لا تزال الطرق الرئيسية في التشخيص المختبري المسببات لداء الفطريات هي الأساليب الكلاسيكية ، بما في ذلك الفحص المجهري للمادة ، وعزل الثقافة النقية لمسببات الأمراض مع تحديدها لاحقًا. طرق التشخيص المناعي لها أهمية ثانوية. يتم استخدامها لتحديد أهم مسببات الأمراض: الفطريات المسببة للأمراض مثنوية الشكل ، وكذلك مسببات الأمراض من المستخفيات وداء المبيضات وداء الرشاشيات. طرق الاستدلال الجيني (تفاعل البلمرة المتسلسل) هي أيضًا ذات استخدام محدود بسبب افتقارها إلى الخصوصية ، ولكنها تستخدم بشكل أساسي في تشخيص داء الفطريات العميقة والانتهازية.

يمكن أن تكون مادة البحث في التشخيص المختبري لداء الفطريات ، اعتمادًا على شكل المرض ، هي: الجلد وملحقاته (الشعر والأظافر) ، والإفرازات من الجروح والناسور ، والبلغم ، والدم ، والسائل الدماغي النخاعي والبول ، وعينات خزعة الأنسجة . تحدد صحة أخذ المواد المرضية إلى حد كبير فعالية المزيد من الأبحاث المختبرية. في حالة الآفات الجلدية ، غالبًا ما يتم أخذ المادة عن طريق الكشط أو استخدام شريط لاصق (بشكل أساسي في أشكال سطحية) قبل العلاج من بؤر جديدة ، ولكنها مطورة بالكامل على طول المحيط ، حيث توجد مسببات الأمراض الأكثر قابلية للحياة.

عند الكشف عن الفطريات الجلدية ، يعتبر الشعر مادة مفيدة للغاية ، لأن طبيعة آفة الشعر تجعل من الممكن التعرف على العامل الممرض. في بعض الحالات ، يساعد استخدام مصباح Wood في تحديد الآفة. تتم إزالة الشعر المصاب مع القشور بملاقط إزالة الشعر. في داء المشعرات المنقط الأسود المزمن ، تتم إزالة الشعر من الجلد بإبرة تشريح.

يتم اختيار الأظافر في جميع الطبقات ، مقطوعة بمشرط حاد أو مقص. اختيار أكثر كفاءة باستخدام مثقاب الأسنان. مع الآفات الصريحة ، يتم أخذ المادة باستخدام كشط من بكرة الظفر. يتم تسليم المواد المختارة إلى المختبر في أكياس ورقية داكنة لتجنب الجفاف والتلوث بالنباتات الدقيقة الأجنبية. يتم تسليم المواد المحتوية على صديد في طبعات خلفية معقمة أو أطباق بتري. يتم جمع البلغم في وعاء معقم. يجب إجراء فحص البلغم في موعد لا يتجاوز ساعتين بعد الجمع. عند تمديد وقت الدراسة ، يجب تخزين العينات في الثلاجة بدرجة حرارة +4 درجة مئوية ، وإلا فقد تحدث أخطاء تشخيصية بسبب ظهور أشكال كاذبة من خلايا الخميرة.

يتم أخذ الدم والسائل النخاعي وفقًا لقواعد العقم. يتم إجراء ثقافات الدم في وسط سائل Sabouraud. لاستبعاد تلوث عينات الدم ، يتم إجراء دراساتهم المتكررة. يتم طرد السائل الدماغي النخاعي ويتم استخدام الحبيبات في الفحص المجهري والثقافة.

يؤخذ البول في الصباح في طبق معقم ، في حين أنه من الضروري تجنب تلوث المادة بالميكروفلورا من جلد العجان. يتم إجراء مزارع البول باستخدام طرق الزراعة الكمية.

في تشخيص داء الفطريات ، يتم استخدام المستحضرات من المواد الأصلية والملطخة. في دراسة المستحضرات غير الملوثة ، يتم تنظيف المادة الكثيفة مسبقًا (منقوعة) بمحلول KOH 10-30٪ (يمكن استخدام محاليل ثنائي ميثيل سلفوكسيد) ، ثم يتم فحصها مجهريًا باستخدام طريقة "القطرة المكسرة". لإعطاء التباين ، يتم صبغ المستحضرات بمحلول مائي من الميثيلين الأزرق.

يتم إجراء تلطيخ اللطاخات الثابتة بطرق مختلفة: وفقًا لجرام ، الميثيلين الأزرق ، وفقًا لرومانوفسكي - جيمسا. تسمح لك الطريقة الأخيرة برؤية خلايا الخميرة الصغيرة ومراحل البلعمة. للمكورات الخفية ، وصمة عار الحبر ، وصمة عار ساوث جيت مع mucicarmine تستخدم. عيش الغراب المحتوي على الميلانين (داكن اللون) ، على سبيل المثال كلادوفيالوفورا باندانا، ملطخ بواسطة Massa - Fontana (تلطيخ الميلانين ، وهو جزء من جدار الخلية). تستخدم الأمصال الفلورية في تشخيص مسببات الأمراض الفطرية العميقة ومسببات الأمراض الجلدية والفطريات من الجنس المبيضات.

إن عزل الثقافة النقية للعامل الممرض يجعل من الممكن تحديد جنس وأنواع الفطريات ، لدراسة خصائصها وحساسيتها للأدوية المضادة للميكروبات. لعزل والتعرف على الفطريات ، ووسط المغذيات Sabouraud الكثيفة والسائلة ، يتم استخدام أجار نبتة. توفر هذه الوسائط نمو معظم الفطريات المسببة للأمراض والانتهازية. بالإضافة إلى ذلك ، فإن وسط Sabouraud (الشكل 8.2) يحفز عمليات تكوين الصباغ في الفطريات ، وهو أمر مهم لتحديد الهوية.

لقمع نمو البكتيريا الملوثة ، تضاف المضادات الحيوية إلى الوسائط: ليفوميسيتين ، ستربتومايسين ، بنسلين ، تتراسيكلين. لعزل الفطريات المسببة للأمراض شديدة الحساسية ، يتم استخدام الوسائط المخصبة بالدم وخلاصة القلب والدماغ. تُستخدم وسائط خاصة لزراعة الفطريات والتعرف عليها: وسيط Chapek - لتكوين الكونيديا عند التعرف على فطريات العفن ، وأجار البطاطس (جزر البطاطس) ، وأجار الأرز - لتحديد أنواع النمو والحصول على أبواغ المتدثرة عند التعرف على الفطريات من الجنس المبيضاتأجار الجزر (الخضر) - للحصول على مستعمرات نموذجية لتربية الفطر Trichophyton schonleini ،وسط كاشكين - لعزل الفطريات المكونة للصباغ. تُستخدم البيئات التشخيصية التفاضلية أيضًا ، على سبيل المثال ، لتحديد S. البيض-وسائط أو وسائط كروموجينية ، مما يسمح بتحديد نشاط الفوسفوليباز للفطر.

يتراوح وقت حضانة الفطريات من عدة أيام إلى شهر واحد أو أكثر. في حالة الاشتباه في وجود الفطريات ثنائية الشكل المسببة للأمراض ، تتم الزراعة لمدة 8 أسابيع لإصدار استجابة سلبية.

يتم التطعيم على وسائط تُسكب في أنابيب الاختبار والقوارير وأطباق بتري. يتم تلقيح مادة الفطريات الجلدية في وقت واحد على عدة أنابيب اختبار مع الوسط. يتم تلقيح المواد المشتبه في احتوائها على فطريات العفن (البلغم) في 3 نقاط وحضانة عند 28 و 37 درجة مئوية. لحل مشكلة عدم وجود تلوث أثناء أخذ عينات المواد ، يتم إجراء محاصيل تحكم في الهواء لمحتوى فطريات العفن في مباني المختبر والأجنحة حيث يوجد المرضى.

عند زراعة الفطريات في مختبر الفطريات ، يتم ملاحظة تدابير السلامة المماثلة لتلك الموجودة في المختبرات البكتريولوجية. يتم العمل مع القوالب والسموم الفطرية من أجل تجنب الحساسية من قبل الأفراد في الغرف المعبأة في ضمادات الشاش أو في صناديق سطح المكتب مع غطاء العادم. لا يمكن العمل مع الثقافات التي تنتمي إلى المجموعة الإمراضية الثانية (الفطريات المسببة للأمراض ثنائية الشكل) إلا في المختبرات المتخصصة.

يتم تحديد الأنواع الفطرية على أساس مجموعة من السمات الثقافية والمورفولوجية وغيرها. الأول يشمل مورفولوجيا المستعمرة ولونها وحجمها عند زراعتها على وسائط خاصة ، وهيكل الحافة والمركز ، وطبيعة السطح ، ووجود وطبيعة الأعضاء التناسلية ، والأخير - سمات المجهرية هيكل mycelium ، وهيكل وشكل وحجم الأعضاء التناسلية - conidiophores ، conidia ، chlamydospores ، arthrospores ، إلخ.

تشكل الفطريات أنواعًا مختلفة من المستعمرات على وسط مغذٍ كثيف. قام علماء من معهد G. Venter (الولايات المتحدة الأمريكية) ، مع الأخذ في الاعتبار قدرة الفطريات على إطلاق مواد صبغية في الوسط ، بإنشاء "شجرة عيد الميلاد" في وسط المغذيات (الشكل 8.3).

أرز. 8.3 "شجرة عيد الميلاد" للفطر (أعلى: Talaromyces نصيب؛ خشب نيدولانس الرشاشياتالزينة: البنسليوم مارنيفي.عقب السيجارة: Aspergillus terreus)

القدرات الأنزيمية والاستيعابية للثقافات ذات أهمية كبيرة في تحديد الخمائر (الفطريات الشبيهة بالخميرة). في الوقت الحاضر ، تُستخدم أنظمة الاختبار التجارية لتحديد الفطريات الشائعة التي تسبب الأمراض للإنسان والحيوان: BBL Mycotube ، API 20С bio Merieux ، إلخ.

تعتبر الأمراض التي تسببها الالتهابات الفطرية أو الفطرية مشكلة شائعة. هناك عدد لا يصدق من العوامل المسببة لداء الفطريات.

في كل عام ، يكتشف العلماء ويصفون أنواعًا جديدة من الفطريات. على الرغم من ذلك ، فإن تشخيص وعلاج داء الفطريات هو آلية راسخة وواضحة لفترة طويلة.

أنواع الأمراض الفطرية

تؤثر معظم الفطريات عند البشر على الأغشية المخاطية والجلد.

تشمل الأمراض التي يكون سبب تطور المرض فيها الفطريات ما يلي:

• سعفة
• داء المبيضات
• فطار الأظافر
• متنوعة أو النخالية ، المبرقشة
• حزاز أسود
• الزهم
• داء الرشاشيات

طرق تشخيص داء الفطريات

واحدة من أكثر الطرق شيوعًا هي التشخيص الميكروبيولوجي لداء الفطريات.

تسمح لك طرق التشخيص الحديثة بتحديد نوع الفطريات التي تسبب المرض بدقة. في المستقبل ، هذا يجعل من الممكن اختيار المسار الأمثل للعلاج. في الوقت الحالي ، هناك ثلاث طرق رئيسية للتشخيص المختبري لداء الفطريات.

وتشمل هذه:

• مجهري
• ثقافي
• مصلي

كل طريقة لها مزاياها الخاصة. يسمح لك التشخيص الثقافي للفطريات بتحديد نوع الفطريات. في هذه الحالة ، من الممكن تقييم حساسية المستعمرات للأدوية المختلفة.

ستسمح لك هذه الطريقة باختيار دواء فعال. تتطلب هذه الطريقة الكثير من الوقت لبذر ونمو المستعمرات.

تتطلب الطرق المجهرية والمصلية لتشخيص داء الفطريات وقتًا أقل لإجراءها. عند استخدامها ، يتم تحديد نوع العامل الممرض أيضًا ، لكن من المستحيل التحقق من حساسيته للأدوية. في بعض الحالات ، من الممكن استخدام طريقة تشخيص الإنارة. هذه الطريقة أقل شيوعًا بسبب تعقيدها.

لا يمكن استخدام طريقة الإنارة إلا إذا كان الشعر مصابًا بالفطريات. الطريقة غير فعالة للتشخيص المبكر. هذا يرجع إلى حقيقة أن تأثير التوهج لن يظهر إلا عندما يتضرر الشعر بشدة من الفطريات.

تشخيص فطار القدم

يعد فطر القدم أحد أكثر أنواع الفطريات الجلدية شيوعًا.

يُفهم هذا المصطلح عمومًا على أنه عدوى فطرية في جلد القدم والأظافر.

تذكر! المرض له مسار الانتكاس.

أثناء تشخيص فطار القدم ، من الضروري التفريق بين عدد من الأمراض الأخرى. يعتمد تشخيص فطار القدم على المظاهر السريرية والفحص المجهري. من الممكن استخدام الطريقة الثقافية.

علاج داء الفطريات

تلعب الأدوية المضادة للفطريات ذات التأثير الموضعي والنظامي الدور الرئيسي في علاج داء الفطريات.

يتم توجيه العلاج بمضادات الفطريات المحلية مباشرة إلى بؤرة المرض. في الوقت نفسه ، يكون التأثير السلبي على الجسم ككل ضئيلًا.

توصف الأدوية المضادة للفطريات ذات التأثير الجهازي إذا:

• الأدوية المضادة للفطريات المحلية غير فعالة
• المرض جهازي

توصف مضادات الحساسية ومضادات الهيستامين عندما تكون الفطريات مصحوبة بعملية التهابية أو تفاعلات حساسية. إذا انضمت عدوى ثانوية إلى داء الفطريات ، فمن الممكن وصف الأدوية المضادة للبكتيريا.

من المهم أن يبدأ علاج الأمراض الفطرية في المراحل المبكرة من المرض. إذا كانت العملية قديمة ، فقد تستغرق وقتًا أطول للشفاء.

عندما تظهر الأعراض الأولى ، اطلب المساعدة من طبيبنا على الفور.

أول استقبال

في الموعد ، يجري طبيب الفطريات فحصًا ويصف أيضًا دراسة شاملة.

التشخيصات المخبرية

أكثر الطرق فعالية لتشخيص داء فطريات الجلد هي الاختبارات المعملية المختلفة التي يمكن أن تحدد العوامل الممرضة وتساعد في اختيار نظام العلاج. لتحديد العامل المسبب للفطار ، توصف الاختبارات المعملية التالية:

• التحليل النسيجي
• الثقافة البكتريولوجية
• البحث المناعي
• تشخيصات PCR
• الفحص الثقافي
• البحوث الميكروبيولوجية.

تساعد التشخيصات الميكروبيولوجية على اكتشاف الفطر وتحديد جنسه وأنواعه.

التشخيصات الميكروبيولوجية هي الطريقة الأكثر شيوعًا وأبسطها للكشف عن الفطريات في الدم والجلد. لتحديد التشخيص الدقيق ، يجب أن تعرف كيفية جمع المواد المطلوبة في الدراسة بشكل صحيح. يجب جمع الشعر المصاب بالملقط. إذا كان الجلد مصابًا ، فعند الفحص المجهري ، يجب كشط الجلد من المنطقة التالفة. يتم وضع كل المواد المأخوذة في محلول هيدروكسيد البوتاسيوم بنسبة 30٪ ، ثم على شريحة زجاجية. التشخيصات الميكروبيولوجية قادرة على تحديد مكان تواجد الفطريات بالضبط (داخل أو خارج الشعر والجلد) وحجمها.

لمنع التشخيص الخاطئ للفطار ، من الضروري أخذ المواد بشكل صحيح وكفء للفحص الميكروبيولوجي.

في الطب ، هناك طرق للتشخيص الميكروبيولوجي:

• الفحص المجهري باستخدام مستحضرات محلية أو غير ملوثة. للقيام بذلك ، يتم توضيح المادة بمحلول 10-30٪ من البوتاسيوم أو هيدروكسيد الصوديوم. ثم يتم وضع المادة المعالجة على زجاج معمل ، حيث تم إسقاط القليل من الجلسرين سابقًا. الغطاء العلوي بلوحة زجاجية وإجراء التحليل.
• يتم إجراء الفحص المجهري للمستحضرات المصبوغة بعدة طرق لتحديد البكتيريا ، وتمييز البكتيريا المختلفة ، والتعرف على الفطريات المختلفة.

الثقافة البكتريولوجية

تعد الثقافة البكتريولوجية من أكثر طرق التشخيص فعالية.

يُعد جمع البذر البكتريولوجي على وسط غذائي طريقة دقيقة لتشخيص الإصابة بالفطار. بالنظر إلى مظهر وخصائص مستعمرة الفطريات المزروعة ، يحدد طبيب الأمراض الجلدية نوع العامل الممرض الذي تسبب في الإصابة بالفطريات. العيب الوحيد للمسح هو أن نمو المستعمرة يستغرق وقتًا طويلاً. في المتوسط ​​، يستغرق اكتشاف سلالة العامل الممرض حوالي 3 أسابيع. في بعض الحالات ، لا تحقق الطريقة النتائج المتوقعة.

تشخيصات PCR

تتضمن طريقة تشخيص تفاعل البوليميراز المتسلسل تحديد العامل المسبب للفطار باستخدام تفاعل البلمرة المتسلسل. أثناء الفحص ، تزداد حساسية التهجين ، مما يزيد من محتوى الحمض النووي الفيروسي في مادة الاختبار. طريقة الفحص هذه جديدة وتتطلب عدة فحوصات من قبل المريض. يُعتقد أن هذا النوع من التشخيص مكلف للغاية ، ولكنه يعطي نتائج دقيقة.

الامتحان الثقافي

يوصى بإجراءات التشخيص الثقافية في المرحلة النهائية من التشخيص. تتمثل الطريقة في الحصول على مزرعة للفطر ، ثم يتم إرسالها للفحص باستخدام المجهر. يتم وضع المادة الناتجة على وسط مغذي مصطنع ويتم تحديد نوع العامل الممرض والمظهر والحجم. بعد ذلك ، يتم عرض علاج خاص يهدف إلى مكافحة نوع معين من العوامل المسببة للفطار.

الفحص المجهري -هذه إحدى الطرق الرئيسية في التشخيص المختبري لداء الفطريات. من الضروري إجراء هذه الدراسة من اليوم الذي تظهر فيه المستعمرات الأولى على وسط المغذيات. قبل الفحص المجهري ، من الضروري معرفة ما إذا كانت الفطريات هي الخميرة أو العفن - من خلال ظهور المستعمرات ، نتائج اختبار الشتلات.

عند الفحص المجهري لفطريات العفن ، يتم أخذ بنية الفطريات في الاعتبار (أي السمات الهيكلية للخيوط ولونها وانفصالها ؛ السمات الهيكلية للكونيدية والجراثيم ، بما في ذلك حجم الكونيديا وشكلها ولونها ؛ هيكل جدارها الخلوي ، و septation ، وما إلى ذلك)

على استعداد للفحص المجهري محليو رسمالمخدرات. للطبخ رسمالاستعدادات ، تتم معالجة المواد بطرق مختلفة:

1. التلوينPAS-طريقة.يتيح استخدام طريقة PAS اكتشاف السكريات المحايدة في جدران الكائنات الحية الدقيقة. السكريات المحايدة عبارة عن مركب جلوكان مانان يقع في جدار الخلية في معظم الفطريات الفطرية ، بسبب حدوث تلطيخ.

PAS-تفاعلات- إحدى طرق التشخيص المجهري لأنسجة أشكال العدوى الفطرية. في المختبرات العملية للتشخيص المجهري ، يتم استخدام تعديلات مختلفة لهذه الطريقة: أكسدة حمض الكروميك - تفاعل باور ؛ وصمة جريدلي.

2. صبغة جرام (تعديل جرام-ويغيرت) لتحديد الكائنات الحية الدقيقة المرتبطة.

3. صبغة Ziehl-Nielson للكشف عن الكائنات سريعة التحمل. إذا كانت المادة قيد الدراسة سائل، ثم يتم تحضير مسحة غير ملوثة منها للفحص المجهري في سوائل التنظيف: خليط من الكحول والجلسرين بنسبة 1: 1.

الخطوة التالية هي البحث الفطري.- عزل والتعرف على الفطريات. ضع في اعتبارك ميزات هذه المرحلة اعتمادًا على المادة قيد الدراسة.

البحث الفطري

البحث الثقافي.يعتمد البحث الثقافي على عزل العامل الممرض عن مادة الاختبار. تختلف شروط الزراعة باختلاف أنواع الفطريات (من 2-4 أيام إلى 4 أسابيع) ، في حالة الاشتباه في وجود فطريات ثنائية الشكل ، يتم عزل الثقافة لمدة تصل إلى 8 أسابيع. الوسيلة الرئيسية للزراعة في مختبر الفطريات هي وسط Sabouraud: Sabouraud dextrose agar (وسط كثيف) ، مرق Sabouraud (وسط سائل). لقمع نمو النباتات البكتيرية ، تضاف المضادات الحيوية (الكلورامفينيكول ، الجنتاميسين ، أقل الستربتومايسين ، البنسلين) إلى وسط سابورو. لقمع نمو الفطريات الرمية ، يضاف السيكلوهكسيميد والكلورامفينيكول إلى الوسط. هناك وسائط جاهزة مع سيكلوهيكسيميد ( ميكوبيوتيك ميكوسيل).

طريقة الزراعة المثلى لمعظم الفطريات المسببة للأمراض هي 30 درجة مئوية ، 20-25 درجة مئوية ، أقل من 37 درجة مئوية - في حالة الاشتباه في وجود فطريات ثنائية الشكل. تصل مدة الحضانة لمعظم عيش الغراب إلى 6 أسابيع ؛ إذا لم يلاحظ أي نمو بعد هذا الوقت ، فامنح إجابة سلبية. في حالة الاشتباه في وجود فطار ثنائي الشكل في حالة عدم وجود نمو خلال 6 أسابيع ، يتم الاحتفاظ بالثقافة لمدة 8 أسابيع وبعد ذلك فقط تعطي نتيجة سلبية.

في دراسة ثقافية هام من الناحية التشخيصيةنكون:

عزل فطريات العفن أو الخميرة ، عند فحص مادة معقمة بشكل طبيعي ؛

عزل الفطريات ثنائية الشكل.

خوارزمية البحث الفطري

1. تحديد المسببات الفطرية للممرض (الفحص المجهري).

2. تحديد فطريات الخميرة أو العفن:

الفحص المجهري للمواد السريرية (وجود الفطريات) ؛

طبيعة المستعمرات على وسط المغذيات ، معدل النمو (الخميرة تنمو 48 ساعة ، فطريات العفن تنمو ببطء).

3. يتم التحديد النهائي للفطر على مستوى الأنواع (غير محدد) باستخدام الاختبارات البيوكيميائية والطرق المناعية. في دراسة الخصائص البيوكيميائية ، تمت دراسة قدرة الثقافة المعزولة على الاستيعاب (auxanogram) والتخمير (zygogram). من الممكن استخدام أنظمة تحديد آلية (أنظمة اختبار لتحديد الفطريات).

معايير الأهمية المسببة لعزل الفطريات الانتهازية

1. إذا كانت الأبواغ المتفجرة مرئية فقط في المستحضر الأصلي (نباتات رمية) ، فإن هذا يُعتبر ناقلًا.

3. إذا كانت الأبواغ المتفجرة مفردة وكانت الفطريات الكاذبة هي السائدة ، فهذه علامة على تلف عميق في الأعضاء.

4. إن التبرعم الفعال للأبواغ المتفجرة دليل على حدوث عملية حادة.

5. التقييم الكمي للنتائج - عزل الفطر عن التخفيفات

10 - البراز والبول.

10 - البلغم.

6. تكرار البذر لنفس النوع من الفطريات

7. وجود أجسام مضادة للسلالة المعزولة.

الفحص الفطري لتصريف الغشاء المخاطي

1. تحضير المواد.بعد أخذ المادة من الأغشية المخاطية ، توضع المسحة في 2 مل من سائل Sabouraud السائل أو نبتة أجار ، أو BCH ، تُسكب في أنابيب اختبار معقمة. يتم اهتزازها تمامًا لمدة 5 دقائق ، محاولًا عدم نقع الفلين. يتم تحضير عدد من التخفيفات بنسبة 1:10 و 1: 100 من التعليق الناتج ، إلخ.

من كل تخفيف ، تطعيم 0.1 مل لكل 2 كوب من أجار نبتة ، Sabouraud أجار أو MPA. يتم تحضين التطعيمات على وسائط صلبة وأنبوب اختبار بوسط سائل مع مسحة للتخصيب عند +37 0 درجة مئوية لمدة 48 ساعة:

بعد انقضاء الوقت ، يتم عرض المحاصيل وحساب عدد المستعمرات وتحديد عدد مستعمرات الخميرة تقريبًا. عددهم مضروب في 20 وبالتخفيف الذي يصنع منه البذر ؛

إذا لم يكن هناك نمو على أطباق مع تلقيح مصنوع من التخفيفات ، تتم إعادة التلقيح من وسط التخصيب إلى صفيحة مع أجار نبتة.

الفحص الفطري للدم

1. تحضير المواد.بعد أخذ عينات الدم ، يتم تخفيفه بنسبة 1:10 بحيث لا تمنع خصائص مبيد الجراثيم في الدم نمو الفطريات.

2. دراسة ثقافية.

يتم تلقيح 5-10 مل من الدم في 50-100 مل من وسط سابورو السائل مع 2٪ جلوكوز. عند درجة حرارة 37 درجة مئوية يتم تحضينها لمدة أسبوع.

بعد 5 أيام قم بعمل بذر تحكم. للقيام بذلك ، يتم أخذ الرواسب باستخدام ماصة معقمة ؛

تُحفظ أكواب البذور في منظم حرارة عند 37 درجة مئوية لمدة 2-5 أيام ؛

إذا تم الكشف عن نمو ، فسيتم إصدار إجابة أولية حول فطريات الدم ، ويتم إجراء مزيد من التعرف على الفطريات أثناء الدراسة.

الفحص الفطري لعينات الخزعة

1. يتم استخدام طريقة البصمات لأخذ المادة.

2. الدراسة الثقافية:

يتم عمل بصمة بقطعة من الأنسجة قيد الدراسة على سطح وسط مغذي Sabouraud كثيف ؛

يتم وضع نفس قطعة النسيج في 50 مل من وسط مغذي سائل (نبتة أو Sabouraud) ؛

تحضن المحاصيل عند 37 درجة مئوية لمدة 5 أيام.

التشخيص الدقيق لداء الفطريات الغازيةليس سهلا. هذا لا يرجع فقط إلى الصعوبات في الحصول على مزرعة الفطريات ، ولكن أيضًا في تفسير نتائج الدراسات ، حيث يمكن للفطريات ، سواء الخميرة أو الفطريات ، استعمار الأغشية المخاطية وتلويث العينات قيد الدراسة. في هذا الصدد ، يعتمد تشخيص داء الفطريات الغازية على نهج متكامل ، بما في ذلك ليس فقط نتائج الدراسات الفطرية (الثقافية) والمصلية (تحديد مستضد الفطريات) ، ولكن أيضًا الأعراض السريرية للعدوى الفطرية ، وبيانات من البحوث المساعدة الطرق (الكمبيوتر أو التصوير بالرنين المغناطيسي ، الموجات فوق الصوتية).

المجموعة التعاونية الأوروبية الأمريكية لدراسة داء الفطريات الغازيةفي المرضى الذين يعانون من نقص المناعة ، تم تطوير معايير لتشخيص داء الفطريات الغازية. تم تقديمها في عام 2001 في المؤتمر الدولي حول مضادات الميكروبات والعلاج الكيميائي (ICAAC ، شيكاغو) ، وفي عام 2002 مطبوعة. تم تحديد معايير الإصابة بالفطريات الغازية المؤكدة والمحتملة والمحتملة ، والتي يوصى باستخدامها في الدراسات السريرية والوبائية.

ثبت وجود فطار غازي ناتج عن فطريات خيطية: الكشف عن الفطريات الفطرية في عينات الخزعة أو الشفط أثناء الفحص النسيجي أو الخلوي ، أو عزل الثقافة من العينات التي تم الحصول عليها في ظل ظروف معقمة من بؤرة معقمة بشكل طبيعي ، والتي ترتبط ، وفقًا لنتائج الدراسات السريرية والإشعاعية ، بالعدوى ، مع باستثناء دراسات البول والأغشية المخاطية.

ثبت وجود فطار جائر بسبب فطريات الخميرة: الكشف عن خلايا الخميرة (يمكن أن تشكل الفطريات من جنس المبيضات الكاذبة أو الفطريات الحقيقية) في عينات الخزعة أو الشفط ، باستثناء عينات من الأغشية المخاطية ، أو عزل المزرعة من العينات المأخوذة تحت ظروف معقمة من بؤرة معقمة عادة ، والتي ، وفقًا لنتائج الدراسات السريرية والإشعاعية المصاحبة للعدوى ، باستثناء عينات البول والجيوب الأنفية والمخاطية ، أو الكشف عن طريق الفحص المجهري والتلوين المحدد (في قطرة الحبر ، وصمة عار الميوسكارمين) لخلايا الخميرة أو مستضد Cryptococcus spp الإيجابي. في السائل الدماغي الشوكي.

فطريات الدم بسبب الفطريات الخيطية: عزل الفطريات الدموية باستثناء Aspergillus spp. و Penicillium spp. ، بما في ذلك Penicillium marneffei ، بالاشتراك مع الأعراض السريرية لعملية معدية تتفق مع العامل الممرض المعزول.

فطريات الدم بسبب فطريات الخميرة: عزل مزرعة الدم من الفطريات من جنس المبيضات أو فطريات الخميرة الأخرى في المرضى الذين يعانون من علامات سريرية للعدوى المرتبطة بهذا العامل الممرض.

مجموعة من الدراسات التشخيصية لداء الفطريات الغازية

فحص المواد الحيوية	المؤشرات ، الوسائط المستخدمة ، القيمة
الدم	دواعي الإستعمال: الحمى المستمرة (4-5 أيام أو أكثر) على خلفية العلاج بالمضادات الحيوية واسعة الطيف ؛ "الموجة" الثانية من الحمى على خلفية العلاج بالمضادات الحيوية أخذ عينات الدم من الوريد إلى قوارير البكتيريا الهوائية * أو في وسط انتقائي للفطريات ، تكرر (2-3 مرات خلال اليوم بفاصل 1 ساعة) قيمة التشخيص: عزل فطريات الخميرة ، التفسير الدقيق عند عزل الفطريات الخيطية باستثناء الفطر Fusarium spp.
القسطرة الوريدية	دواعي الإستعمال: عزل الخميرة عن الدم يتم إزالة القسطرة الوريدية المركزية أو المحيطية في جميع حالات عزل الخميرة عن الدم لفحص الفطريات ، يتم استخدام جزء بعيد معقم معقم من القسطرة بطول 5-6 سم. قيمة التشخيص: عزل فطريات الخميرة في دراسة شبه كمية لـ 15 cfu أو أكثر ، في دراسة كمية - 103 cfu / ml أو أكثر لتأكيد تشخيص العدوى المرتبطة بالقسطرة أو إصابة القسطرة
إفرازات الجهاز التنفسي العلوي ، البلغم ، مسحات القصبة الهوائية والشعب الهوائية ، سائل غسيل القصبات الهوائية	دواعي الإستعمال: الاشتباه في داء الفطريات الناجم عن الفطريات الخيطية أو المستخفية الحديثة ؛ الحمى لفترات طويلة أثناء العلاج بالمضادات الحيوية واسعة الطيف وقلة العدلات الفحص المجهري للعينات ذات الفلور الكلسي الأبيض (الكشف عن الفطريات أو الفطريات الكاذبة) ؛ التلقيح على وسط سابورو ؛ تحديد مستضد الرشاشيات في سائل غسل القصبات الهوائية في وجود بؤر في الرئتين ، وهي سمة من سمات داء الرشاشيات الغازية قيمة التشخيص: عزل الفطريات الخيطية أو Cryptococcus neoformans
السائل النخاعي	دواعي الإستعمال: أعراض التهاب السحايا. الكشف عن بؤرة تركيز (بؤر) في الدماغ بالتصوير بالرنين المغناطيسي أو المحوسب ؛ أعراض "دماغية" على خلفية الحمى وقلة العدلات الفحص المجهري باستخدام كلسوفلور أبيض ، في قطرة من الحبر ؛ تحديد مستضد الرشاشيات ، Cryptococcus ؛ التلقيح على وسط سابورو قيمة التشخيص: الكشف عن الفطريات ، الخميرة والفطريات ؛ مستضد إيجابي
الخزعات ، الشفط ، السائل البريتوني ، السائل الجنبي	دواعي الإستعمال: العلامات السريرية و / أو الإشعاعية للفطار الغازي ؛ الحمى أثناء العلاج بالمضادات الحيوية واسعة الطيف. الفحص المجهري بالكلسوفلور الأبيض ، التلقيح على وسط سابورو قيمة التشخيص: الكشف عن الفطريات سواء الخميرة أو الخيطية

* تواتر عزل الفطريات من الدم كان متطابقا في عينات الدم الأولية سواء في قوارير مع وسط الزراعة لزراعة البكتيريا ، ومع وسط الانتقاء للفطريات. أجريت الدراسة على محلل بكتيريولوجي VASTES 9240.

احتمال الإصابة بالفطريات الغازيةتم تشخيصه بمجموعة من المعايير التالية:
علامة واحدة من فئة المعايير الميكروبيولوجية ؛
علامة واحدة من فئة "هام" أو اثنتان من مجموعة الأعراض السريرية "الأقل أهمية" للعملية المعدية.

فطار غازي محتملتم تشخيصه على أساس مجموعة من المعايير التالية:
وجود عامل خطر واحد على الأقل يؤدي إلى تطور فطار غازي ؛
علامة واحدة من فئة المعايير الميكروبيولوجية أو علامة واحدة من فئة الأعراض السريرية "المهمة" (اثنتان من مجموعة الأعراض السريرية "الأقل أهمية") للعملية المعدية.

مفهوم " ممكن فطار الغازية»لا ينصح باستخدامه في التجارب السريرية التي تبحث في فعالية الأدوية المضادة للفطريات. يمكنك استخدام هذا المصطلح في تحليل العلاج التجريبي المضاد للفطريات ، والدراسات الوبائية ، ودراسة اقتصاديات الأدوية.

في البحث الفطريتأخذ عينات الشفط أو الخزعة المعقمة في الاعتبار ليس فقط عزل ثقافة الفطريات ، ولكن أيضًا الكشف عن الفطريات أو الفطريات الكاذبة عن طريق الفحص المجهري. في المستحضرات النسيجية ، يصعب التفريق بين الرشاشيات و Fusarium spp. و Sceclosporium apiospermum وبعض الفطريات الخيطية الأخرى. للتشخيص التفريقي ، يجب إجراء دراسة كيميائية مناعية مع الأجسام المضادة للرشاشيات.

عزل فطريات الخميرةمن الدم في دراسة واحدة على الأقل ينتمي إلى فئة الفطريات الغازية "المثبتة" وهو مؤشر مطلق لتعيين مضادات الفطريات الجهازية في المرضى الذين يعانون من قلة العدلات. تواتر الكشف عن فطريات الخميرة من الدم منخفض ، حتى مع داء المبيضات المنتشر ، فهو 35-50٪.
تحتجز تكرار ثقافات الدميزيد من احتمالية النتائج الإيجابية.

آخر التفسيرالنتائج في حالة الكشف عن الفطريات الخيطية في الدم. التكرار العالي لعزل الفطريات الخيطية هو سمة من سمات Fusarium spp. وهي 40-60٪. نادرًا ما يتم العثور على الرشاشيات ، وتعتبر في معظم الحالات تلوثًا ، باستثناء Aspergillus terreus.

اختيار الرشاشيات الأرضيةمن دم المرضى الذين يعانون من داء الأرومة الدموية قد يشير إلى رشاش الدم الحقيقي ، وفي حالة وجود أعراض سريرية للعدوى ، فهذا هو الأساس لوصف مضادات الفطريات.

معايير الفطريات الغازية

فِهرِس	معايير
العوامل المسببة لحدوث فطار غازي (كائن حي كبير)	العدلات (< 0,5*109/л в течение 10 дней) الحمى المستمرة لأكثر من 96 ساعة مع المضادات الحيوية واسعة الطيف درجة حرارة الجسم أعلى من 38 درجة مئوية أو أقل من 36 درجة مئوية وأي من العلامات المؤهبة التالية: قلة العدلات لفترات طويلة (أكثر من 10 أيام) في الأيام الستين السابقة ، العلاج المكثف المثبط للمناعة في آخر 30 يومًا ، الفطار الغازي المثبت أو المحتمل في الأيام السابقة فترة قلة العدلات أو الإيدز وجود أعراض داء الطعم حيال مرض مزمن ، خاصة حالات الدورة الشديدة (الدرجة الثانية) أو المسار المكثف لمرض مزمن الاستخدام طويل الأمد (أكثر من 3 أسابيع) للجلوكوكورتيكويد خلال آخر 60 يومًا
العلامات الميكروبيولوجية	عزل زراعة الفطريات الخيطية (بما في ذلك Aspergillus spp. و Fusaruim spp. و Sceclosporium spp. و Zygomycetes) و Cryptococcus neqformans من البلغم أو سائل غسل القصبات الهوائية النتائج الإيجابية للثقافة أو الفحص الخلوي (الفحص المجهري المباشر) للكشف عن الفطريات الخيطية من رشاشات الجيوب الأنفية الكشف عن الفطريات الخيطية أو المستخفيات المستخفية في علم الخلايا / الفحص المجهري المباشر من البلغم أو سائل غسل القصبات الهوائية مستضد الرشاشيات الإيجابي في سائل غسيل القصبات الهوائية والسائل النخاعي وعينات الدم (اثنان على الأقل) مستضد المستخفيات الإيجابي في عينات الدم الكشف عن طريق علم الخلايا أو الفحص المجهري المباشر للعناصر الفطرية في عينات من السوائل المعقمة بشكل طبيعي (على سبيل المثال ، Cryptococcus spp. في السائل النخاعي) نتيجتان إيجابيتان للكشف عن زراعة الخميرة في البول في غياب قسطرة بولية بلورات المبيضات في البول بدون قسطرة بولية عزل المبيضات النيابة. من مزارع الدم
علامات طبيه الجهاز التنفسي السفلي	يجب أن يرتبط بالموقع الذي تؤخذ منه العينات للفحص الميكروبيولوجي أي من الأنواع التالية من تسلل الرئة الجديد في التصوير المقطعي المحوسب: علامة هالة ، علامة هلالية ، تجويف مع مناطق توطيد * أعراض عدوى الجهاز التنفسي السفلي (السعال ، ألم الصدر ، نفث الدم ، ضيق التنفس) ، الاحتكاك الجنبي ، أي تسلل جديد غير مدرج في السمات عالية الأهمية ؛ الانصباب الجنبي
الجهاز التنفسي العلوي علامات ذات أهمية عالية علامات أقل أهمية	العلامات الإشعاعية للعدوى الغازية في الجيوب الأنفية (تآكل الجدار أو انتشار العدوى إلى الهياكل المجاورة ، تدمير واسع النطاق لعظام الجمجمة) سيلان الأنف ، احتقان الأنف ، تقرح الأنف ، الرعاف ، الوذمة المحيطة بالحجاج ، ألم الفك العلوي ، تقرح نخر أسود أو انثقاب الحنك الصلب
الجهاز العصبي المركزي علامات ذات أهمية عالية علامات أقل أهمية	دليل الأشعة السينية على عدوى الجهاز العصبي المركزي المشتبه بها (التهاب الخشاء أو بؤرة بارزة أخرى ، والدبيلة خارج الجافية ، وآفات متعددة في مادة الدماغ أو النخاع الشوكي) الأعراض والعلامات العصبية البؤرية ، بما في ذلك النوبات البؤرية ، شلل نصفي ؛ اضطرابات في الوعي ، وأعراض سحائية ، وانتهاكات للتركيب الكيميائي الحيوي للسائل الدماغي النخاعي وتكوينه الخلوي (في غياب مسببات الأمراض الأخرى ، وفقًا للثقافة والفحص المجهري ، في غياب الخلايا السرطانية)

* في حالة عدم وجود عدوى تسببها الكائنات الحية الدقيقة القادرة على إحداث صورة إشعاعية مماثلة ، بما في ذلك تكوين التجاويف (Mycobacterium spp. ، Legionella spp. ، Nocardia spp.).

في الكشف في الدمأو غيرها من الركائز الحيوية المعقمة لفطريات الخميرة ، من الضروري تحديد الأنواع وتحديد الحساسية للأدوية المضادة للفطريات ، عند عزل الفطريات الخيطية (العفن) - تحديد الأنواع فقط ، لا يتم تحديد الحساسية.

في السريرية ممارسةلم يتم التحقق من حساسية الفطريات الخيطية بسبب النقص في معايير تحديد حساسية هذه الفطريات لمضادات الفطريات. علاوة على ذلك ، أظهرت دراسة واحدة فقط وجود علاقة بين Aspergillus spp. ونتائج علاج داء الرشاشيات الغازية في مرضى داء الأرومة الدموية. لم تجد أي من الدراسات اللاحقة نتائج مماثلة.

في الآونة الأخيرة ، بدأت تظهر تقارير متفرقة عن تكوين المقاومة المكتسبة لفطريات A. fumigatus تجاه itraconazole ، voriconazole.

تحديد الفطريات للأنواع، خاصة التي تم الحصول عليها من مواضع معقمة ، ضرورية في المقام الأول لاختيار مضادات الفطريات والعلاج المناسب المضاد للفطريات. وبالتالي ، فإن Candida krusei مقاومة للفلوكونازول وأقل حساسية من أنواع الخميرة الأخرى للأمفوتريسين B ؛ Aspergillus terreus و Scedosporium apiospermum (Pseudallescheria boydii) و Trichosporon beigelii و Scopulariopsis spp. مقاومة الأمفوتريسين ب ؛ Mucorales مقاومة للإيتراكونازول ، voriconazole ، المبيضات glabrata تظهر حساسية تعتمد على الجرعة للفلوكونازول ، وإذا تم عزل هذا النوع من الفطريات ، حتى السلالات الحساسة ، فيجب زيادة جرعة فلوكونازول (يتم وصف البالغين 800 مجم بدلاً من 400 مجم) ؛ المبيضات lusitaniae مقاومة للأمفوتريسين ب.

تحديد الفطريات للأنواعمهم أيضًا للتحليل الوبائي في المستشفى - تحديد العوامل المسببة لتفشي العدوى ، وإذا أمكن ، مصدر العدوى. يتم وصف حالات تفشي العدوى التي تسببها الفطريات النادرة مثل C. lusitaniae و C. krusei و C. lipolytica.

على أساس تحديد أنواع الفطريمكن افتراض وجود فطريات غازية أو استعمار فطري للأغشية المخاطية. على سبيل المثال ، يعتبر Aspergillus niger أقل احتمالا بكثير من Aspergillus fumigatus للتسبب في داء الرشاشيات الغازي في المرضى الذين يعانون من سرطان الدم الحاد. غالبًا ما يُنظر إلى عزل Aspergillus niger من سائل غسل القصبات الهوائية على أنه استعمار في الجهاز التنفسي ومن البلغم - باعتباره تلوثًا من الهواء ويتطلب دراسات إضافية لتأكيد تشخيص داء الرشاشيات الغازي.

على أساس عزل الفطريات الخيطيةمن البلغم ، والسائل القصبي ، وشفط الجيوب الأنفية ، يمكن للمرء أن يفترض فقط الفطريات الغازية ، وليس تضمينه في فئة "مثبتة". ومع ذلك ، يجب دائمًا أن يؤخذ في الاعتبار اكتشاف الرشاشيات في البلغم ، وخاصة Aspergillus fumigatus أو Aspergillus flavus ، في المرضى الذين يعانون من قلة العدلات الذين يتلقون نخاع العظم الخيفي. وهذا يتطلب فحص فطري متكرر وتصوير مقطعي للرئتين. لذلك ، مع قلة العدلات ، فإن احتمال اكتشاف داء الرشاشيات الغازية في حالة وجود ثقافة إيجابية من Aspergillus spp. في البلغم 80٪.

اختيار المستخفية الحديثةفي المرضى الذين يعانون من نقص المناعة من الجهاز التنفسي (الاغتسال ، الغسيل) مهم من الناحية التشخيصية. إذا لم يكن تحديد فطريات الخميرة من السوائل التي تم الحصول عليها من الجهاز التنفسي (غسيل من القصبة الهوائية ، والشعب الهوائية ، وغسل القصبات الهوائية) للمرضى الذين يعانون من نقص المناعة أمرًا إلزاميًا ، فمن الضروري إجراء فحص للكشف عن Cryptococcus neoformans من هذه العينات.

الكشف عن المبيضات في البولفي المرضى الذين يعانون من قلة العدلات والحمى ، عادة ما يعتبر مظهرًا من مظاهر العدوى الفطرية المنتشرة.

في الوقت المناسب التشخيصيستخدم الغازي بنجاح اختبارًا تجاريًا للكشف عن دوران مستضد معين من الفطريات Aspergillus spp. galactomann (مكون متعدد السكاريد قابل للذوبان في الماء لجدار الخلية للفطر).

جالاكتومانيمكن تحديده بطريقتين: تراص اللاتكس (Pastorex Aspergillus ، BioRAD) والمقايسة المناعية الإنزيمية (Platelia Aspergillus ، BioRAD).

مميزات الإنزيم المناعيهي عتبة أقل من الحساسية لتحديد مستوى الجالاكتومان في الدم - 1 نانوغرام / مل أو أقل ، واستخدام تراص اللاتكس - 15 نانوغرام / مل. القيمة التشخيصية هي تحديد الجالاكتومان في الدم (عينتان على الأقل) ، السائل النخاعي ، غسل القصبات الهوائية. تبلغ حساسية طريقة المقايسة المناعية الإنزيمية حوالي 90٪ ، وخصوصية 90-99٪ ، في متلقي نخاع العظم الخيفي هذه الأرقام أقل وتساوي 60-70٪ و 80-90٪ ، على التوالي ، بسبب الاستخدام الوقائي الأدوية المضادة للفطريات (تقلل مضادات الفطريات من مستوى عتبة الجالاكتومان).

في 40٪ من الحالات يتم الكشف غالاكتومانفي الدم قبل مظاهر داء الرشاشيات الغازية ، والتي يتم تحديدها عن طريق فحص الكمبيوتر للرئتين ، وفي 70٪ قبل ظهور الأعراض السريرية للعدوى.

القيمة التشخيصية لاختبار الكشف عن المستضد فطر الرشاشياتفي حالة إجراء الدراسة بشكل متكرر. يجب أن يتم تحديد مستضد الرشاشيات في الدم مع الحمى أثناء العلاج بالمضادات الحيوية واسعة الطيف في المرضى الذين يعانون من قلة العدلات مرتين في الأسبوع ؛ مع الالتهاب الرئوي الذي يحدث أو يستمر على خلفية العلاج بالمضادات الحيوية ؛ عند الكشف عن بؤر في أنسجة الرئة (التصوير المقطعي).