض على نتيجة إيجابية خاطئة. في هذه الحالة ، سيتم جدولة دراسة ثانية باستخدام اختبار محدد (اللولبيات). يجب أن ينظر الطبيب المعالج في الاختبار الإيجابي أو السلبي.

استعداد للامتحان

قبل التبرع بالدم من إصبع أو وريد لإجراء اختبار معمل ، يجب اتباع بعض القواعد حتى يكون التحليل موثوقًا قدر الإمكان. يجب عدم تناول أي طعام أو شاي أو قهوة قبل 8-12 ساعة من أخذ عينات الدم. خلال اليوم السابق لزيارة المختبر ، لا ينصح بتناول الأطعمة الحارة أو الدهنية أو المقلية أو المالحة أو المدخنة. يمكن أن تؤدي المضادات الحيوية والأدوية الأخرى أيضًا إلى تحريف الاختبار. يجب إبلاغ الطبيب المعالج بجميع المواد التي يتم تناولها. قد يوصيك بالامتناع عن إجراء الاختبار لمدة أسبوع أو أكثر. يمكن أخذ عينة الدم في مختبر خاص ، أو عيادة محلية ، أو يمكن استدعاء عامل صحي إلى منزلك.

في أي حال ، يتم استخدام معدات معقمة وقفازات يمكن التخلص منها.

يمكن إجراء التحليل السريع لمرض الزهري بشكل مستقل في المنزل. تقدم الصيدليات اختبارات خاصة مع تعليمات مفصلة باللغة الروسية. نتيجة الاختبار معروفة في غضون 10 دقائق. خط أحمر واحد على المؤشر سلبي لمرض الزهري ، وخطان موجبان. موثوقية هذه الاختبارات ليست عالية بما يكفي ولا يمكن أن تكون بمثابة تأكيد للتشخيص.

كيف تفهم نتيجة الفحص غير المحدد

غالبًا ما يشعر المرضى بعدم الأمان بعد الاختبار. إن التبرع بالدم وعدم القدرة على فك رموز اختبارات مرض الزهري بمفردك ، بالطبع ، أمر غير سار. يتطلب فك رموز اختبار الدم تثقيفًا طبيًا ومؤهلات مناسبة من الطبيب ، بالإضافة إلى مراعاة جميع العوامل التي تؤثر على النتيجة. هل يمكن للمريض قراءة نتائج اختبار الزهري بشكل مستقل؟ بعد الاطلاع على تقرير المختبر ، يمكن للمرء أن يستخلص استنتاجات بسيطة ، ولكن يجب على الطبيب تأكيد أو دحض التشخيص.

لا يوصف اختبار التولويدين الأحمر للتشخيص ، ولكن لاختبار فعالية علاج المرض. توضح الدراسة مدى تغير كمية الأجسام المضادة مقارنة بالتحليل السابق. إذا انخفض الرقم ، فإن العلاج يكون ناجحًا. يتم إجراء التحليل أثناء العلاج عدة مرات حسب إرشادات الطبيب. بعد 3 أشهر من الانتهاء من الإجراءات ، يتم إجراء اختبار التحكم.

غالبًا ما يتم وصف الاختبارات غير اللولبية (RSKk و RMP و RPR) أثناء الفحوصات الطبية وكتشخيص سريع. هناك عدة خيارات للتعيينات نتيجة البحث. فك رموزها بسيط للغاية:

• نتيجة "-" سلبية
• "+" ، "1+") أو "++" ، "2+" تحليل إيجابي ضعيف
• اختبار إيجابي "+++" أو "3+" أو "++++" أو "4+" لمرض الزهري

يمكن أن تكون أي من النتائج إيجابية كاذبة أو سلبية خاطئة لمرض الزهري. في حالة عدم وجود أعراض سريرية واتصالات جنسية عرضية ، يمكن للطبيب قبول النتيجة السلبية على أنها صحيحة. عادة ما يتم التحقق من رد الفعل الإيجابي من خلال اختبار اللولب.

نتائج دراسة محددة

تعتبر اختبارات اللولبيات معقدة ومكلفة مقارنة بالاختبارات غير اللولبية. هناك عدة أنواع من الاختبارات المستخدمة لتشخيص مرض الزهري: RSKt و RIBT و RIF و RPHA و ELISA والتخثر المناعي). واحدة من الدراسات المحددة الدقيقة هي تحليل RIBT. يمكن للمختبر تقديم نتيجة الاختبار كنسبة مئوية.

• 20٪ يتوافق مع نتيجة سلبية ("-")
• 21-30٪ تحليل مشكوك فيه ("++" أو "2+")
• 31-50٪ موجبة بشكل ضعيف ("+++"، "3+")
• 51٪ أو أكثر يتوافق مع نتيجة إيجابية

يعتبر التجلط المناعي من الأساليب الحديثة والدقيقة لتشخيص المرض. يوصف عادة من أجل تأكيد أو دحض نتائج الدراسة الأولى. يتم تمييز الكشف في الدم عن الأجسام المضادة مثل IgG و IgM بالخطوط. يتم تفسير نتائج الاختبار بالمقارنة مع الاختبار غير اللولبي.

إذا كانت كلتا النتيجتين سلبيتين ، فهذا يعني أن المريض يتمتع بصحة جيدة أو أن العدوى في الأسبوع الأول من التطور. تشير كلتا النتيجتين الإيجابيتين إلى وجود مرض الزهري أو مرض آخر من أمراض المناعة الذاتية.

يشير اختبار الطعم المناعي الإيجابي بعد الاختبار السلبي غير اللولبي إلى وجود مرض الزهري أو أحد أمراض المناعة الذاتية أو السرطان.

قد يكون هناك رد فعل إيجابي عند النساء الحوامل. يشير اختبار الطعم المناعي السلبي بعد الاختبار الإيجابي غير اللولبي إلى عدم وجود مرض.

موثوقية التحليلات

هناك دائمًا احتمال أن تكون نتيجة الاختبار خاطئة. عند فك تشفير اختبارات مرض الزهري ، يجب إيلاء اهتمام خاص للعوامل الخارجية التي لا تعتمد على المريض. يمكن أيضًا أن يخطئ مساعد المختبر الذي يجري البحث أو المريض عندما لم يستعد بشكل صحيح لأخذ عينات الدم أو لم يزود الطبيب بمعلومات صحيحة عن نفسه. النتيجة الإيجابية الخاطئة ممكنة تحت تأثير العوامل التالية:

• مرض السكري من أي نوع
• وجود أدوية في الدم
• تسمم الكحول
• الأمراض المعدية (الحصبة ، التهاب الكبد ، كريات الدم البيضاء ، إلخ)
• الأورام الحميدة أو الخبيثة
• أمراض القلب
• أخذ مضادات حيوية أو تطعيم حديث
• أمراض المناعة الذاتية (الذئبة الحمامية والتهاب المفاصل الروماتويدي وما إلى ذلك)
• حمل
• تناول الأطعمة الدهنية أو الحارة أو المالحة خلال اليوم السابق لأخذ عينات الدم

اعتمادًا على مرحلة المرض ، قد لا تكتشف بعض الاختبارات المرض. لذلك ، يتم تنفيذ تفاعل Wasserman (RSKt و RSKk) بعد 3-4 أسابيع فقط من الإصابة المحتملة باحتمال 100 ٪ ، في وجود مرض الزهري الثالثي ، ستكون الموثوقية 75 ٪ فقط. لتشخيص المراحل المبكرة من المرض ، يُنصح باستخدام اختبار ELISA. المقايسة عبارة عن مقايسة مناعية إنزيمية ذات حساسية عالية للأجسام المضادة. موثوقية النتيجة قريبة من 100٪ ، يتم استبعاد النتيجة الإيجابية الخاطئة في وجود أمراض أخرى.

نتائج الاختبارات السلبية للأمراض المنقولة جنسياً تعني أن الشخص يتمتع بصحة جيدة. سيؤدي التحليل المشكوك فيه لمرض الزهري إلى فحص ثانٍ. إذا كانت هناك عوامل يمكن أن تؤثر على النتيجة النهائية ، مثل وجود أمراض أخرى ، فسيقوم الطبيب بتغيير معايير الاختبار. نتيجة الاختبار الإيجابية لمرض الزهري ليست جملة أو سببًا للذعر. بمساعدة الأدوية ، يمكن علاج المرض تمامًا. ومع ذلك ، يجب أن نتذكر أن الأمراض في مرحلة مبكرة يتم علاجها بشكل أفضل.

إليسا لمرض الزهري: تقنية التحليل والتفسير وأسباب النتائج الإيجابية الكاذبة

تشمل قائمة التدابير التشخيصية القياسية المستخدمة للأمراض المعدية المقايسة المناعية الإنزيمية. إذا كانت ELISA لمرض الزهري إيجابية ، فلا داعي للذعر على الفور.

دعونا نفكر بمزيد من التفصيل في ميزات تقنية البحث هذه ومبادئ فك رموز النتائج التي تم الحصول عليها في فئات مختلفة من المرضى.

جوهر الدراسة

إن المقايسة المناعية للإنزيم هي إحدى الطرق الأكثر شيوعًا لتشخيص الأمراض المعدية. إنه ينتمي إلى فئة اختبارات اللولب ، أي أنه يمكن استخدامه لتحديد وجود العامل المسبب لمرض الزهري في جسم المريض - الوذمة الشاحبة.

بواسطة ELISA ، يتم الكشف عن مرض الزهري بسبب اكتشاف الأجسام المضادة للالتهاب اللولبي. يتم احتواؤها في دم المريض ، ويعتمد نوعها ومقدارها على مرحلة المرض وشكله ، مما يتيح لك الحصول على معلومات مهمة حول الحالة الحالية لصحة الإنسان.

المميزات والعيوب

غالبًا ما يتم وصف ELISA لمرض الزهري المشتبه به أو الأمراض المعدية الأخرى. هذا يرجع إلى حقيقة أن التحليل يسمح لك بتحديد نوع ومرحلة المرض بدقة ، وتظل موثوقيته على مستوى عالٍ - احتمال الخطأ بناءً على نتائج دراسات متعددة هو 1 ٪ فقط ، ELISA الأساسي تبلغ دقته حوالي 90٪.

يتيح لنا استخدام الكواشف عالية الجودة والمعدات الحديثة زيادة دقة المؤشرات.

بشكل عام ، مزايا الطريقة هي:

1. دقة عالية للنتيجة. احتمال تلقي بيانات خاطئة ضئيل للغاية.
2. التقليل من عامل التأثير البشري.المعدات الحديثة لإجراء ELISA تستبعد التأثير البشري على نتائج الدراسة بسبب أتمتة العملية.
3. الكشف عن الأجسام المضادة المحددة. من المستحيل الخلط بين مستضدات من نوع ما مع مستضدات أخرى ، لذلك يظهر التحليل نتيجة دقيقة لتشخيص محدد.
4. إصلاح أدنى انحرافات عن القاعدة. حتى أصغر تركيز للعوامل المرضية لن يمر مرور الكرام.

لا تنسى نقاط الضعف في هذه الطريقة. ELISA لها العيوب التالية:

1. غالي السعر. ترجع التكلفة العالية إلى العديد من العوامل ، على وجه الخصوص ، الحاجة إلى معدات جيدة وكواشف عالية الجودة ومتخصصين بمستوى كافٍ من التدريب.
2. الحاجة إلى تشخيص أولي. تحتاج إلى معرفة المستضدات التي يجب البحث عنها ، لأنه بدون بيانات إضافية سيكون من المستحيل إجراء تشخيص دقيق.
3. احتمال وجود نتيجة إيجابية خاطئة. يمكن لبعض حالات الجسم وعوامل أخرى تشويه البيانات النهائية.

مؤشرات لتنفيذ

قد يصف الطبيب مقايسة مناعية إنزيمية ليس فقط لتشخيص مرض الزهري ، ولكن أيضًا لتشخيص عدد من الأمراض المعدية الأخرى.

إذا أخذنا في الاعتبار الموقف بشكل مباشر مع الإصابة بالتهاب اللولبية ، فقد يكون سبب الفحص:

• ظهور الأعراض الخارجية للمرض (القروح ، الطفح الجلدي الزهري ، الصمغ ، إلخ) ؛
• انخفاض كبير في المناعة.
• تحديد أو الاشتباه في مرض الزهري في الشريك الجنسي والأقارب وأفراد الأسرة ؛
• رد فعل إيجابي أثناء الاختبارات الأخرى ؛
• تحديد الأمراض الأخرى التي قد تترافق مع مرض الزهري ؛
• رغبة الشخص الشخصية في الفحص.

طرق التنفيذ

يمكن إجراء ELISA بطرق مختلفة. في كل حالة ، يتم تحديد الخيار الأنسب.

بادئ ذي بدء ، هناك تقسيم للطرق إلى:

1. نوعي. الكشف عن وجود عدوى أو فيروس في جسم المريض.
2. كمي. يحدد تركيز الأجسام المضادة لعامل ممرض في جسم الإنسان ، مما يشير إلى مرحلة وشدة تطور المرض.

يوجد أيضًا تصنيف لطرق إجراء ELISA وفقًا لمبدأ إعادة إنتاج التفاعل الضروري.

هناك 3 خيارات:

1. مستقيم. يتم حقن الأجسام المضادة الموصوفة في عينات الدم المقدمة.
2. غير مباشر مع المستضدات.يتم وضع المستضدات الممتزّة بشكل مبدئي في خلايا صفيحة بوليسترين مخصصة لـ ELISA. ثم تضاف إليها الأجسام المضادة للفيروسات ، مما يؤدي إلى تكوين معقدات مناعية ضرورية لمزيد من التقييم للنتائج.
3. غير مباشر مع الأجسام المضادة.غالبًا ما تستخدم هذه الطريقة للأمراض التي تنتقل عن طريق الاتصال الجنسي. يتضمن الامتصاص الأولي للأجسام المضادة ، وعندها فقط تضاف المستضدات إلى اللوحة.

قواعد أخذ العينات المادية

لتقليل مخاطر الحصول على نتائج خاطئة ، من الضروري التبرع بالدم لتحليلها بشكل صحيح.

قبل الخضوع لـ ELISA ، يجب مراعاة بعض القيود:

• تجنب الإجهاد البدني والعاطفي الشديد ؛
• التوقف عن التدخين وشرب الكحول قبل 1-3 أيام على الأقل ؛
• لبضعة أيام تحتاج إلى التحول إلى التغذية السليمة ؛
• من المستحسن أن تتحكم النساء في مرحلة الدورة الشهرية ، لأن الهرمونات يمكن أن تشوه النتائج ؛
• يجب أن تكون الوجبة الأخيرة قبل 8-10 ساعات من التبرع بالدم ؛
• لمدة 10 أيام ، يتم استبعاد الأدوية التي قد تؤثر على نتائج الدراسة.

بالنسبة إلى ELISA ، يتم أخذ الدم الوريدي من الوريد المرفقي ، ويجب أن يؤخذ في الصباح على معدة فارغة. بشكل عام ، تنطبق القواعد القياسية للتحضير لأخذ عينات الدم الوريدي. اعتمادًا على وجود المرض الذي يتم اختباره ، قد يتم تقديم متطلبات إضافية للتحضير الأولي للمريض.

المنهجية

تعليمات إجراء ELISA بسيطة للغاية:

1. يأخذ المريض الدم من الوريد.
2. يتم تحضير المواد المأخوذة وتقسيمها إلى عينات على لوح شبكي دقيق خاص.
3. يتم خلط المستضدات مع الأجسام المضادة وفقًا للطريقة المختارة.
4. يتم تقييم رد الفعل. تتم مقارنة العينات مع عينات المراقبة ، ويتم إجراء التقييم النوعي والكمي للنتائج.
5. يتم إدخال البيانات في جدول خاص مع تطبيق المؤشرات الكمية (إجمالي الأجسام المضادة).
6. الطبيب المعالج يفك شفرات النتائج. إذا لزم الأمر ، يتم وصف العلاج المناسب.

بعد الفحص ، يتم إعطاء المريض وثيقة بالنتائج. يحتوي على شكل جدول مع التسميات المقابلة لكل نوع من أنواع الغلوبولين المناعي عند التقاطع مع أسماء الأمراض المعدية.

فك التشفير

لن يتمكن سوى المتخصص من فك شفرة نتائج التحليلات بشكل صحيح. من الصعب أن تعرف بنفسك ، على سبيل المثال ، ما تعنيه نتيجة ELISA k = 1 4. يمكن أن يحدث مرض الزهري أيضًا بأشكال مختلفة ، مما يؤثر أيضًا على البيانات النهائية.

تشير النتائج إلى 3 أنواع من الغلوبولين المناعي:

1. IgM. السماح بتحديد فترة الإصابة بمرض الزهري. تشير النتيجة الإيجابية إلى تفاقم المرض. قد يشير غيابهم إلى مغفرة الأمراض المزمنة أو شكل كامن من المرض.
2. إيغا.يشير إلى مرض مضى عليه أكثر من شهر منذ الإصابة. إنها أيضًا علامة على المرحلة الحادة من المرض ، سواء مع الأمراض العادية أو المزمنة المتقدمة.
3. مفتش. إنها علامة على فترة الذروة للمرض ، أي تفاقمه. مع مرض الزهري ، يظهر رد فعل إيجابي بعد العلاج ببعض الوقت. في بعض أنواع الأمراض ، يمكن أن يكون علامة على تطور المناعة.

ينتج الجسم هذه المواد في تسلسل معين ، وهي علامة إضافية على المرض. من خلال الاختبارات النوعية ، يتم إثبات وجود الغلوبولين المناعي فقط في الدم من كل نوع.

يتم التعبير عن هذا في تغيير لون المواد المشاركة في التحليل. المؤشرات الكمية هي مساعدة ، فهي تصف الموقف بشكل أكثر دقة. تشير نسبة المستضدات والأجسام المضادة إلى شدة المرض وشدة استجابة الجسم.

ماذا أفعل

إذا كان المريض مصابًا بالفعل بمرض الزهري ، يتم دائمًا اكتشاف ELISA إيجابيًا ، فمن المستحيل عدم ملاحظة وجود اللولبيات في مثل هذه الدراسة. لا تيأس ، المرض يستجيب بشكل جيد للعلاج ، خاصة في المراحل الأولية.

ماذا تفعل إذا كانت نتيجة الاختبار إيجابية:

• الخضوع لفحوصات إضافية حسب إرشادات الطبيب ؛
• خذ دورة من العلاج بالمضادات الحيوية وفقًا للمخطط المختار ؛
• التركيز على تقوية جهاز المناعة.
• إبلاغ شريكك الجنسي بالمرض ؛
• في المستقبل ، يجب الخضوع للتشخيص الوقائي بانتظام حتى يتم إلغاء التسجيل في المستوصف (بعد 5 سنوات في حالة عدم وجود نتائج اختبار إيجابية).

لا داعي لتأجيل الإجازة المرضية والخوف من إعلان النتائج. يتم تشفير التشخيص ويبقى سريًا ، فقط في حالة وجود تهديد بالعدوى لأشخاص آخرين ، من الضروري إبلاغ الأقارب والشريك الجنسي بالمشكلة حتى يخضعوا للفحوصات المطلوبة.

النتيجة الإيجابية الكاذبة وأسبابها

في بعض الأحيان يتم تسجيل نتيجة الاختبارات الأخرى وتكون ELISA إيجابية كاذبة لمرض الزهري. هذا هو السبب في أنه يوصى بتنفيذ 2-3 طرق مساعدة وتكرار الإنزيم المناعي بعد فترة.

حالات عدم الدقة هذه نادرة ، فهي ناتجة بشكل أساسي عن هذه العوامل:

• حمل؛
• الأمراض المزمنة؛
• التطعيم الأخير
• إصابة.

تنقسم النتائج الإيجابية الكاذبة إلى حادة ومزمنة ، حسب طبيعة العامل الذي أثارها.

تفسير كامل لاختبارات الزهري

اختبارات مرض الزهري: أنواع الاختبارات ، تفسير النتائج ، أسباب نتائج الفحص الإيجابية الكاذبة والسلبية الكاذبة.

مرض الزهري هو مرض ينتقل عن طريق الاتصال الجنسي تسببه بكتيريا اللولبية الشاحبة (اللولبية الشاحبة). اقرأ المزيد عن طرق انتقال مرض الزهري وأعراضه والمضاعفات المحتملة في مقالة كل شيء عن مرض الزهري. الأعراض والعلاج.

يسمح الاكتشاف في الوقت المناسب لمرض الزهري (باستخدام اختبارات خاصة) للأطباء ببدء العلاج في الوقت المحدد ومنع تطور المضاعفات الخطيرة لهذا المرض.

يساعد اختبار مرض الزهري أثناء الحمل في منع ولادة الأطفال المصابين بمرض الزهري الخلقي. يتم وصف تفاصيل اختبارات مرض الزهري أثناء الحمل في المقالة كل شيء عن تشخيص مرض الزهري وعلاجه أثناء الحمل.

لماذا تم فحصي لمرض الزهري؟

في الغالبية العظمى من الحالات ، لا تتاح للأطباء الفرصة للحصول على بيانات دقيقة عن الحياة الجنسية للمرضى (بعض الناس يخفون تفاصيل حياتهم الجنسية أو يقللون من مخاطر الإصابة بالأمراض المنقولة جنسياً). في هذا الصدد ، من أجل حماية الناس من العواقب المحتملة لعدم انتباههم أو نقص المعرفة الطبية ، يصف الأطباء في بعض الحالات ما يسمى باختبارات فحص مرض الزهري (أي الاختبارات التي يجريها عدد كبير من الناس).

قد يطلب طبيبك إجراء اختبارات لمرض الزهري حتى لو لم تكن لديك أعراض المرض وأنت متأكد من أنك لا يمكن أن تصاب به.

ترجع الحاجة إلى هذه الاختبارات إلى حقيقة أن مرض الزهري ينتقل أحيانًا بالوسائل المنزلية (وليس من خلال الاتصال الجنسي) ويستمر في شكل كامن (أي بدون أعراض).

كقاعدة عامة ، يتم تحديد فحص الفحص في الحالات التالية:

1. عند التقدم لوظيفة (عاملون صحيون ، تموين ، عسكريون ، إلخ.)
2. عند التسجيل للحمل.
3. أثناء الدخول إلى المستشفى استعدادًا للعمليات.
4. المتبرعين بالدم.
5. الأشخاص المسجونون في أماكن الاحتجاز.

قد يطلب طبيبك أيضًا اختبارات لمرض الزهري:

1. عندما يتم الكشف عن أعراض المرض (عادة ما يكون هذا طفح جلدي في منطقة الأعضاء التناسلية).
2. عند استلام نتائج ايجابية لاختبارات التحري عن مرض الزهري.
3. إذا كنت قد مارست الجنس مع شخص تم تشخيص إصابته بمرض الزهري.
4. الأطفال حديثو الولادة الذين أصيبت أمهاتهم بمرض الزهري.

بالإضافة إلى ذلك ، يتم إجراء اختبارات مرض الزهري بشكل دوري أثناء العلاج (للتأكد من فعالية العلاج) وحتى بعد انتهاء دورة العلاج لمراقبة العلاج.

ما الاختبارات المستخدمة لتشخيص مرض الزهري؟

يتم تشخيص وعلاج مرض الزهري من قبل طبيب الأمراض الجلدية والتناسلية. في تشخيص المرض يمكن استخدام الاختبارات التالية:

تكمنيتم إجراء الجلد والأعضاء التناسلية الخارجية والداخلية من أجل تحديد الأعراض الرئيسية لمرض الزهري: القرحة الصلبة ، وتضخم الغدد الليمفاوية ، والطفح الجلدي ، وما إلى ذلك (انظر أعراض مرض الزهري)

إلى العثور على اللولبية الشاحبةيقوم الأطباء بفحص المسحات (أو الكشط) المأخوذة من القرحة والعقد الليمفاوية والسائل الأمنيوسي عند النساء الحوامل وما إلى ذلك تحت المجهر ، ولا يتم فحص الدم تحت المجهر.

هام: إذا تم العثور على اللولبية الشاحبة في تحليلاتك تحت المجهر ، فهذا يعني أنك مصاب بالزهري بالتأكيد. ولكن إذا أظهرت الاختبارات أن العامل المسبب لمرض الزهري لم يتم اكتشافه ، فلا يمكن التأكد تمامًا من عدم وجود مرض الزهري. للتأكد من أنك لست مريضًا ، يجب عليك إجراء اختبارات إضافية ، كما هو موضح أدناه.

PCR (تفاعل البلمرة المتسلسل)- هذه طريقة معقدة ومكلفة لتشخيص مرض الزهري ، والتي تسمح لك باكتشاف الحمض النووي للورم اللولبي الشاحب في الدم أو مواد الاختبار الأخرى (السائل الأمنيوسي ، السائل النخاعي). إذا أعطى اختبار تفاعل البوليميراز المتسلسل نتيجة سلبية ، فعلى الأرجح أنك لا تعاني من مرض الزهري. ومع ذلك ، عندما تحصل على نتيجة إيجابية (أي إذا وجد تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) الحمض النووي للولبية الشاحبة في الدم) ، فلا يوجد ضمان بنسبة 100٪ أنك مريض. ويرجع ذلك إلى حقيقة أن تفاعل البوليميراز المتسلسل يعطي أحيانًا نتائج إيجابية خاطئة (يعطي نتيجة إيجابية في غياب المرض). لذلك ، إذا أعطى تفاعل البوليميراز المتسلسل نتيجة إيجابية ، فمن المستحسن الخضوع بالإضافة إلى ذلك إلى طرق أخرى لفحص مرض الزهري (على سبيل المثال ، اختبار التألق المناعي (RIF) واختبار التراص الدموي السلبي (RPHA)).

ما هو الاختبار المصلي لمرض الزهري؟

التحليل المصلي هو الكشف في الدم عن البروتينات الخاصة (الأجسام المضادة) التي يتم إنتاجها في جسم الإنسان استجابةً للعدوى. على عكس طرق التشخيص السابقة ، لا تكشف الاختبارات المصلية عن اللولبيات الشاحبة نفسها ، بل تكتشف "آثارها" فقط في الجسم.

إذا تم العثور على أجسام مضادة للالتهاب اللولبي الشاحب في دمك ، فهذا يشير إلى أنك مصاب بمرض الزهري في الوقت الحالي أو أنك قد أصبت به من قبل.

ما الاختبارات التي تشير إلى أن الشخص مصاب بمرض الزهري؟

تنقسم الاختبارات المصلية لمرض الزهري إلى مجموعتين كبيرتين: الاختبارات غير النوعية والاختبارات النوعية. الفرق الرئيسي بين هذه الاختبارات هو أن الاختبارات غير النوعية تظهر نتيجة إيجابية فقط إذا كان الشخص مصابًا بمرض الزهري في الوقت الحالي وأصبح سلبيًا بعد العلاج ، بينما تظل الاختبارات المحددة إيجابية حتى بعد الشفاء من المرض.

وبعبارة أخرى ، فإن النتيجة السلبية للاختبار غير المحدد هي ضمان أنك بصحة جيدة.

ما هي اختبارات مرض الزهري غير النوعية (غير اللولبية)؟

تشمل التحليلات غير المحددة التأثير الدقيق لهطول الأمطار (MR) وتفاعل واسرمان (PB ، RW). تستخدم هذه الاختبارات للكشف عن مرض الزهري. بعد علاج مرض الزهري ، تصبح هذه الاختبارات سلبية في 90٪ من الأشخاص.

كيف تعمل هذه الاختبارات:نتيجة للنشاط الحيوي للشحوب اللولبي (مع مرض الزهري) ، تموت الخلايا في الجسم. استجابة لتدمير الخلايا ، ينتج الجهاز المناعي بروتينات خاصة (أجسام مضادة أو غلوبولين مناعي). تهدف الاختبارات غير النوعية إلى تحديد هذه الأجسام المضادة ، وكذلك حساب تركيزها (تحديد عيار الجسم المضاد).

تفاعل دقيق للهطول (MR)ومثيلاتها في بعض الدول: اختبار ريجين سريع (RPR ، ريجينات بلازما سريعة)و اختبار VDRL (معمل أبحاث الأمراض التناسلية)هي الاختبارات غير اللولبية الموصوفة للكشف عن مرض الزهري.

ما الذي يتم فحصه:

عادة 4-5 أسابيع بعد الإصابة.

إذا أظهر التحليل نتيجة إيجابية ، فهناك احتمال أن تكون مصابًا بمرض الزهري. نظرًا لأن هذا الاختبار قد يعطي نتائج إيجابية عن طريق الخطأ ، فمن المستحسن الخضوع لفحص إضافي باستخدام الاختبارات المحددة الموضحة أدناه. تشير النتيجة السلبية إلى عدم وجود مرض الزهري ، أو مرحلة مبكرة من المرض (قبل ظهور الأجسام المضادة في الدم).

إذا تم العثور على أجسام مضادة في الدم في عيار من 1: 2 إلى 1: 320 وما فوق ، فهذا يعني أنك مصاب بمرض الزهري. في مرض الزهري المتأخر ، قد يكون عيار الجسم المضاد منخفضًا (والذي يقدر على أنه نتيجة مشكوك فيها).

تحدث نتائج الرنين المغناطيسي الإيجابية الكاذبة في حوالي 2-5٪ من الحالات ، وإليك أسبابها المحتملة:

1. أمراض النسيج الضام الجهازية (الذئبة الحمامية الجهازية ، تصلب الجلد ، التهاب المفاصل الروماتويدي ، التهاب الجلد والعضلات ، التهاب الأوعية الدموية ، إلخ)
2. الأمراض المعدية: التهاب الكبد الفيروسي ، كريات الدم البيضاء المعدية ، السل ، بعض الالتهابات المعوية ، إلخ.
3. أمراض القلب الالتهابية (التهاب الشغاف والتهاب عضلة القلب).
4. داء السكري.
5. حمل.
6. التطعيم الأخير (التطعيم).
7. استخدام الكحول والمخدرات وما إلى ذلك.
8. الزهري السابق والمعالج (حوالي 10٪ من الأشخاص الذين عولجوا قد يكون لديهم اختبار MR إيجابي مدى الحياة).

ما يمكن أن تكون أسباب النتائج السلبية الخاطئة:قد يُظهر الاختبار نتيجة سلبية بشكل خاطئ إذا كان الدم يحتوي على الكثير من الأجسام المضادة ، أو إذا تم إجراء الاختبار في مرحلة مبكرة من المرض قبل ظهور الأجسام المضادة ، أو مع مرض الزهري المتأخر ، مع بقاء القليل من الأجسام المضادة في الدم.

تفاعل واسرمان (РВ ، RW)هو اختبار غير متعلق باللولبيات ويستخدم للكشف عن مرض الزهري في بلدان رابطة الدول المستقلة.

ما الذي يتم فحصه:الدم (من الإصبع أو من الوريد) ، السائل النخاعي.

كم من الوقت بعد الإصابة يصبح الاختبار إيجابيًا؟عادة 6-8 أسابيع بعد الإصابة.

كيفية تقييم نتائج التحليل:"-" هو رد فعل سلبي ، "+" أو "++" هو رد فعل إيجابي ضعيف ، "+++" هو رد فعل إيجابي ، "++++" هو رد فعل إيجابي حاد. إذا أظهر تفاعل واسرمان علامة زائد واحدة على الأقل ، فأنت بحاجة إلى إجراء اختبارات إضافية لمرض الزهري. رد الفعل السلبي ليس ضمانًا لصحتك.

كيفية تقييم عيار الجسم المضاد الذي تم الحصول عليه:عيار الأجسام المضادة من 1: 2 إلى 1: 800 يشير إلى وجود مرض الزهري.

ما يمكن أن تكون أسباب النتائج الإيجابية الخاطئة:يمكن أن يعطي رد فعل Wassermann نتيجة إيجابية بشكل خاطئ لنفس الأسباب مثل التأثير الدقيق لهطول الأمطار (MR) ، وأيضًا إذا شربت الكحول أو تناولت الأطعمة الدهنية قبل التبرع بالدم لتحليلها.

نظرًا للعدد الكبير من النتائج الخاطئة ، يتم استخدام تفاعل واسرمان (РВ ، RW) بشكل أقل ويتم استبداله بطرق تشخيص أخرى أكثر موثوقية.

تعتبر الاختبارات غير النوعية (التفاعل الدقيق لهطول الأمطار (MR) وتفاعل واسرمان (PB ، RW)) طرقًا جيدة لتشخيص مرض الزهري. من المحتمل جدًا أن تشير نتيجة الاختبار السلبية إلى أنك بصحة جيدة. ولكن عند تلقي نتائج إيجابية لهذه الاختبارات ، من الضروري إجراء فحص إضافي بمساعدة اختبارات (اللولبيات) المحددة.

ما هي اختبارات مرض الزهري النوعية (اللولبيات)؟

تشمل اختبارات اللولبيات الاختبارات التالية: تفاعل التألق المناعي (RIF) ، والتخثر المناعي ، وتفاعل التراص السلبي (RPGA) ، وتفاعل تثبيط اللولبية الشاحبة (RIBT) ، والمقايسة المناعية الإنزيمية (ELISA).

توصف اختبارات محددة للأشخاص الذين لديهم نتائج إيجابية للتأثير الدقيق لهطول الأمطار (MR) أو تفاعل واسرمان (PW). تظل الاختبارات المحددة إيجابية بعد فترة طويلة من الشفاء من مرض الزهري.

كيف تعمل هذه الاختبارات:عندما تدخل مسببات مرض الزهري الجسم ، ينتج جهاز المناعة أجسامًا مضادة تهدف إلى مكافحة اللولبية الشاحبة. لا تظهر هذه الأجسام المضادة في الدم فور الإصابة بالعدوى ، ولكن بعد أسابيع قليلة فقط. في نهاية الأسبوع الثاني بعد الإصابة بالعدوى ، تظهر الأجسام المضادة من فئة IgM في الدم. تشير الأجسام المضادة من هذه الفئة إلى إصابة حديثة بمرض الزهري ، ولكن إذا تُركت دون علاج ، فإنها تظل في الدم لعدة أشهر وحتى سنوات (بينما ينخفض ​​عددها تدريجيًا). بعد 4-5 أسابيع من الإصابة بمرض الزهري ، تبدأ الأجسام المضادة من فئة أخرى ، IgG ، في الكشف عن الدم. تبقى الأجسام المضادة من هذا النوع في الدم لسنوات عديدة (أحيانًا طوال الحياة). يمكن لاختبارات اللولبيات الكشف عن وجود الأجسام المضادة (IgM و IgG) في الدم بهدف مكافحة الوذمة الشاحبة.

تفاعل التألق المناعي (RIF)أو الجسم المضاد اللولبي الفلوري (FTA ، ومتغيره FTA-ABS)هو اختبار لولبية يستخدم لتأكيد تشخيص مرض الزهري في المراحل المبكرة (حتى قبل ظهور الأعراض الأولى).

ما الذي يتم فحصه:الدم من الوريد أو من الإصبع.

كم من الوقت بعد الإصابة يصبح الاختبار إيجابيًا؟: عادة بعد 6-9 أسابيع.

كيفية تقييم نتائج التحليل:يتم تقديم نتائج التحليل في شكل ناقص أو زائد (من واحد إلى أربعة). إذا كان هناك ناقص في التحليل ، فعندئذٍ لم يتم اكتشاف الأجسام المضادة ، وأنت بصحة جيدة. يشير وجود علامة زائد أو أكثر إلى وجود مرض الزهري.

ما يمكن أن تكون أسباب النتائج الإيجابية الخاطئة:النتائج الإيجابية الكاذبة نادرة ، لكن الأخطاء ممكنة عند الأشخاص المصابين بأمراض النسيج الضام (الذئبة الحمامية الجهازية ، التهاب الجلد والعضلات ، إلخ) ، في النساء الحوامل ، إلخ.

تفاعل التراص السلبي (RPHA)، أو فحص اللولبية الشاحبة (TPHA)- هذا اختبار محدد يستخدم لتأكيد تشخيص مرض الزهري في أي مرحلة تقريبًا.

ما يتم فحصه: الدم من الوريد أو من الإصبع.

كم من الوقت بعد الإصابة يصبح الاختبار إيجابيًا؟عادة في غضون 4 أسابيع.

كيفية تقييم نتائج التحليل:تشير نتيجة TPHA الإيجابية إلى أنك مصاب بمرض الزهري أو أنك بصحة جيدة ولكنك أصبت بالمرض في الماضي.

كيفية تقييم عيار الجسم المضاد الذي تم الحصول عليه:اعتمادًا على عيار الجسم المضاد ، يمكن للمرء أن يفترض مبدئيًا مدة الإصابة بمرض الزهري. بعد وقت قصير من دخول اللولب الأول إلى الجسم ، يكون عيار الجسم المضاد عادة أقل من 1: 320. كلما زاد عيار الجسم المضاد ، زاد الوقت المنقضي منذ الإصابة.

المقايسة المناعية الإنزيمية (ELISA)، أو مقايسة الإنزيم المناعي (EIA)، أو ELISA (مقايسة ماصة مناعية مرتبطة بالإنزيم)هو اختبار لولبية يستخدم لتأكيد التشخيص وتحديد مرحلة مرض الزهري.

ما الذي يتم فحصه:الدم من الوريد أو من الإصبع.

كم من الوقت بعد الإصابة يصبح الاختبار إيجابيًا؟في وقت مبكر بعد 3 أسابيع من الإصابة.

كيفية تقييم نتائج التحليل:يشير اختبار ELISA الإيجابي إلى أنك مصاب بمرض الزهري أو أصبت به. يمكن أن يظل هذا التحليل إيجابيًا حتى بعد العلاج.

تحديد مدة الإصابة بمرض الزهري باستخدام ELISA:اعتمادًا على فئات الأجسام المضادة (IgA ، IgM ، IgG) الموجودة في الدم ، يمكننا افتراض عمر الإصابة.

تمت كتابة المقال بناءً على مواد من المواقع: sifilis24.ru ، www.health-ua.org ، krov.expert ، zppp.su ، polismed.ru.

عندما يتم وصف التحليل ، قم بإجراء اختبار ELISA لمرض الزهري. طرق التشخيص المختبري. نتائج التحليل - كيفية تحديد القاعدة والانحرافات. تكلفة المقايسة المناعية الإنزيمية.

كقاعدة عامة ، يصف الأطباء باستمرار عند الاتصال بالعيادة اختبارات مختلفة. هذا يسمح لهم بتحديد الالتهابات والأمراض التي يعاني منها الشخص. ELISA ، أو ما يسمى بالمقايسة المناعية للإنزيم ، هي طريقة ممتازة لتقييم جهاز المناعة في الجسم ، وتحديد العدوى ومرحلة المرض من خلال وجود الأجسام المضادة.

إذن ، من هو المكلف بإجراء هذا التحليل وما هو الإنزيم المناعي؟ يصف الأطباء هذا التحليل إذا كان الشخص يعاني من الأمراض التالية:

• طفح جلدي على الجسم - ردود فعل تحسسية.
• الفيروسات - القوباء والفيروس المضخم للخلايا.
• الأمراض المنقولة جنسيا - الزهري ، المشعرات.
• علم الأمراض المرتبط بالسرطان.
• الزهري العصبي.

بالإضافة إلى هذه الأمراض ، يشرع التحليل لتحديد مستوى الهرمون في الدم. بناءً على النتائج ، يتم تقييم جودة العلاج. ربما يعرف كل شخص ما هو مرض الزهري ، لكنه لا يمثل حجمه ، وعدد الأشخاص المصابين الذين يسيرون بجانبنا.

حاليًا ، يعد مرض الزهري أكثر الأمراض شيوعًا. هذا هو treponoma الذي يؤثر على جسم الإنسان. ونتيجة لذلك ، تتأثر جميع الأعضاء الداخلية للمريض.

هذه عدوى خطيرة للغاية ، وغالبًا ما تحدث أنها قد لا تظهر نفسها لفترة طويلة. لذلك ، يمكن أن يكون الشخص ناقلًا وموزعًا لفترة طويلة دون أن يعرف أنه مريض.

طريقة التشخيص المختبري

الطب لا يقف ساكنا ، التحليلات الحديثة أصبحت مختلفة بشكل كبير عن الأساليب القديمة لدراسة الجسم. على الرغم من أنهم أدوا دورهم بشكل مثالي ، إلا أنهم اضطروا أحيانًا إلى الانتظار لأسابيع وشهور للحصول على النتائج. هذا بطبيعة الحال لم يكن في صالح الشخص المصاب. ما هو توقع النتيجة التي مر بها المريض.

التحليلات الكلاسيكية - الكشف عن مرض الزهري بطريقة Wasserman ، بدأت طريقة Kahn تفقد مواقعها واستبدلت باختبارات مثل ELISA.

هذه هي أحدث طريقة للكشف عن العدوى لدى البشر. يتم فك تشفير النتيجة باستخدام جهاز كمبيوتر. يتيح لك ذلك تحديد نتيجة إيجابية أو اختبار سلبي بدقة أكبر.

أثناء فك التشفير ، يتم إجراء بحث عن الأجسام المضادة لأمراض معينة. ونتيجة للتحليل ، كان من الممكن الكشف عن الإصابة عندما كانت النتيجة إيجابية. استخدام ELISA للكشف عن مرض الزهري يعني استخدام ثلاث فئات من الغلوبولين المناعي:

• G ، M ، A - للتشخيص هي الأهم.
• يتم إنتاجها في شخص مصاب بدقة في تسلسل معين.
• حدد بسرعة مرحلة الإصابة.

نتائج ELISA - تحليل طبيعي وإيجابي

إذا تحدث عن تحليل ELISA لمرض الزهري ، فمن الصعب في هذه الحالة القول بوجود قاعدة أو انحراف. عادة ما تكون النتيجة سلبية أو إيجابية. بالإضافة إلى ذلك ، هناك عيار يحدد كمية الأجسام المضادة في الدم.

هناك العديد من التفاصيل الدقيقة في فك تشفير التحليل ، فإذا أظهر نتيجة إيجابية ، فلا يزال يتعين إعادة التحليل عدة مرات لاستبعاد طريقة رد الفعل الإيجابي الخاطئ.

كما هو مكتوب بالفعل ، هناك الكثير من التفاصيل الدقيقة عند فك تشفير التحليل ، ويمكن للطبيب المعالج فقط تحديد النتيجة. نعطي أمثلة في الجدول ، والتي يمكن أن تظهر النتائج للمقايسة المناعية للإنزيم:

لا تيأس إذا أظهر التحليل نتيجة إيجابية. كقاعدة عامة ، يتم إجراء اختبارات واختبارات إضافية ، بطرق مختلفة ، لتحديد التشخيص بدقة أكبر.

تكلفة المقايسة المناعية الإنزيمية

كقاعدة عامة ، تعتمد تكلفة هذا التحليل بشكل مباشر على التحليل نفسه وتحديد عدوى معينة. تحديد علامات الإصابة بأنواع مختلفة يكلف 200 إلى 350 روبل. ويتم إجراء هذا التحليل في غضون يومين.

ELISA هي الطريقة الأكثر شيوعًا وحداثة لتشخيص الكائن الحي. أثبتت الطريقة فعاليتها في الكشف عن العدوى وتحديد المدة الدقيقة للعدوى.

بالنظر إلى سياسة التسعير ، يمكننا القول أن التحليل متاح لكل شخص بأي ميزانية. يسمح للطبيب المعالج بالحصول على صورة كاملة لعدوى الشخص. أظهر نفسه في القضية ولم يخيب أمل الأطباء. في الوقت نفسه ، بعد تلقي التحليل ، يمكن للطبيب المعالج الاستجابة على الفور ، ووصف العلاج في الوقت المناسب.